检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第6期21卷 504-507页

作者：王庆敏陈蕊雯郭瀛军孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,... 详细信息

目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,体外培养小鼠脾细胞 ,用刀豆蛋白 A (Con A)和特异性抗原刺激 ,EL ISA试剂盒检测细胞因子 IL - 2和 IL - 4的水平 ,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外 ,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪 ,进行攻击实验 ,计算相对保护率。结果 :注射疫苗后的第 3周起 ,Ig G即为阳性 ,持续升高至第 8周 ;从第 2周起 ,小鼠血清 Ig G2 a为阳性 ,第 4周达到高峰。细胞因子检测表明 ,IL- 2水平远远高于空载体对照组 ,而 IL- 4含量却与空载体对照组无显著差异 ;实验组刺激指数明显高于空载体对照组。副肌球蛋白核酸疫苗对仔猪的相对保护率为 80 %。结论 :猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗在小鼠动物实验中引发了以 Th1型免疫应答占优势的全面免疫应答。pc DNA3- Ag B核酸疫苗对仔猪具有较好的免疫保护性。

关键词：猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸类疫苗 Th1免疫应答

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猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 508-510页

作者：吴丹郭瀛军林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水... 详细信息

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水平 ,并进行仔猪的免疫保护实验。结果 :免疫小鼠第 3周出现特异性 Ig G应答 ,第 8周 Ig G水平达到最高 ;小鼠血清的 Ig G2 a检测显示 ,第 2周 Ig G2 a应答即为阳性 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪使其获得了 73%的保护率。结论 :猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应。

关键词：猪囊尾蚴免疫保护保护性抗原CC1-cDNA

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钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB的构建及其免疫机制的初步研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 511-514页

作者：寇志华张平武孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠... 详细信息

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠腹腔巨噬细胞分泌的 TNF活性的影响。结果 :该疫苗对同型钩体的保护率为 10 0 % ,特异性抗体水平在疫苗注射第 6周达到高峰 ,TNF的活性明显增高。结论 :DNA疫苗 pc D- fla B对同型钩体感染有较强的保护作用 ;能够有效地诱导机体的体液免疫应答 ,并增强巨噬细胞所产生的 TNF的活性。

关键词：钩端螺旋体 DNA 疫苗巨噬细胞肿瘤坏死因子

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乙肝核心抗原DNA疫苗的构建及其免疫原性分析

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 501-503页

作者：陈蕊雯林懿戴建新周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建 HBV核心抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内的表达及其免疫原性。方法 :采用 PCR法从 HBV全基因 DNA中获得核心抗原 DNA片段 ,并将其重组到 pc DNA3载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树 ,并检测其抗HBc Ig G。结果 :... 详细信息

目的 :构建 HBV核心抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内的表达及其免疫原性。方法 :采用 PCR法从 HBV全基因 DNA中获得核心抗原 DNA片段 ,并将其重组到 pc DNA3载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树 ,并检测其抗HBc Ig G。结果 :构建了乙肝核心抗原候选核酸疫苗 pc DNA3- HBc。免疫接种该疫苗后第 2周抗 HBc Ig G水平开始升高 ,小鼠至第 9周 ,树至第 7周升至峰值。结论 :构建的 pc DNA3- HBc

关键词： DNA 乙型肝炎核心抗原乙型肝炎 HBV

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转基因动物研究的现状与展望

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中国科学基金 2000年第1期14卷 23-26页

作者：戴旭明李坚傅继梁第二军医大学医学遗传教研室医学分子遗传学开放实验室上海200433

简要评述了国内外转基因动物研究的现状,归纳了目前常用的几种转基因动物遗传修饰的策略,比较分析了几种转基因动物建立途径的特点以及存在的问题。在此基础上介绍了国家自然科学基金重点项目“医学转基因动物模型研究”的研究内容,并... 详细信息

简要评述了国内外转基因动物研究的现状,归纳了目前常用的几种转基因动物遗传修饰的策略,比较分析了几种转基因动物建立途径的特点以及存在的问题。在此基础上介绍了国家自然科学基金重点项目“医学转基因动物模型研究”的研究内容,并对转基因动物研究的未来发展作了展望。

关键词：转基因动物遗传修饰基因组修饰

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基因组文库及基因小库构建在基因克隆中的应用

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第二军医大学学报 2000年第3期21卷 299-300页

作者：张平武邹蓓艳王慧丽孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 复旦大学遗传所

在基因克隆的方法选择中,构建基因组文库并筛选是克隆完整基因的经典方法, 但构建基因组文库技术复杂,步骤繁琐.若构建的文库不够大,常筛选不到所需的目的基因.因此我们尝试用另一种方法,即在试探性的Southern blot基础上构建基因小库,... 详细信息

在基因克隆的方法选择中,构建基因组文库并筛选是克隆完整基因的经典方法, 但构建基因组文库技术复杂,步骤繁琐.若构建的文库不够大,常筛选不到所需的目的基因.因此我们尝试用另一种方法,即在试探性的Southern blot基础上构建基因小库,从中筛选目的基因,可以大大减少筛库的工作量并提高筛到目的基因的成功率.现以克隆酵母Candida kefyr 的菊粉酶全基因为例将这两种方法加以比较.

