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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 561-563页

作者：刘鹏飞吴孟超陈汉钱光相傅继梁第二军医大学东方肝胆外科医院第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：研究原发性肝癌ＣＤ４４ｖ的表达与其侵袭转移的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法及术后随访分析５４例原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况及其与侵袭转移的关系。结果：９２．５９％的病例肝癌组织ｃＤ４４ｖｍＲＮＡ阳性表... 详细信息

目的：研究原发性肝癌ＣＤ４４ｖ的表达与其侵袭转移的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法及术后随访分析５４例原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况及其与侵袭转移的关系。结果：９２．５９％的病例肝癌组织ｃＤ４４ｖｍＲＮＡ阳性表达，其中中－高度表达者占７７．７８％。在中－高度表达的病例中，肿瘤包膜的缺如、穿破，门静脉癌栓及瘤周卫星结节形成等侵袭转移相关指标明显高于阴性－微弱表达的病例（Ｐ＜０．００１）。随访回报４６例，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ中－高度表达者复发率（７７．１５％）明显高于阴性－微弱表达的病例（３６．３６％，Ｐ＜０．０２５），而前者生存率（２５．７１％）则明显较后者（７７．７８％）为低（Ｐ＜０．００５）。结论：原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达能够反映肝癌的侵袭转移潜能。

关键词： CD44 肝肿瘤复发 mRNA 表达癌

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人胚胎间充质干细胞向平滑肌细胞定向分化标志蛋白的选择

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第二军医大学学报 2004年第8期25卷 822-826页

作者：李红华刘厚奇刘太华汤淑萍熊俊惠宁第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部人体解剖学教研室长海医院妇产科

目的:选择平滑肌细胞(smooth musele cell,SMC)特异性标志蛋白,作为判断人胚胎间充质干细胞(mesenchymalstem cell,MSC)是否向SMC方向分化的指标。方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和RT-PCR等方法,检测SMC分化早、中、晚... 详细信息

目的:选择平滑肌细胞(smooth musele cell,SMC)特异性标志蛋白,作为判断人胚胎间充质干细胞(mesenchymalstem cell,MSC)是否向SMC方向分化的指标。方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和RT-PCR等方法,检测SMC分化早、中、晚期标志蛋白smooth muscle(SM)-α-actin、calponin、SM-myosin heavy chain(SM-MHC)在人胚MSC中的表达情况。结果:各实验均证明SM-α-actin和calponin蛋白在人胚MSC中表达。各种实验方法在人胚MSC中均检测不到SM-MHC蛋白及其mRNA的表达。结论:SM-MHC是一个有价值的SMC特异性标志物,可以做为判断人胚MSC向SMC方向分化与否的指标。

关键词：间充质干细胞胚胎平滑肌细胞细胞分化

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原发性肝癌CD44v mRNA表达与抑癌基因DCC mRNA表达、癌细胞DNA含量的关系

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 215-218页

作者：刘鹏飞吴孟超陈汉钱光相傅继梁第二军医大学东方肝胆外科医院第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：探讨原发性肝癌中ＣＤ４４ｖ表达与抑癌基因ＤＣＣ表达、癌细胞ＤＮＡ含量之间的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测３０例原发性肝癌中ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ和ＤＣＣｍＲＮＡ的表达情况，并根据ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况取２... 详细信息

目的：探讨原发性肝癌中ＣＤ４４ｖ表达与抑癌基因ＤＣＣ表达、癌细胞ＤＮＡ含量之间的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测３０例原发性肝癌中ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ和ＤＣＣｍＲＮＡ的表达情况，并根据ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况取２０例标本（阴性及微弱表达者１０例为Ⅰ组；高度表达者１０例为Ⅱ组）检测其癌细胞ＤＮＡ干系水平。结果：３０例受检标本中，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ中度以上表达２３例（７６．６７％），ＤＣＣｍＲＮＡ表达缺失者１８例（６０％），且两者基本重合。在ＤＮＡ干系水平方面，Ⅰ组病例二倍体明显高于Ⅱ组病例，异倍体则明显低于Ⅱ组的病例（Ｐ＜０．０１）；转移相关的临床病理指标Ⅱ组亦较Ⅰ组为重。结论：在原发性肝癌的侵袭转移过程中，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的高表达与ＤＣＣｍＲＮＡ的表达缺失关系密切，两者间可能有协同关系。此外，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ表达与肝癌细胞ＤＮＡ干系水平的变化一致，再次证实了ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ表达在肝癌侵袭转移中的重要性。

关键词：肝肿瘤细胞粘附分子 mRNA 抑癌基因 CD44V

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细胞因子对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子1的影响

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 289-290页

作者：郭志勇梁嘉靖崔若兰第二军医大学长海医院肾内科第二军医大学基础医学部生物学教研室

细胞因子对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子１的影响郭志勇梁嘉靖△崔若兰近年来免疫病理学研究已经证实细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作... 详细信息

细胞因子对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子１的影响郭志勇梁嘉靖△崔若兰近年来免疫病理学研究已经证实细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附，在免疫监测、炎症反应、...

