检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第1期23卷 57-60页

作者：娄永华彭艳焦炳华孔宪涛第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 长征医院实验诊断科

目的 :建立一组 p5 3截短突变群 ,分析缺失突变对 P5 3蛋白质功能的影响。方法 :以野生型 p5 3基因为模板 ,采用PCR定点突变技术 ,建立一组 P5 3蛋白质 N端和 (或 ) C端缺失的截短突变群 ,构建真核表达载体 ,基因转移 He L a细胞 ,分... 详细信息

目的 :建立一组 p5 3截短突变群 ,分析缺失突变对 P5 3蛋白质功能的影响。方法 :以野生型 p5 3基因为模板 ,采用PCR定点突变技术 ,建立一组 P5 3蛋白质 N端和 (或 ) C端缺失的截短突变群 ,构建真核表达载体 ,基因转移 He L a细胞 ,分析转移基因表达及 p5 3下游相关基因表达。结果 :构建的 p5 3截短突变群在 He L a细胞中表达 ,并对 p5 3下游相关基因的表达模式产生一定的影响。结论 :p5 3截短突变群可以作为一个研究 p5 3与下游基因相互作用的良好工具 ,对于研究 p5 3的功能调节机制有重要的价值。

关键词： p53基因基因点突变基因转染基因表达 HeLa细胞

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急性镉中毒大鼠睾丸氧化损伤机制的研究

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 64-66页

作者：周雍金慧英冯伟华胡惠民郑尊印木泉第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝... 详细信息

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝、睾丸两器官均发生严重的氧化损伤 ,细胞的抗氧化能力明显降低。但两者的变化规律不同 :肝脏在 6 h组 MT大量表达 (达正常值的 6 .7倍 )后 ,上述损伤逐渐减轻 ;而睾丸 MT表达的氧化损伤尽管在前 3h并不严重 ,但此后不断加剧。结论 :急性镉中毒时睾丸与肝氧化损伤规律明显不同 ,MT在睾丸中不能被诱导表达是睾丸对镉极其敏感的原因之一。

关键词：镉中毒氧化还原金属硫蛋白大鼠睾丸损伤

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端粒酶活性检测方法研究

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 102-103页

作者：张黎明印木泉贺茜陈志龙陈铁河毕洁第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 长海医院妇产科海军医学系防化医学教研室

端粒酶是已知的恶性肿瘤特异性最强的生物标志物，端粒酶活性在肿瘤的早期诊断以及预后评估中均有潜在价值。端粒酶活性也表达于生殖细胞、造血干细胞等非肿瘤细胞中，因而单凭端粒酶活性的有无难以区分正常细胞与肿瘤细胞，故必须建立... 详细信息

端粒酶是已知的恶性肿瘤特异性最强的生物标志物，端粒酶活性在肿瘤的早期诊断以及预后评估中均有潜在价值。端粒酶活性也表达于生殖细胞、造血干细胞等非肿瘤细胞中，因而单凭端粒酶活性的有无难以区分正常细胞与肿瘤细胞，故必须建立端粒酶活性的定量分析方法。本研究在文献[5]基础上建立了一种相对简便的端粒酶活性定量分析方法－端粒酶延伸产物液体闪烁计数法，并将其与银染端粒重复扩增法（TRAP）进行了比较。

关键词：端粒液体闪烁计数肝肿瘤肝细胞癌端粒酶 TRAP

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Toll样受体抗体抑制脂多糖激活巨噬细胞的吞噬活性

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 367-371页

作者：王梁华冯煜钟山朱玉平娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血... 详细信息

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血清培养亦在一定程度上抑制LPS激活巨噬细胞的吞噬作用 .结果证实TLR2能介导LPS的功能 ,而某些血清因子参与了介导LPS的信号转导过程。

关键词：脂多糖 TLR2 抗体巨噬细胞 TRAIL TNFα 吞噬活性激活抑制作用

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人THANK基因的克隆和表达

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 645-647页

作者：吴东沈锋娄永华朱玉萍焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学础医学部分子毒理学教研室第二军医大学基础医学部分子毒理学教研室

目的 :克隆人 THANK基因全长及胞外区片段 ,将其胞外区在大肠杆菌中表达。方法 :采用 RT- PCR技术 ,从人白血病细胞系 HL - 6 0细胞总 RNA中扩增人 THANK c DNA ,并定向克隆于 p MD18- T载体 ,经测序证实 ,再亚克隆 THANK的胞外区片段... 详细信息

目的 :克隆人 THANK基因全长及胞外区片段 ,将其胞外区在大肠杆菌中表达。方法 :采用 RT- PCR技术 ,从人白血病细胞系 HL - 6 0细胞总 RNA中扩增人 THANK c DNA ,并定向克隆于 p MD18- T载体 ,经测序证实 ,再亚克隆 THANK的胞外区片段至 p ET表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。结果 :RT- PCR扩增出一个 85 8bp的 DNA片段 ,该片段与公布的人THANK基因序列一致。诱导后 THANK胞外区在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为 2 .6万的蛋白质。结论 :成功地克隆了人 THANK基因 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为其功能的研究打下基础。

关键词：基因 THANK 聚合酶链反应克隆分子肿瘤坏死因子 TNF

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重组THANK诱导表达和变性、复性及纯化

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第二军医大学学报 2001年第9期22卷 823-826页

作者：吴东沈锋娄永华彭敏焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学基础医学部分子毒理学教研室

目的 :获得较纯的具有生物学活性的 THANK蛋白。方法 :THANK基因在大肠杆菌中高效表达 ,菌体超声破碎后 ,以洗涤剂反复洗涤包涵体。包涵体经 8mol/L尿素变性溶解后 ,再用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤层析初步纯化 ,对重组蛋白浓度、氧... 详细信息

