检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第5期21卷 416-419页

作者：肖扬娄永华王路朱玉平焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子 (vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)基因进行克隆和表达 ,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法 :将可溶性人 VEGI基因克隆入载体 p U C19后测序 ;再将正确的 VEGI基... 详细信息

目的 :对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子 (vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)基因进行克隆和表达 ,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法 :将可溶性人 VEGI基因克隆入载体 p U C19后测序 ;再将正确的 VEGI基因亚克隆入表达载体 p PROEXHTb,IPTG诱导表达 ;初步纯化表达产物 ,检测对新生牛主动脉内皮细胞增殖抑制活性。结果 :可溶性人 VEGI可以直接抑制新生牛主动脉内皮细胞的增殖。结论 :VEGI是一种新的内皮细胞生长抑制因子 ,通过抑制新生血管形成可用于肿瘤治疗。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆基因表达

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基因芯片及其在医学研究中的意义

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第二军医大学学报 2000年第1期21卷 91-94,98页

作者：张天宝第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

基因芯片技术是90年代兴起的一项前沿生物技术,它可以将生物学中许多不连续的分析过程,移植到固相的介质芯片上,并使其连续化和微型化.

关键词：基因芯片基因表达 DNA 测序

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基于质粒的转基因小鼠致突变检测模型的研究进展

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中国公共卫生 2000年第6期16卷 570-571页

作者：曹洁印木泉第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

自1980年底,美国Yale大学的Gordon等[1]首次用显微注射法将含有疮疹病毒和SV40 DNA片段的重组质粒导入小鼠受精卵的雄性原核中,成功地建立了世界上第一个转基因动物模型以来,转基因动物的研究已逐步渗透到生命科学的各个领域,并已开始... 详细信息

自1980年底,美国Yale大学的Gordon等[1]首次用显微注射法将含有疮疹病毒和SV40 DNA片段的重组质粒导入小鼠受精卵的雄性原核中,成功地建立了世界上第一个转基因动物模型以来,转基因动物的研究已逐步渗透到生命科学的各个领域,并已开始在毒理学中得到应用.由于从动物基因组中能比较容易地重新分离转入的外源基因,并对其突变进行精细的分析(如测序、确定突变类型和突变谱等),因此应用转基因动物研究系统,不仅为突变机理的研究提供了直接的证据,也可以从整体水平上研究突变的组织特异性、突变与表达时间及其与细胞增殖的关系、突变与癌变的相互关系等,并能在同一动物体内进行基因突变和染色体畸变等多个遗传学终点的研究.可以说转基因动物是目前研究体内基因突变唯一可行而有效的四维系统.

关键词：转基因动物致突变检测模型质粒研究进展

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废气煤烟颗粒提取物诱发DNA氧化损伤的实验研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 874-876页

作者：仲伟鉴印木泉第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :观察煤烟颗粒诱发 DNA氧化损伤及其可能机制。方法 :应用 ESR波谱技术分析测定研究煤烟颗粒的自由基性质结构信息 ;应用 udenfriend反应体系研究其对 DNA氧化损伤作用。结果 :ESR分析显示煤烟颗粒的 g值为 2 .0 0 16 ,近似半醌... 详细信息

目的 :观察煤烟颗粒诱发 DNA氧化损伤及其可能机制。方法 :应用 ESR波谱技术分析测定研究煤烟颗粒的自由基性质结构信息 ;应用 udenfriend反应体系研究其对 DNA氧化损伤作用。结果 :ESR分析显示煤烟颗粒的 g值为 2 .0 0 16 ,近似半醌自由基 QH·性质 ;可诱发脱氧核糖 (d R)或脱氧腺苷 (d A)羟化降解 ,羟自由基清除剂 DMSO和甘露醇能抑制这种效应。燃油烟颗粒的 g值为 2 .10 0 8,宽谱 ,类似大气中飘尘自由基性质 ;不能诱发 d R和 d A的羟化降解作用。结论 :煤烟颗粒可诱发 DNA氧化损伤 ,其可能机制是煤烟颗粒中 QH·自氧化途径 (非酶反应 )。

