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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 617-619页

作者：陆智杰俞卫锋孙卫民王振猛第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科上海200438 第二军医大学基础医学部免疫学教研室

目的 :探讨豚鼠氟烷性肝炎免疫应答中 Kupffer细胞的抗原递呈作用。方法 :雄性 Hartley豚鼠 16只 ,随机分为 2组 ,每组 8只。实验组 :每隔 4 2 d在 4 0 % O2 下吸入 1%氟烷 4 h,共 3次。对照组 :每隔 4 2 d吸入 4 0 % O2 4 h,共 3次。... 详细信息

目的 :探讨豚鼠氟烷性肝炎免疫应答中 Kupffer细胞的抗原递呈作用。方法 :雄性 Hartley豚鼠 16只 ,随机分为 2组 ,每组 8只。实验组 :每隔 4 2 d在 4 0 % O2 下吸入 1%氟烷 4 h,共 3次。对照组 :每隔 4 2 d吸入 4 0 % O2 4 h,共 3次。两组在最后一次吸入后 2 1d分离淋巴细胞和肝 Kupffer细胞 ,两种细胞按一定比例混合培养 3d。终止培养前 18h加入氚标记胸腺嘧啶核苷 (3H- Td R) ,通过淋巴细胞转化试验 (L TT)分析机体吸入氟烷后诱导免疫应答过程中 Kupffer细胞的抗原递呈作用。结果 :氟烷诱导豚鼠 Kupffer细胞对自体淋巴细胞有显著的促增殖作用 (P<0 .0 1) ,对同种异体淋巴细胞无促增殖作用 ,而未吸氟烷豚鼠 Kupffer细胞对自体 /同种异体淋巴细胞均无促增殖作用。 Kupffer细胞数目与淋巴细胞增殖有显著相关性(r=0 .995 0 )。用 TFA抗原致敏的 Kupffer细胞对淋巴细胞的促增殖能力作用更强 ,脾脏巨噬细胞不能增加 TFA- GSA抗原促进自体淋巴细胞增殖的作用。结论 :Kupffer细胞是氟烷性肝炎免疫机制中重要的抗原递呈细胞 ,能明显促进机体免疫应答 ,其抗原递呈作用受 MHC限制。

关键词：氟烷性肝炎免疫应答 Kupffer细胞抗原递呈作用 MHC限制库普弗细胞

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一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白——Annexin32对血凝及血栓形成的影响

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中国科学（C辑） 2002年第2期32卷 172-176页

作者：张毅陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响,对其主要药效学进行了研究,并与普通肝素进行了比较.兔、大鼠静脉给药,检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）、体外血栓形成... 详细信息

通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响,对其主要药效学进行了研究,并与普通肝素进行了比较.兔、大鼠静脉给药,检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）、体外血栓形成和大鼠体内血栓形成的变化.结果显示,按1mg/kg静脉注射Annexin32后,KPTT明显延长（P<0.01）,但小于肝素延长幅度,体外血栓形成仪测定显示血栓长度、重量均明显减少（P<0.01）,大鼠体内血栓重量明显降低（P<0.01）,提示Annexin32具有抗血栓形成的功能,并有对凝血系统影响小的特征.

关键词：钙依赖性磷脂结合蛋白 Annexin32 血凝时间血栓形成药效学生理功能凝血指标溶栓药物

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G-CSF基因治疗对大剂量化疗小鼠造血功能的影响

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第二军医大学学报 1998年第2期19卷 127-130页

作者：孙延平曹雪涛王全兴王元和施靖华高瀚第二军医大学长征医院普通外科第二军医大学基础医学部免疫教研室

目的：研究成纤维细胞介导的Ｇ－ＣＳＦ基因治疗对于大剂量化疗后结肠癌小鼠造血功能的影响。方法：分别将重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）及分泌Ｇ－ＣＳＦ的成纤维细胞埋植于接受大剂量化疗后的结肠癌小鼠腹腔内，观察结肠癌小鼠... 详细信息

