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中国海洋生化学术会议

作者：宋志刚许强芝焦炳华华东师范大学生命科学院第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室华东师范大学生命科学院

海洋生物活性物质,可以为新药研究提供先导化合物。海洋生物将是本世纪人们研究开发的重要药物资源。目前发现的许多海洋生物活性物质分离自海洋微生物(包括海洋细菌、海洋真菌和海洋放线菌),其化学结构丰富多样,许多分子结构新颖独特,... 详细信息

海洋生物活性物质,可以为新药研究提供先导化合物。海洋生物将是本世纪人们研究开发的重要药物资源。目前发现的许多海洋生物活性物质分离自海洋微生物(包括海洋细菌、海洋真菌和海洋放线菌),其化学结构丰富多样,许多分子结构新颖独特,是陆地生物所不具有的,海洋微生物有产生生物活性物质的巨大潜力(Carte, 1996)。由于筛选海洋生物活性物质是独特而且未知的,很难通过经验筛选或定向筛选来获得,而在分离过程中含量较低需要进行活性跟踪才能的到具有活性的化合物。因此如何建立灵敏、方便、快捷的活性物质筛选模型将对实验的成败起着决定性的作用。生物自显影技术可在筛选化合物时起到重要的作用,Homans A.L.等人已经利用它来筛选抗真菌的天然代谢产物。

关键词：生物自显影微生物活性物质纸片法硅胶板枯草芽抱杆菌黄瓜黑星病菌生物自显影技术化合物海洋放线菌培养皿生长抑制

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高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白

高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白

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中国海洋生化学术会议

作者：张兴群王梁华焦炳华缪辉南袁勤生第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室华东理工大学生物反应器国家重点实验室华东理工大学生物反应器国家重点实验室华东理工大学生物反应器国家重点实验室第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室

破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF或称Osteoprotegerin,OPG)可通过抑制破骨细胞形成、抑制成熟破骨细胞活性并诱导其凋亡实现对骨密度的调节,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。骨质疏松症、Paget’s病... 详细信息

破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF或称Osteoprotegerin,OPG)可通过抑制破骨细胞形成、抑制成熟破骨细胞活性并诱导其凋亡实现对骨密度的调节,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。骨质疏松症、Paget’s病、癌症骨转移等导致的骨破坏都与破骨细胞分化增殖异常活跃和骨吸收过量密切相关,因此,OCIF研究将为这些骨骼类疾病的预防和治疗提供帮助。本研究在获得OCIF活性结构域(OCIFAD)克隆与表达基础上,进一步考察了实现发酵罐高密度发酵表达可溶性OCIFAD融合蛋白的各种参数,实现了高表达。

关键词：高密度发酵高密度培养

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浙江舟山群岛12种海洋动物中生物活性物质的初步筛选

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中国海洋药物 2005年第1期24卷 37-39页

作者：范秋领黄才国缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

利用抗菌模型和肿瘤细胞毒模型,对浙江舟山群岛12种海洋动物中的生物活性物质进行了筛选。结果表明,7种动物的乙醇提取物有明显的抗金黄色葡萄球菌作用,其中,泥螺乙醇提取物的活性最强;大竹蛏和泥螺的乙醇提取物以及纵条肌海葵的水提... 详细信息

利用抗菌模型和肿瘤细胞毒模型,对浙江舟山群岛12种海洋动物中的生物活性物质进行了筛选。结果表明,7种动物的乙醇提取物有明显的抗金黄色葡萄球菌作用,其中,泥螺乙醇提取物的活性最强;大竹蛏和泥螺的乙醇提取物以及纵条肌海葵的水提物对SMMU-7721细胞有明显的细胞毒活性,IC50分别为89, 71,63.2μg·mL-1。

关键词：海洋动物抗菌活性肿瘤细胞毒活性筛选

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谈谈假设检验的目的

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数理医药学杂志 2005年第5期18卷 512-512页

作者：祝国强黄平滕海英刘庆欧第二军医大学基础医学部数理教研室上海200433 山西医科大学数学教研室

从假设检验的目的出发,对假设检验的统计思想作进行了初步探讨。

关键词：假设检验假设检验的目的原假设拒绝假设

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因氧化损伤与修复研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第10期31卷 887-894页

