检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Pharmacologica Sinica 2003年第2期24卷 181-186页

作者：秦路平张巧艳田野苹郑汉臣黄矛黄宝康第二军医大学基础医学部免疫学教研室第二军医大学新药评价中心第二军医大学药学院生药学教研室第二军医大学药学院生药学教研室上海 200433 中国

目的:研究蛇床子总香豆素(TCFC)对破骨细胞的作用,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法:采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-(OH)2维生素D3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。通过相差显微镜下... 详细信息

目的:研究蛇床子总香豆素(TCFC)对破骨细胞的作用,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法:采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-(OH)2维生素D3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。通过相差显微镜下的形态观察,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨片上骨吸收陷窝的形成来鉴定破骨细胞。磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,计算机图像分析技术测定骨片上破骨性骨吸收陷窝的面积,原子吸收光谱法测定破骨细胞和骨片联合培养的培养上清中钙的浓度。结果:蛇床子总香豆素(TCFC)2.5—25mg/L抑制破骨细胞的形成和分化。TCFC0.25-25mg/L作用24-72h,可以显著抑制抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,TCFC 25mg/L作用48h和72h分别可使其降低26.3%和24.1%。TCFC 25mg/L可使破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝的面积减少25.05%,骨片中Ca2+的释放减少41.73%。结论:TCFC通过抑制破骨细胞的形成、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性和骨吸收作用减少骨质丢失。

关键词：蛇床子香豆素类骨质疏松破骨细胞骨吸收

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蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO,IL-1及IL-6的影响

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中国药学杂志 2003年第5期38卷 345-348页

作者：张巧艳秦路平田野苹郑汉臣黄宝康刘祖德黄矛第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部免疫学教研室上海200433 第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433

目的　以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法　原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶... 详细信息

目的　以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法　原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶细胞的生物测定法 ,分别检测与蛇床子总香豆素共育的无刺激或受LPS及TNF等刺激的成骨细胞培养上清液中NO ,IL 1和IL 6的含量。结果　蛇床子总香豆素在 0 .0 2 5～ 2 .5mg·L-1的范围内抑制成骨细胞自发地或在LPS及细胞因子刺激下产生NO ,IL 1及IL 6。结论　蛇床子总香豆素的抗骨质疏松作用与其抑制成骨细胞产生NO ,IL 1和IL

关键词：蛇床子总香豆素成骨细胞 NO IL—1 IL—6 骨质疏松

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N-硝基-L-精氨酸抗阿片类精神依赖作用

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中国药学杂志 2003年第1期38卷 25-28页

作者：万兴旺黄矛何雅琴李万亥万莉路长林第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院国际合作生物信号转导研究中心上海200438 第二军医大学药学院药理学教研室上海200433 第二军医大学长海医院药学部上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在吗啡、二氢埃托啡精神依赖形成中的作用。方法　采用小鼠腹腔注射吗啡、二氢埃托啡的方法建立小鼠精神依赖的条件性位置偏爱模型 ;采用荧光内过滤法测定小鼠脑内NO的含量 ;小鼠脑内cAMP/cGMP含... 详细信息

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在吗啡、二氢埃托啡精神依赖形成中的作用。方法　采用小鼠腹腔注射吗啡、二氢埃托啡的方法建立小鼠精神依赖的条件性位置偏爱模型 ;采用荧光内过滤法测定小鼠脑内NO的含量 ;小鼠脑内cAMP/cGMP含量采用放射免疫法测定。结果　小鼠吗啡、二氢埃托啡精神依赖形成过程中脑内NO ,cAMP ,cGMP的含量显著上升 ;腹腔注射NO2 Arg 5mg·kg- 1 可抑制吗啡、二氢埃托啡精神依赖升高小鼠脑内NO ,cAMP ,cGMP含量的作用。结论　NO在易化阿片类药物精神依赖形成中可能有一定作用 ;NO2 Arg抑制吗啡。

关键词：吗啡二氢埃托啡精神依赖一氧化氮

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人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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镉暴露大鼠睾丸支持细胞金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 965-968页