目的 :获得较纯的具有生物学活性的 THANK蛋白。方法 :THANK基因在大肠杆菌中高效表达 ,菌体超声破碎后 ,以洗涤剂反复洗涤包涵体。包涵体经 8mol/L尿素变性溶解后 ,再用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤层析初步纯化 ,对重组蛋白浓度、氧化还原剂等复性参数进行优化和选择 ,将蛋白稀释复性。复性后组分经 Q Sapharose Fast Flow离子交换层析再次纯化 ,最后以 Sep hadex G- 2 5脱盐。结果 :得到了纯度 >97%、具有一定生物学活性的 THANK蛋白。结论 :THANK蛋白变性、复性及纯化方法的建立 ,为

关键词： THANK 重组蛋白质类基因表达基因调控免疫调节肿瘤细胞

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重组人可溶性凋亡素-2配体在Pichia系统中的表达

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第二军医大学学报 2001年第3期22卷 248-251页

作者：王梁华朱玉平娄永华彭燕冯煜焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 ... 详细信息

目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 d,SDS- PAGE和 Western- blotting确认表达 ,L 92 9细胞鉴定活性。结果 :发现在酵母细胞中重组表达的 TRAIL在 SDS-PAGE上占总蛋白的 5 0 %以上 ,用抗人 TRAIL多抗可以确认表达了 TRAIL重组分子 ,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的 TRAIL有明显提高 ,并能诱导几株肿瘤细胞 DNA片段化 ,说明 TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论 :在 Pichia系统中正确表达了人可溶性 TRAIL分子。

关键词：重组人可溶性凋亡素-2 Pichia表达系统细胞毒甲醇营养型酵母

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重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 639-641页

作者：肖扬焦炳华朱玉平娄永华王路第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。结果 :重组人可溶... 详细信息

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。结果 :重组人可溶性 VEGI可以直接抑制 ECV30 4、BAEC的增殖 ,强烈抑制 S180肉瘤生长并延长 S180腹水瘤小鼠的寿命。结论 :重组人可溶性 VEGI可通过抑制新生血管形成用于肿瘤治疗。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子内皮新生血管生长抑制物抗肿瘤药 VEGI

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重组人白介素-11对猕猴的长期毒性实验

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 360-363页

作者：吴浩袁伯俊刘俊平张淑英陆国才戴益民第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 长海医院病理科

目的 :观察重组人白介素 - 11(rh IL - 11)对猕猴的长期毒性。方法 :18只猕猴分别按体质量随机分为 4组。高剂量组6只 ,余均为 4只。低、中、高剂量分别为 0 .1、0 .3和 1.0 mg/kg。每天 sc给药 1次 ,连续 90 d。停药观察 30 d。观察... 详细信息

目的 :观察重组人白介素 - 11(rh IL - 11)对猕猴的长期毒性。方法 :18只猕猴分别按体质量随机分为 4组。高剂量组6只 ,余均为 4只。低、中、高剂量分别为 0 .1、0 .3和 1.0 mg/kg。每天 sc给药 1次 ,连续 90 d。停药观察 30 d。观察症状和检测项目有 :一般状况、心电图、血液学及生化指标、尿液、免疫、骨髓、脏器质量、组织学检查。结果 :所有给药组猕猴食量明显减少 ,体质量有所减轻 ,并有短暂性发热。低剂量组有 1只猕猴肢体活动受限 ,震颤。高剂量组 1只猕猴出现呕吐 ,1只死亡。给药组 RBC、Hb、Hct、MCV、MCH和 MCHC均明显降低 ,Plat则明显增高。 AL T、AST、L DH活性明显下降 ,TP和 Alb含量明显下降 ,AL P活性明显升高。给药 90 d各给药组猕猴均出现抗 IL - 11抗体 ,免疫复合物也明显增高。高、中剂量组骨髓有核细胞增生明显活跃。给药组心、肝的绝对质量有增大的趋势 ,相对质量明显增大。给药 90 d时 ,给药组猕猴肝、肾出现明显的细胞变性 ,中、高剂量组重于低剂量组。停药后 30 d上述变化均趋向恢复。结论 :rh IL - 11对猕猴的毒性靶器官及系统有 :血液系统、肝脏、肾脏、免疫系统、骨髓。其毒性损害均为可逆性。 rh IL - 11对猕猴的 3个月长期毒性安全剂量为每次 0 .1m g/kg。

关键词：重组人白细胞介素-11 毒性猕猴

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Toll样受体及其信号转导

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 304-308页

作者：王梁华司宇红焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 中国药科大学生物制药学院南京210009

Toll样受体 (TLR)介导着绝大部分哺乳动物、昆虫及植物的宿主防御 .TLR4与配体结合涉及膜抗原CD14和分泌蛋白MD 2的调节并一起形成受体复合物 ,然后与接头分子MyD88结合 ,使IRAK磷酸化 ,再使TRAF6寡聚化 ,随后激活控制着各种效应基因表... 详细信息

Toll样受体 (TLR)介导着绝大部分哺乳动物、昆虫及植物的宿主防御 .TLR4与配体结合涉及膜抗原CD14和分泌蛋白MD 2的调节并一起形成受体复合物 ,然后与接头分子MyD88结合 ,使IRAK磷酸化 ,再使TRAF6寡聚化 ,随后激活控制着各种效应基因表达的转录因子NF κB .

关键词：病原识别 Toll样受体信号转导

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