作者：汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入... 详细信息

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入细胞后 ,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似 ,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化 .由于线粒体的正常功能为修复机制所必需 ,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力 ,发现 9mmol/L四氧嘧啶培养细胞 1h后 ,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后 0 ,2 ,8和 2 4h时间点均无明显变化 .提取各组细胞的mtDNA ,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸 ,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA ,进行DNA印迹实验 ,地高辛抗体碱性磷酸酶系统显色 ,检测完整与断裂的mtDNA量 ,利用Poisson公式 (s=-lnP0 /P ,P0 为未断裂链光密度值 ,P为所有链光密度值总和 )计算一个mtDNA分子的平均损伤频率 ,结果显示 ,9mmol/L四氧嘧啶处理细胞 1h ,链平均损伤频率由对照的 0 11个 /分子增加至 5 6 0个 /分子 ,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤 ,除去药物后 8h ,绝大部分损伤可被修复 ,损伤频率减至

关键词：线粒体DNA tRNA^Leu(UUR) 突变人线粒体亮氨酰tRNA合成酶 A3243G 体外转录基因表达

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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 34-36页

作者：吴丹王庆敏陈蕊雯朱维佳陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 详细信息

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

关键词：猪囊尾蚴抗原 cC1 DNA疫苗蛋白质疫苗小鼠免疫应答

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Annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 44-46页

作者：王芳张毅颜宏利高远舰刘凡贺艳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1... 详细信息

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin

关键词： Annexin B1 磷脂酰丝氨酸结合活性血小板活化细胞凋亡

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Annexin B1分子结构、Ca^(2+)结合位点与进化的分析

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1078-1081页

作者：王凯慧郭瀛军高远舰王开宇颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :An... 详细信息

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :Annexin B1包含 4个序列和结构高度相似的结构域 ,含有 8个 Ca2 + 结合位点 ,二级结构显示蛋白主要由 α螺旋结构组成 ,具有寄生生物所特有的氨基酸残基。在物种进化上 ,Annexin B1和节肢动物为 1支 ,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为 1支 ,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为 1支。另外 ,Annexin B1与 Annexin A1在进化上有较强的亲缘关系 ,结构和功能上 An-nexin A1和 Annexin A5相似。结论 :Annexin B1具有膜联蛋白的结构特征 ,含有抗凝血、参与细胞凋亡、炎性反应、信号转导和细胞分化等细胞生理功能的氨基酸结构域和决定种属特异性的氨基酸序列 ,在进化上同源于 Annexin A1。

关键词： Annexin B1 结构功能进化

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融合蛋白AnxB1ScuPA表达质粒的构建及诱导条件优化

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1205-1207页

作者：贺艳颜宏利陆一鸣张毅杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/ L)诱导蛋白表达 ,并对表达条件进行优化 ,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件。结果 :Anx B1Scu PA在具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL2 1- RIL 表达量较其他宿主菌为高。在菌液生长至 D6 0 0 =0 .8时 ,加入诱导剂 IPTG至终浓度0 .4 m mol/ L ,诱导 0 .5 h后加入利福平至终浓度 15 0μg/ ml,可使蛋白 Anx B1Scu PA的表达量提高至菌体总蛋白的 36 %。结论 :通过选择具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL 2 1- RIL和优化诱导条件 ,使 Anx B1Scu PA在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：膜联蛋白亚家族单链尿激酶融合基因稀有密码子表达利福平

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单核苷酸多态性在复杂性状疾病易感基因研究中的应用

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 140-142页

作者：陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下... 详细信息

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下几个方面对 SNPs与复杂性状疾病易感基因研究的策略和方法学问题作了较为详细的综述 :(1 ) SNP特点及其有关网上资源 ;(2 )对直接测序法、单碱基延伸法、Taq Man法、基于实时动态荧光 (动力学 ) PCR的等位基因特异扩增法 ,变性高效液相色谱 (DHPL C)法和 OL A/ PCR的 SNPs基因分型方法的原理、通量和优缺点进行了比较 ;(3)

关键词：单核苷酸多态性复杂性状疾病易感基因发病机制基因组学

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