关键词：肾小球肾炎系膜细胞细胞因子 ICAM-1

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重组人白血病抑制因子受体α亚基细胞外区的分子克隆

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第二军医大学学报 1997年第2期18卷 105-108页

作者：刘厚奇朱奎傅继梁第二军医大学基础医学部医学分子生物学开放实验室法国波尔多大学免疫学实验室第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：纯化可溶性白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体，获得特异性免疫原并利用衰变加速因子（ＤＡＦ）的附膜特性探讨ＬＩＦ受体的生物特性和功能。方法：采用基因重组技术，将ＬＩＦ受体α亚基（ｇｐ１９０）细胞外区（ｇｐ１９０ｓｏｌ）... 详细信息

目的：纯化可溶性白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体，获得特异性免疫原并利用衰变加速因子（ＤＡＦ）的附膜特性探讨ＬＩＦ受体的生物特性和功能。方法：采用基因重组技术，将ＬＩＦ受体α亚基（ｇｐ１９０）细胞外区（ｇｐ１９０ｓｏｌ）的Ｃ端与ＤＡＦＣ端３７个氨基酸连接，再将该重组基因载入ｐＧＥＸ５Ｔ表达系统。结果：在Ｅ．ｃｏｌｉＸＬ１中可高度表达一种Ｎ端为谷胱甘肽Ｓ转移酶和Ｃ端为１９０ｓｏｌＤＡＦ的融合重组蛋白。此蛋白在ＸＬ１中表达产物为不溶性包涵体，以变性剂８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解并复性后，可与交联在亲和层析柱上的谷胱甘肽（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）结合，从而一次性分离ＬＩＦ受体α亚基细胞外区。结论：大分子糖蛋白也能采用ｐＧＥＸ５Ｔ系统在大肠杆菌中表达，并通过谷胱甘肽亲和法纯化而作为免疫原。

关键词：白血病抑制因子受体分子克隆重组蛋白 GST

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噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 535-543页

作者：徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... 详细信息

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.

关键词：噬菌体展示分子进化结构域组合文库 protein A protein L

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HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 209-211页

作者：赵平戚中田潘卫崔晓红朱诗应陈景山第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ... 详细信息

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，检测ＤＮＡ疫苗编码的ＨＣＶ核心蛋白的表达。结果：３０％（３／１０）免疫小鼠产生ＨＣＶ核心蛋白抗体，该抗体能检测到重组质粒在ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达的ＨＣＶ核心蛋白。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白基因 DNA疫苗体液免疫应答

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气管内应用IL-18重组腺病毒对实验性肺转移癌的治疗作用

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 547-550页

作者：陈吉泉曹雪涛修清玉于益芝罗文侗第二军医大学长征医院呼吸内科上海200003 第二军医大学长征医院基础医学部免疫学教研室上海200003

目的 :研究气管内应用白细胞介素 18(IL - 18)重组腺病毒 (Ad IL - 18)对实验性肺转移癌的治疗作用。方法 :(1)小鼠气管内滴入 Ad IL - 18后 ,以 RT- PCR法检测小鼠肺组织中 IL - 18m RNA表达 ,EL ISA法测定局部及外周血 IL - 18及其相... 详细信息

目的 :研究气管内应用白细胞介素 18(IL - 18)重组腺病毒 (Ad IL - 18)对实验性肺转移癌的治疗作用。方法 :(1)小鼠气管内滴入 Ad IL - 18后 ,以 RT- PCR法检测小鼠肺组织中 IL - 18m RNA表达 ,EL ISA法测定局部及外周血 IL - 18及其相关因子的水平。 (2 ) C5 7BL / 6小鼠尾静脉注射 L ewis肺癌 3L L细胞以建立肺转移癌模型 ,观察气管内应用 Ad IL - 18对实验性肺转移癌的治疗作用 ,包括肺转移结节数、动物存活期、存活率变化等 ,并比较自然杀伤 (NK )细胞和细胞毒 T淋巴细胞 (CTL )活性。结果 :(1)气管内应用 Ad IL - 18后 6 h,小鼠肺内即可检测到 IL - 18m RNA表达 ;72 h后肺灌洗液中可测到 IL - 18,且高于外周血水平 ,而对照组肺灌洗液及外周血中均未检测到。 (2 )气管内滴入 Ad IL - 18对实验性肺转移癌有治疗作用 ,可使肺转移结节减少、动物的存活期延长及存活率升高 ,同时对 NK细胞、CTL 活性有增强作用。结论 :气管内应用 IL- 18重组腺病毒后可有效表达 ,并对实验性肺转移癌有治疗作用。

关键词：重组腺疾病肺转移肿瘤基因治疗 IL-18

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差别显示mRNA法的改良

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 383-385页

作者：戴建新王易伦刘宇健郭嘉陆德如第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

差别显示ｍＲＮＡ法的改良戴建新，王易伦，刘宇健，郭嘉，陆德如分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，是分子生物学研究领域的热点之一。目前，研究方法主要是：递减杂交［１］和差示杂交［２］；但这些方法技术难度大、重... 详细信息

差别显示ｍＲＮＡ法的改良戴建新，王易伦，刘宇健，郭嘉，陆德如分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，是分子生物学研究领域的热点之一。目前，研究方法主要是：递减杂交［１］和差示杂交［２］；但这些方法技术难度大、重复率低且工作量大。差别显示ｍＲＮＡ...

关键词： mRNA 基因筛选聚合酶链反应

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光滑型内毒素类脂A制备的新方法

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 175-176页

作者：焦炳华王梁华朱玉平周炳荣第二军医大学基础医学部微生物学教研室

光滑型内毒素类脂Ａ制备的新方法焦炳华，王梁华，朱玉平，周炳荣内毒素系存在于革兰阴性菌胞壁外膜中的脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）成分，在革兰阴性菌感染的发病机理中起着重要作用［１，２］。类脂Ａ... 详细信息

光滑型内毒素类脂Ａ制备的新方法焦炳华，王梁华，朱玉平，周炳荣内毒素系存在于革兰阴性菌胞壁外膜中的脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）成分，在革兰阴性菌感染的发病机理中起着重要作用［１，２］。类脂Ａ是ＬＰＳ的活性及毒性中心［３］因而...

关键词：内毒素类脂A 制备

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