关键词：煤烟颗粒脱氧核糖羟化降解 DNA氧化损伤

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超临界流体萃取-胶束电动毛细管色谱法测定银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素的含量

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第二军医大学学报 2000年第10期21卷 958-960页

作者：佘佳红柳正良王春燕陈燕第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学药学院药物分析教研室上海200433

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4... 详细信息

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4m l;改性剂 0 .2 ml乙醇。 MECC条件 :空心熔融石英毛细管柱 ( 5 5 cm× 75μm ) ;缓冲液为磷酸二氢钠 -硼砂 =2 5 - 6 .2 5mm ol/L ( p H 8.5 ) ;SDS 35 mmol/L ;检测波长 2 5 4nm。结果 :SFE时改性剂对萃取效率的影响最大 ;MECC以肉桂酸为内标 ,在 2 1.2～ 10 6 .0μg/ml和 2 0 .0～ 10 0 .0μg/ml范围内 ,槲皮素和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。 40 ,6 0和 80μl槲皮素的加样回收率分别为 93.87% ,94.0 2 %和 94.10 % ;40 ,6 0和 80μl山奈素的加样回收率分别为 94.5 0 % ,94.17%和 94.2 5 %。结论 :SFE与 MECC法联用 ,简便快速 ,可用于银杏叶粗提物中的黄酮类成分的分离分析。

关键词：银杏叶粗提物斛皮素山奈素 SFE-MECC法

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乙基亚硝基脲诱发转基因小鼠体内基因突变及微核形成

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中华预防医学杂志 2000年第1期34卷 28-30页

作者：曹洁印木泉陈建泉徐少甫上海市第二军医大学卫生毒理学教研室 200433 扬州大学农学院动物医学系

目的　用致突变剂乙基亚硝基脲 (ENU)验证基于pUC 118NX质粒的转基因小鼠用于体内诱变研究的可行性。方法　用酶切、环化方法从经过和未经过ENU诱变处理的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠脾脏组织DNA中重新分离pUC 118NX质粒 ,使其转化DH10B... 详细信息

目的　用致突变剂乙基亚硝基脲 (ENU)验证基于pUC 118NX质粒的转基因小鼠用于体内诱变研究的可行性。方法　用酶切、环化方法从经过和未经过ENU诱变处理的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠脾脏组织DNA中重新分离pUC 118NX质粒 ,使其转化DH10B宿主菌并铺氨苄青霉素抗性平板培养后喷洒邻苯二酚溶液 ,通过菌落颜色不同筛选突变体 ,并对突变靶基因xylE测序分析以确定突变类型。同时取该转基因小鼠外周血及骨髓细胞 ,观察ENU对转基因小鼠微核形成率的影响。结果　转基因小鼠脾脏组织xylE基因自发突变率 <4 79× 10 - 5,经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,脾组织基因诱发突变率为 19 83× 10 - 5,两者差异有显著性。ENU诱发小鼠脾组织基因突变的类型包括颠换( 5 0 % )、单 /双碱基插入 ( 3 7 5 % )和转换 ( 12 5 % )。经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,转基因小鼠外周血细胞微核率 ( 7 6‰ )和骨髓细胞微核率 ( 8 8‰ )均明显高于溶剂对照组 ,表明ENU可诱发该转基因小鼠染色体畸变。结论　基于pUC 118NX质粒的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠可用于同时测定体内基因突变和染色体畸变 ,有望成为一种新的评价化学物遗传毒性的检测系统。

关键词：小鼠转基因微核乙基亚硝脲 DNA损伤

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应重视新药审评机构改革后的新药申报工作

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第二军医大学学报 2000年第10期21卷 901-903页

作者：袁伯俊吴浩第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室新药评价中心上海200433

国家药品监督管理局( State Drug Administration,SDA)自1998年8月19日正式成立以来,按照国务院的统一部署,进行了一系列药品注册管理办法的改革,包括组织机构的调整 ,法规的修改、完善和补充等.尤其是对新药审批办法(含新生物制品审批... 详细信息