目的：研究成纤维细胞介导的Ｇ－ＣＳＦ基因治疗对于大剂量化疗后结肠癌小鼠造血功能的影响。方法：分别将重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）及分泌Ｇ－ＣＳＦ的成纤维细胞埋植于接受大剂量化疗后的结肠癌小鼠腹腔内，观察结肠癌小鼠造血功能的改变。结果：ｒｈＧ－ＣＳＦ注射疗法及Ｇ－ＣＳＦ基因疗法不但均可明显提高结肠癌小鼠外周血白细胞数量（Ｐ＜０．０５），还能明显减轻大剂量化疗后荷瘤小鼠外周血白细胞的降低程度；Ｇ－ＣＳＦ基因治疗后，大剂量化疗后结肠癌小鼠外周血血小板数量降低程度也轻于对照小鼠，但其恢复过程比较缓慢；并能明显提高化疗及未经化疗的结肠癌小鼠的脾脏质量（Ｐ＜０．０１），促进化疗后小鼠脾脏和骨髓ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵ－ＭＫ，ＣＦＵ－Ｓ水平的恢复。结论：Ｇ－ＣＳＦ基因治疗较ｒｈＧ－ＣＳＦ注射疗法更显著地减轻大剂量化疗后外周血白细胞的降低程度、促进骨髓和脾脏造血功能的恢复。

关键词：基因治疗结肠肿瘤造血功能 G-CSF

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壳多糖对不同来源成纤维细胞生物学特性的影响

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 288-291页

作者：张敬德邢新韩德平薛春雨杨志勇李蠡袁斯民王守界第二军医大学长海医院整形外科上海200433 基础医学部免疫学教研室

目的 :探讨壳多糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用。方法 :以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象 ,正常皮肤成纤维细胞为对照 ,用含 0、0 .0 1 %、0 .0 2 %、0 .0 4 %、0 .0 8%、0 .1 6 %、0 .2 4 %、0 .4 8%壳多糖培养液... 详细信息

目的 :探讨壳多糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用。方法 :以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象 ,正常皮肤成纤维细胞为对照 ,用含 0、0 .0 1 %、0 .0 2 %、0 .0 4 %、0 .0 8%、0 .1 6 %、0 .2 4 %、0 .4 8%壳多糖培养液对不同来源成纤维细胞体外培养 72 h。MTT法检测不同来源成纤维细胞生长增殖情况 ,2 4 h3H-脯氨酸标记法检测胶原的相对量 ,定量酶联免疫试剂盒检测 TGF- β1 、b- FGF、IL- 8含量 ,同时观察细胞形态的变化。结果 :不同浓度壳多糖呈剂量依赖性抑制不同来源成纤维细胞增殖及胶原、TGF-β1 、b- FGF的分泌 ,同时促进 IL - 8的分泌 ,且对异常瘢痕组织的作用明显强于正常皮肤 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 ) ,而瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组间无明显差异。不同来源成纤维细胞无明显形态结构区别。结论 :壳多糖可以抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌胶原功能。

关键词：壳多糖成纤维细胞生物学特性增生性瘢痕瘢痕疙瘩

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基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 537-540页

作者：卢洋黎怀星李建秀傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 详细信息

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

关键词：转基因小鼠基因突变 PMTR1质粒

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新型血管内皮细胞抑制因子VEGI151的基因克隆表达及其活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 485-489页

作者：王路潘卫朱分禄焦炳华娄永华肖扬戚中田卫生毒理学教研室!上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室!上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI) 基因克隆表达内皮细胞生物学活性

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乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠的研究

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第二军医大学学报 1999年第4期20卷 212-215页

作者：胡卫江李建秀余宏宇戴德顺王新民孙伟郝光荣王肖鹏胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学教保处实验动物中心

目的：制备含有２．０拷贝乙型肝炎病毒（ＨＢＶ，ａｄｒ亚型）基因组的转基因小鼠，为ＨＢＶ相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法：应用受精卵原核显微注射的方法，产生ＨＢＶ转基因小鼠。用ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ... 详细信息

目的：制备含有２．０拷贝乙型肝炎病毒（ＨＢＶ，ａｄｒ亚型）基因组的转基因小鼠，为ＨＢＶ相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法：应用受精卵原核显微注射的方法，产生ＨＢＶ转基因小鼠。用ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ杂交、放射免疫、免疫组织化学以及亚显微结构分析等方法，研究外源基因在转基因小鼠体内的整合、表达以及复制。应用常规病理切片及血清生物化学方法分析转基因小鼠的病理学改变。结果：得到了４只整合有ＨＢＶ基因组的建立者小鼠，并证明ＨＢＶ基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，在肝、肾组织内可特异性表达、复制，并在肝细胞内发现了Ｄａｎｅ颗粒。转基因小鼠的肝、肾组织未见明显的病理学改变。结论：获得了ＨＢＶ的转基因小鼠，其病毒基因可以表达，并有病毒颗粒形成。该小鼠对于ＨＢＶ的各个基因产物是免疫耐受的，其基本生物学特性与人类的ＨＢＶ携带者特征相似。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠 Dane颗粒 adr亚型

