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人胚肺成纤维细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立

中国药理学与毒理学杂志 2001年第4期15卷 306-310页

作者：吴涛印木泉第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独... 详细信息

为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独立性生长及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测 .结果表明 :在促癌剂PMA作用下 ,WI38基因转染细胞发生了恶性转化 ,c Ha rasV12G基因使细胞对PMA的促癌敏感性增强 .由此可见。

关键词：基因转染细胞促癌剂佛波醇酯检测模型人胚肺成纤维细胞

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Toll样受体抗体抑制脂多糖激活巨噬细胞的吞噬活性

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 367-371页

作者：王梁华冯煜钟山朱玉平娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血... 详细信息

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血清培养亦在一定程度上抑制LPS激活巨噬细胞的吞噬作用 .结果证实TLR2能介导LPS的功能 ,而某些血清因子参与了介导LPS的信号转导过程。

关键词：脂多糖 TLR2 抗体巨噬细胞 TRAIL TNFα 吞噬活性激活抑制作用

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两种带色样品对SOS反应的影响

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毒理学杂志 2001年第2期 107-108页

作者：陆敦印木泉第二军医大学卫生毒理学教研室!上海200433

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胚胎异常发育中的细胞凋亡(二)

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卫生毒理学杂志 2001年第4期15卷 252-254页

作者：朱江波张天宝印木泉第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

众所周知,发育是一个受基因严密调控的过程,此过程中任一环节受到干扰都会影响胚胎的正常发育,出现畸形甚至死亡.发育过程中几乎所有组织都要发生程序性细胞死亡(PCD)或细胞凋亡(apoptosis),PCD是保证个体发育成熟的必需过程[1].但PCD... 详细信息

众所周知,发育是一个受基因严密调控的过程,此过程中任一环节受到干扰都会影响胚胎的正常发育,出现畸形甚至死亡.发育过程中几乎所有组织都要发生程序性细胞死亡(PCD)或细胞凋亡(apoptosis),PCD是保证个体发育成熟的必需过程[1].但PCD又是一易受到致畸物干扰的过程,致畸物可诱导(抑制)PCD,造成靶细胞的缺失、发育不良、生长过度等不良后果.因此PCD与胚胎异常发育的关系近年来受到人们的密切关注,成为畸胎学或发育毒理学的重要研究课题.我们将扼要介绍几种致畸物的致畸作用与细胞凋亡的关系,并对致畸物诱发凋亡的可能途径作一概述.

关键词：细胞凋亡致畸物胚胎畸形

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胚胎正常发育中的细胞凋亡及其意义(一)

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卫生毒理学杂志 2001年第4期15卷 249-251页

作者：朱江波张天宝印木泉第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

死亡是生命的自然规律.这适用于整个机体,也适用于单个细胞.细胞死亡是生命现象中不可逆转的终止,是一个普遍的现象.既发生于正常的胚胎发育中,也发生于成体组织.根据细胞死亡的形态学、生物化学和生理学特征的不同.可将细胞死亡分为两... 详细信息

死亡是生命的自然规律.这适用于整个机体,也适用于单个细胞.细胞死亡是生命现象中不可逆转的终止,是一个普遍的现象.既发生于正常的胚胎发育中,也发生于成体组织.根据细胞死亡的形态学、生物化学和生理学特征的不同.可将细胞死亡分为两大类:细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)或程序性细胞死亡(programmed cell deathPCD)1.尽管对PCD是否与细胞凋亡等同仍有不同的看法,但由于大多数PCD呈现细胞凋亡的形态特征,而且在致畸物诱发胚胎异常发育中通常表现为细胞凋亡的形态特征,故此处均用细胞凋亡表示之.近几年研究表明,细胞凋亡这种死亡的新模式既是胚胎正常发育中的重要事件,又是致畸因素导致胚胎异常发育的重要形式[2,3].因此,细胞凋亡的研究有助于胚胎正常和异常发育机制的阐明.现扼要介绍有关胚胎正常发育中的细胞凋亡的研究现状,概述细胞凋亡在正常胚胎发育中的意义.

关键词：细胞凋亡胚胎发育功能

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人THANK cDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第4期21卷 460-464页

作者：吴东沈锋娄永华彭敏焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学基础部分子毒理学教研室

目的　克隆THANKcDNA ,并在大肠杆菌中进行表达。方法　采用RT PCR技术 ,从人外周血单个核细胞的总RNA中扩增人THANK全长编码区基因及THANK胞外区编码基因 ,PCR产物直接克隆于pMD 18T载体中 ,重组克隆进行DNA测序。将测序证实的THANK胞... 详细信息

目的　克隆THANKcDNA ,并在大肠杆菌中进行表达。方法　采用RT PCR技术 ,从人外周血单个核细胞的总RNA中扩增人THANK全长编码区基因及THANK胞外区编码基因 ,PCR产物直接克隆于pMD 18T载体中 ,重组克隆进行DNA测序。将测序证实的THANK胞外区基因亚克隆到原核表达载体pET 11a中。阳性重组子 ,以 1mmol/LIPTG进行诱导表达 ,以SDS PAGE分析THANK胞外区的表达。对表达的蛋白作初步纯化处理后 ,进行生物学活性检测。结果　RT PCR扩增出一个85 8bp的DNA片段 ,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示 ,该片段为编码人THANK的cDNA ,与公布的人THANK基因序列一致。将胞外区片段克隆入表达载体 ,转化大肠杆菌表达后发现 ,与阴性对照相比 ,在相对分子质量 (Mr) 2 6× 10 4 处多显示出一条条带。对该蛋白进行初步活性测定显示其可显著地抑制U937细胞的生长。结论　本实验成功地克隆了人THANK基因 ,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌中进行了表达 ,表达的重组蛋白可抑制U937细胞的生长。