国家药品监督管理局( State Drug Administration,SDA)自1998年8月19日正式成立以来,按照国务院的统一部署,进行了一系列药品注册管理办法的改革,包括组织机构的调整 ,法规的修改、完善和补充等.尤其是对新药审批办法(含新生物制品审批办法)作了较大的修改,既考虑到与国际接轨,又结合了我国的实际情况,有利于保护并促进我国民族制药工业的发展,为加入WTO作了必要的准备.在强化药品监督管理的同时,还统一了药品监督管理机构,强调对新药研制开发的全过程进行严格、系统的监督管理,这对于保证临床用药的安全有效性,促进我国的新药研究与开发,提高我国的新药研制水平,保障人民身体健康 ,保持社会稳定,促进经济发展将起到积极的作用.

关键词：新药审评机构机构改革申报工作

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人TRAIL在毕氏酵母表达系统中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2000年第5期16卷 420-424页

作者：王梁华焦炳华第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海

目的在甲醇营养型酵母（Ｐｉｃｈｉａ）中，表达人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）分子。方法将可溶性ＴＲＡＩＬ基因片段插入酵母表达载体ｐＩＣ３．５，经氯化锂转化酵母ＧＳ１１５，甲醇诱导表达，５ｄ后用... 详细信息

目的在甲醇营养型酵母（Ｐｉｃｈｉａ）中，表达人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）分子。方法将可溶性ＴＲＡＩＬ基因片段插入酵母表达载体ｐＩＣ３．５，经氯化锂转化酵母ＧＳ１１５，甲醇诱导表达，５ｄ后用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行分析，并用Ｌ９２９细胞测定其活性。结果在酵母细胞中表达的ＴＲＡＩＬ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析占总蛋白的５０％以上。

关键词：甲醇营养型酵母 TRAIL 毕氏酵母表达系位表达

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THANK基因的克隆和序列分析

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免疫学杂志 2000年第6期16卷 432-435页

作者：吴东沈锋娄永华焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学基础部分子毒理学教研究室上海200433

目的克隆THANK基因全长及胞外区片段并测序。方法采用RT-PCR技术,从人白血病细胞系HL-60细胞总RNA中扩增人THANK cDNA,并定向克隆于pMD-18 T载体,转染大肠杆菌、抽提质粒后,用ABI PRISM^TM 377XL DNA自动测序仪测序。结果RT-PCR扩增... 详细信息

目的克隆THANK基因全长及胞外区片段并测序。方法采用RT-PCR技术,从人白血病细胞系HL-60细胞总RNA中扩增人THANK cDNA,并定向克隆于pMD-18 T载体,转染大肠杆菌、抽提质粒后,用ABI PRISM^TM 377XL DNA自动测序仪测序。结果RT-PCR扩增出一个858bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示:该858bp片段为编码人THANK的cDNA,与公布的人THANK 基因序列一致。结论本实验成功地克隆了人THANK基因,为进一步表达人THANK基因并研究其功能,开发与临床应用奠定了基础。

关键词：人THANK基因 PT-PCR cDNA 克隆免疫治疗肿瘤

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人CCR55′侧翼调控序列克隆测定及基序分析

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1059-1061页

作者：郭葆玉张淑英余建国道书艳卞广兴第二军医大学药学院生化药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 济南军区第88医院肝病研究中心

目的 :克隆人 CCR5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法 :设计单引物 ,利用单向多循环 PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA,PCR产物作为序列分析模板。结果 :得到长为 1.5 kb的人 CCR5 5′侧翼调控序... 详细信息

目的 :克隆人 CCR5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法 :设计单引物 ,利用单向多循环 PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA,PCR产物作为序列分析模板。结果 :得到长为 1.5 kb的人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA序列 ,并对该区域的基序进行了分析。结论 :该方法适合于基因组 DNA,特别是逆向扩增一些读框区 5′侧翼调控序列。

关键词：调控序列 CCR5 基序分析克隆

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