关键词：基因组文库基因小库基因克隆

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重组酶介导的盒式交换及其应用

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生命的化学 2000年第6期20卷 268-271页

作者：郑敬民李坚傅继梁第二军医大学医学遗传教研室上海200433

重组酶介导的盒式交换(recombinasemediated cassette exchange，RMCE)是近年发展起来的一种基因定点整合新方法。与同类方法相比，它具有定点、高效、简单而又可对基因组进行反复修饰等特点，因而在研究基因功能、分析顺式作用成分以... 详细信息

重组酶介导的盒式交换(recombinasemediated cassette exchange，RMCE)是近年发展起来的一种基因定点整合新方法。与同类方法相比，它具有定点、高效、简单而又可对基因组进行反复修饰等特点，因而在研究基因功能、分析顺式作用成分以及构建各种转基因动物、建立人类疾病动物模型等方面具有很大的应用价值。本文拟就RMCE的原理、策略、特点及应用等方面作一综述。

关键词：重组酶盒式交换基因定点整合原理

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p35^(Nck5a)基因重复性打靶载体的构建和ES细胞基因打靶研究

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Acta Genetica Sinica 2000年第8期27卷 659-665页

作者：周常文傅继梁薛红第二军医大学医学遗传学教研室上海200433 香港科技大学生物化学系

为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入... 详细信息

为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，获得２４５个双药物抗性的细胞克隆，细胞存活率为６．２２ × １０－５。经ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定，２个ＥＳ细胞克隆发生了ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的重复，同源重组率为５．０８×１０－７、负向选择系统的应用使同源重组事件的富集效率提高了７倍。为建立Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的转基因小鼠模型打下了基础。

关键词： p35^Nch5a基因基因打靶基因重复 NclK NFTS AD

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重组恶性疟原虫DNA质粒免疫小鼠及抗原表达的调控

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生物工程学报 2000年第1期16卷 13-16页

作者：谢文凯陈启宇汪群斌潘卫庆颜日辉陆德如中国科学院上海植物生理研究所上海200032 上海复星高科技集团有限公司上海200042 第二军医大学寄生虫学教研室上海200433 第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所上海200433

将恶性疟原虫MSP131基因序列,引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE,获得重组质粒pTRE31。将MSP131的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP131,亲和纯化后作检测用抗原。pTRE31与辅助质粒pTetoff(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,观察... 详细信息

将恶性疟原虫MSP131基因序列,引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE,获得重组质粒pTRE31。将MSP131的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP131,亲和纯化后作检测用抗原。pTRE31与辅助质粒pTetoff(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,观察DNA介导免疫情况。结果显示,四环素饲喂的小鼠4周时血清抗体阳转率为71%(1/14),而不饲喂四环素组可达100%(14/14),表明用pTRE31/pTetoff重组质粒组合直接注射小鼠有效地引发了针对疟原虫MSP131抗原的体液免疫反应,且可受控于四环素。不饲喂四环素组小鼠在12周后仍能维持抗体阳性,倍比稀释ELISA显示血清抗体滴度在4周、8周和12周内持续上升。饲喂四环素组小鼠4周后停止饲喂Tc,第8周和第12周检测仍有部分(60%)小鼠血清抗体阳转,而继续饲喂Tc的小鼠未有抗体阳转,暗示重组质粒DNA在小鼠体内可持续存在至少4周并仍具备表达功能。

关键词：恶性疟原虫 DNA疫苗四环素 Tet-off调控系统

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恶性疟裂殖子表面蛋白1合成基因在毕赤酵母中的表达

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生物工程学报 2000年第6期16卷 723-726页

作者：张冬梅潘卫庆陆德如医学生物技术和分子遗传研究所上海200433 第二军医大学病原生物学教研室

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1是当今疟疾疫苗主要的候选抗原。由于天然MSP1基因AT含量异常高(为 74% ) ,使得克隆全长天然基因无法实现。本文已全合成了msp1基因 (4940bp) ,解决了该天然基因在异源系统中不稳定的问题。为制备大量msp1重... 详细信息

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1是当今疟疾疫苗主要的候选抗原。由于天然MSP1基因AT含量异常高(为 74% ) ,使得克隆全长天然基因无法实现。本文已全合成了msp1基因 (4940bp) ,解决了该天然基因在异源系统中不稳定的问题。为制备大量msp1重组蛋白进行疫苗有效性试验 ,本研究建立了msp1基因在毕赤酵母中的表达 ,将合成的msp1基因克隆到毕赤酵母胞内表达载体 pPIC3 5 ,构建了重组质粒 pPIC3 5 /msp1,用电击转化毕赤酵母得到重组转化子 ,经PCR证实msp1基因已整合于毕赤酵母染色体中。含有重组表达质粒的毕赤酵母菌经甲醇诱导后表达出全长msp1重组蛋白。表达产物能与识别MSP1分子二硫键依赖构象表位的特异性单抗发生很强的反应 ,表明msp1重组蛋白至少在该表位构象上与天然蛋白一致。从毕赤酵母中分离得到大量msp1为开展该蛋白的结构与功能 ,特别是测定其疟疾保护性免疫提供可能。

关键词：毕赤酵母恶性疟原虫疟疾疫苗表面蛋白1

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