关键词： THANK RT-PCR 基因克隆基因表达大肠杆菌

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重组人可溶性凋亡素-2配体在Pichia系统中的表达

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第二军医大学学报 2001年第3期22卷 248-251页

作者：王梁华朱玉平娄永华彭燕冯煜焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 ... 详细信息

目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 d,SDS- PAGE和 Western- blotting确认表达 ,L 92 9细胞鉴定活性。结果 :发现在酵母细胞中重组表达的 TRAIL在 SDS-PAGE上占总蛋白的 5 0 %以上 ,用抗人 TRAIL多抗可以确认表达了 TRAIL重组分子 ,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的 TRAIL有明显提高 ,并能诱导几株肿瘤细胞 DNA片段化 ,说明 TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论 :在 Pichia系统中正确表达了人可溶性 TRAIL分子。

关键词：重组人可溶性凋亡素-2 Pichia表达系统细胞毒甲醇营养型酵母

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诱导活化的外周血单个核细胞THANK表达的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第4期17卷 304-306页

作者：吴东沈锋娄永华焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学分子毒理学教研室上海200433

目的分析不同刺激下外周血单个核细胞(PBMC)中THANK基因的表达，并克隆全长的人THANK基因。方法采用将常规方法分离的外周血单个核细胞(PBMC)培养于含100ml/L FCS的RPMI 1640中，并以不同浓度的LPS、TNF-α、IL-2、IFN-γ、PHA及PMA刺... 详细信息

目的分析不同刺激下外周血单个核细胞(PBMC)中THANK基因的表达，并克隆全长的人THANK基因。方法采用将常规方法分离的外周血单个核细胞(PBMC)培养于含100ml/L FCS的RPMI 1640中，并以不同浓度的LPS、TNF-α、IL-2、IFN-γ、PHA及PMA刺激不同时间。以RT-PCR法，分析PMBC中THANK基因的转录表达，并克隆相应的全长人THANK基因。结果RT-PCR分析表明，当用IFN-γ刺激PMBC 72h后，可诱导THANK基因明显表达;而IL-2、LPS、TNF-α、PHA和PMA则不能诱导其表达。采用PCR产物克隆的方法，克隆了人THANK基因，并经DNA序列测定证实。结论克隆得到了人THANK基因，为进一步研究THANK的功能打下了基础。

关键词：外周血单个核细胞 THANK 基因克隆基因表达肿瘤 TNF超家族

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人THANK基因的克隆和表达

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 645-647页

作者：吴东沈锋娄永华朱玉萍焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学础医学部分子毒理学教研室第二军医大学基础医学部分子毒理学教研室

目的 :克隆人 THANK基因全长及胞外区片段 ,将其胞外区在大肠杆菌中表达。方法 :采用 RT- PCR技术 ,从人白血病细胞系 HL - 6 0细胞总 RNA中扩增人 THANK c DNA ,并定向克隆于 p MD18- T载体 ,经测序证实 ,再亚克隆 THANK的胞外区片段... 详细信息

目的 :克隆人 THANK基因全长及胞外区片段 ,将其胞外区在大肠杆菌中表达。方法 :采用 RT- PCR技术 ,从人白血病细胞系 HL - 6 0细胞总 RNA中扩增人 THANK c DNA ,并定向克隆于 p MD18- T载体 ,经测序证实 ,再亚克隆 THANK的胞外区片段至 p ET表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。结果 :RT- PCR扩增出一个 85 8bp的 DNA片段 ,该片段与公布的人THANK基因序列一致。诱导后 THANK胞外区在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为 2 .6万的蛋白质。结论 :成功地克隆了人 THANK基因 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为其功能的研究打下基础。

关键词：基因 THANK 聚合酶链反应克隆分子肿瘤坏死因子 TNF

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乙醇对胚胎发育与卵黄囊超微结构的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2001年第1期15卷 72-75页

作者：屈卫东吴德生张天宝张本忠邓莹张雪王云波四川大学公共卫生学院环境卫生学教研室四川成都610041 第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

为研究发育敏感期暴露于乙醇不同时间对胚胎发育和胚胎卵黄囊超微结构的影响 .以体外全胚胎培养和电镜技术研究 0 .2g·L- 1乙醇不同时间作用时对胚胎发育影响及胚胎卵黄囊超微结构改变 .结果表明发育异常与乙醇作用存在时间效应... 详细信息

为研究发育敏感期暴露于乙醇不同时间对胚胎发育和胚胎卵黄囊超微结构的影响 .以体外全胚胎培养和电镜技术研究 0 .2g·L- 1乙醇不同时间作用时对胚胎发育影响及胚胎卵黄囊超微结构改变 .结果表明发育异常与乙醇作用存在时间效应关系 .0 .2g·L- 18h对胚胎发育和形态分化无明显影响 ,随时间延长除胚胎头长 ,体长 ,卵黄囊直径 ,蛋白质和DNA含量等主要发育指标进一步受抑制外 ,胚胎畸形 ,死亡率明显升高 .卵黄囊超微结构变化程度与染毒时间和胚胎发育状况相一致 ,乙醇可导致卵黄囊细胞内微绒毛和溶酶体数量减少 ,线粒体等部分细胞器内膜肿胀 .

关键词：乙醇胚胎发育卵黄囊超微结构醇中毒

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