作者：任绪义周雍张建鹏仲燕冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸... 详细信息

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸支持细胞和肝脏组织的分离 .采用RT PCR技术分析mRNA ,并用光密度扫描作半定量分析 ,蛋白质定量用ELISA方法 ,原子分光光度吸收法测定镉浓度 .结果显示 :镉暴露 1h后肝脏MTmRNA即有明显的诱导表达 ,3h达高峰 ;支持细胞也有明显的诱导表达 ,6h达高峰 .镉暴露后肝脏MT有明显的诱导表达 ,但睾丸支持细胞不但未见MT增加而且还稍有下降 .提示 :a 镉对MTmRNA的诱导表达具有时间依赖性和组织特异性 .b 镉虽然能诱导睾丸MT的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸组织镉损伤

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地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 902-903页

作者：贺艳施柯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA... 详细信息

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。

关键词：地高辛标记 DNA探针核酸疫苗宿主菌基因组 DNA含量乙肝 DNA疫苗制品

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口蹄疫病毒融合表位基因在pET原核系统的高表达及产物的纯化

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 904-905页

作者：陈祖欢张洪英郭瀛军林懿朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

构建口蹄疫融合表位基因 - SG表达载体 p ET- SG,转化重组子与 K80 2 ,新鲜过夜菌以 2 %接种量接种 2 YT培养液 ,37℃培养 2 h后用 IPTG诱导 ,每隔 1h取样 ,共 8h。根据 SDS- PAGE结果 ,口蹄疫融合表位基因 - SG在 p ET原核表达系统可... 详细信息

构建口蹄疫融合表位基因 - SG表达载体 p ET- SG,转化重组子与 K80 2 ,新鲜过夜菌以 2 %接种量接种 2 YT培养液 ,37℃培养 2 h后用 IPTG诱导 ,每隔 1h取样 ,共 8h。根据 SDS- PAGE结果 ,口蹄疫融合表位基因 - SG在 p ET原核表达系统可获得较高表达 ,用 IPTG诱导 4 h蛋白表达量最高 ,用 Ni+柱亲和层析可得到较纯蛋白。

关键词：口蹄疫病毒融合表位基因 pET原核系统基因表达纯化

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CpG-寡核苷酸对免疫细胞基因表达的影响

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1086-1089页

作者：胡振林万斌周凤娟王静王庆敏孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,... 详细信息

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,寻找经CpG-ODN刺激后差异表达的基因。结果:CpG-ODN刺激RAW264.7细胞6 h后,2次芯片杂交筛选出重复差异表达的基因119条,其中74条上调,45条下调;这些基因涉及细胞周期、免疫调控、脂肪代谢、泡沫细胞形成、信号转导等过程。结论:CpG-ODN可广泛调控巨噬细胞内多种基因的表达,对相关基因群的进一步研究有助于深入了解CpG-ODN的作用机制。

关键词： CpG-寡核苷酸免疫细胞基因表达巨噬细胞表达谱芯片

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SARS相关冠状病毒S1融合蛋白的原核表达与纯化

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 704-706页

作者：张术王开宇郭瀛军黄力陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V) S1蛋白编码 DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 5 T/ S1,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增合成 S1片段 ,并克隆入载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把S1序... 详细信息

目的 :克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V) S1蛋白编码 DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 5 T/ S1,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增合成 S1片段 ,并克隆入载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把S1序列定向插入原核表达载体 p GEX- 5 T的多克隆位点 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,将纯化后的融合蛋白用于 SARS- Co V抗体阳性血清的检测。结果 :GST- S1融合蛋白以可溶形式表达 ,纯化后的蛋白用 EL ISA法检测 ,结果与对照相符。结论 :成功诱导原核表达并纯化出融合蛋白 S1,为将其应用于 SARS- Co

关键词：严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 S1融合蛋白原核表达纯化 SARS

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SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 710-712页

作者：黄力郭瀛军张术王开宇陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免... 详细信息

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。

关键词： SARS 冠状病毒M基因片段克隆 DNA疫苗体液免疫严重急性呼吸综合征

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