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庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆

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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 301-306页

作者：朱分禄戚中田任浩宋燕斌邵力第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料... 详细信息

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的核苷酸及推测的氨基酸序列与原ＨＧＶ－Ｉｗ序列一致。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的克隆已经构建成功。该克隆的构建，为深入研究ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的致病性及致病机制、复制及转录和翻译机制。

关键词：全长cDNA 拼接克隆庚型肝炎病毒基因组

来源：评论

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人肿瘤细胞培养上清对树突状细胞表型和功能的影响

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第二军医大学学报 2002年第7期23卷 727-730页

作者：王正昕张明徽李楠王元和付志仁王强曹雪涛第二军医大学长征医院普通外科上海200003 第二军医大学长征医院基础医学部免疫学教研室

目的 :观察肿瘤细胞分泌的可溶性因子对树突状细胞表型和功能的影响 ,以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法 :体外分离单核细胞 ,加入白细胞介素 4 (IL - 4 )、粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)和肿瘤细胞培养上清体外培养树突状细... 详细信息

目的 :观察肿瘤细胞分泌的可溶性因子对树突状细胞表型和功能的影响 ,以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法 :体外分离单核细胞 ,加入白细胞介素 4 (IL - 4 )、粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)和肿瘤细胞培养上清体外培养树突状细胞 ,采用流式细胞术、同种异体混合淋巴细胞反应等方法观察肿瘤细胞上清对树突状细胞表型和功能的影响 ,并用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测了免疫抑制因子 IL - 10、血管内皮生长因子 (VEGF)和转化生长因子β1 (TGF-β1 )的 m RNA在人结肠、人卵巢和人肝脏肿瘤细胞中的表达。结果 :当培养体系中加入人肿瘤细胞培养上清后 ,树突状细胞表面 MHC 类分子和 CD80等共刺激分子的表达较低 ,树突状细胞刺激 T细胞增殖能力下降 ,且 IL - 10 m RNA、VEGF m RNA和 TGF-β1 m RNA在 3种肿瘤细胞中均有不同程度的表达。结论 :提示肿瘤细胞培养上清可能抑制树突状细胞的抗原提呈能力 ,肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子可能是导致肿瘤微环境中的树突状细胞功能低下、机体的免疫系统无法有效激活和启动抗肿瘤免疫反应的原因之一。

关键词：人肿瘤细胞培养上清树突状细胞表型功能抗原提呈组织相容性抗原Ⅱ类共刺激分子

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胃癌组织中树突状细胞浸润及其表面分子表达的临床意义

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 264-266页

作者：王正昕张明徽李楠王元和王强曹雪涛第二军医大学长征医院普通外科上海200003 第二军医大学长征医院基础医学部免疫学教研室

目的 :研究胃癌组织中树突状细胞 ( dendritic cells,DC)浸润及其表面分子表达的临床意义。方法 :采用酶消化胃癌组织 ,分离细胞后进行免疫组化 S- 10 0染色和流式细胞术分析 ,研究 15例胃癌组织中 DC的浸润及其表面分子表达与胃癌病理... 详细信息

目的 :研究胃癌组织中树突状细胞 ( dendritic cells,DC)浸润及其表面分子表达的临床意义。方法 :采用酶消化胃癌组织 ,分离细胞后进行免疫组化 S- 10 0染色和流式细胞术分析 ,研究 15例胃癌组织中 DC的浸润及其表面分子表达与胃癌病理分期的关系 ,并通过 RT- PCR技术分析了 IL - 10、VEGF和 TGF-β1 等免疫抑制因子在胃癌细胞中的表达。结果 :胃癌组织中 DC的数量少 ,而且其表面分子如 MHC 类分子、共刺激分子 B7- 1和粘附分子 ICAM- 1等呈低表达或不表达 ,DC的数量及其表面分子的表达与胃癌的病理分期负相关。免疫抑制因子 IL- 10、VEGF和 TGF- β1 在胃癌细胞中有高水平的表达。结论 :提示胃癌组织中

关键词：树突细胞胃肿瘤肿瘤分期膜蛋白质类肿瘤浸润

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