检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第8期24卷 902-903页

作者：贺艳施柯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA... 详细信息

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。

关键词：地高辛标记 DNA探针核酸疫苗宿主菌基因组 DNA含量乙肝 DNA疫苗制品

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基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 538-541页

作者：郑敬民李坚杨桦傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点... 详细信息

目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的置换型打靶载体 ,经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后 ,用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞 R1株进行基因转染 ,经 G418/ 6 - TG(6 - thioguanine)分组药物筛选 ,进行 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo载体的应用研究。结果 :得到了与设计一致的置换型打靶载体 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo;将线性化的打靶载体导入 ES细胞后 ,能与靶位点有效地发生同源重组 ,获得了 2 0个靶基因被灭活了的 ES细胞克隆。结论 :此研究成功构建了含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6针对小鼠 HPRT基因位点的置换型打靶载体。

关键词：基因打靶胚胎干细胞 HPRT基因 Cre重组酶小鼠

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绿色荧光蛋白基因在小鼠胚胎干细胞中表达效率的影响因素分析

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 319-321页

作者：杨桦戴建新戴旭明傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子 (EF)启动子的表达载体和所转染的克隆明显高于含 CMV启动子及含双拷贝 CMV - GFP表达单元的表达载体 ;而p CMV- GFP和 pd CMV - GFP所转染的克隆之间无显著差别 ;NIH3T3和 ES细胞之间比较 ,GFP的表达水平无显著差异。转录水平与蛋白质水平的测定结果相一致。结论 :(1)在 NIH 3T3和 R1胚胎干细胞系中 ,EF启动子引导下的 GFP基因表达效率明显高于 CMV启动子 ;(2 )外源基因表达单元的拷贝数在染色体中的少量增加 ,不能明显提高表达效率 ;(3)获得了在 R1胚胎干细胞系中稳定、高效表达 GFP的载体 ,为后续工作奠定了基础。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞基因表达影响因素小鼠

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lacⅠ 靶基因突变子的一种正向选择系统的建立

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 713-715页

作者：黎怀星卢洋姚真真傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：建立一种能正向选择ｌａｃⅠ靶基因突变子的选择系统。方法：比较了分别携带有ｌａｃⅠ－／ｌａｃＺα型质粒和ｌａｃⅠ＋／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌在ＬＢ完全培养基、以葡萄糖为碳源的Ｍ９基本培养基和以乳糖为碳源... 详细信息

目的：建立一种能正向选择ｌａｃⅠ靶基因突变子的选择系统。方法：比较了分别携带有ｌａｃⅠ－／ｌａｃＺα型质粒和ｌａｃⅠ＋／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌在ＬＢ完全培养基、以葡萄糖为碳源的Ｍ９基本培养基和以乳糖为碳源的Ｍ９／Ｌ基本培养基内的生长情况。结果：组成型ＤＨ１０Ｂ菌在Ｍ９／Ｌ固体培养基中只需培养２３ｈ便可观察到生长，而诱导型ＤＨ１０Ｂ菌则需培养８８ｈ才可观察到生长，但在ＬＢ和Ｍ９培养基内两者的生长速度却相同；当将少量的组成型ＤＨ１０Ｂ菌与大量的诱导型ＤＨ１０Ｂ菌混合接种于Ｍ９／Ｌ固体培养基上培养时，Ｍ９／Ｌ固体培养基能从约２．７×１０６的ｌａｃⅠ＋型ＤＨ１０Ｂ菌中将少量的ｌａｃⅠ－型ＤＨ１０Ｂ菌筛选出来。结论：本研究建立了一种在特定时间内只选择生长携带有ｌａｃⅠ－／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌落。

关键词：正向选择 lacⅠ靶基因基因突变子

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影响核酸疫苗应用研究的若干问题

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 353-354页

作者：孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于... 详细信息

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于具有可诱发全面的免疫应答、提供同种异株交叉保护作用、能制备抗多种病原体的多价疫苗、兼有预防和治疗的作用等优点,且制备简单、成本较低、容易储存运输,自上世纪90年代初问世以来,已在多种疾病[1～3]的防治研究中显示出巨大的应用潜力.在美国,目前乙肝病毒、HIV 核酸疫苗、流感DNA疫苗、单纯疱疹病毒DNA疫苗已进入Ⅱ期临床研究,疟疾DNA 疫苗已进入Ⅲ期临床研究.在我国,某些兽用疫苗也已进入应用研究阶段.然而核酸疫苗是一个新生事物,围绕着增强核酸疫苗的免疫效果和安全性、改善纯化工艺等国际热点问题,在理论上还没有真正得到解决.这些问题大大限制了核酸疫苗的推广应用.

关键词：核酸疫苗免疫应答安全性应用研究免疫效果

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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 34-36页

作者：吴丹王庆敏陈蕊雯朱维佳陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 详细信息

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

关键词：猪囊尾蚴抗原 cC1 DNA疫苗蛋白质疫苗小鼠免疫应答

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膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 378-380页

作者：颜宏利孙树汉陈蕊雯杨湘越第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物... 详细信息

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。

关键词：膜联蛋白32 低相对分子质量单链尿激酶基因拼接基因表达重叠区扩增法大肠杆菌

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应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 542-545,T002页

作者：胡振林孙树汉戴建新周凤娟第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性... 详细信息

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。结论 :HBs Ab可与

关键词： CpG免疫激活序列酶母单杂交系统免疫球蛋白特异性结合蛋白

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乙肝表面抗原核酸疫苗的构建及其与宿主染色体整合的可能性分析

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 816-818页

作者：周凤娟胡振林戴建新孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建乙肝表面抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内整合到宿主细胞基因组上的可能性。方法 :采用PCR法扩增乙肝病毒的 S基因片段后装入 p VAX载体 ,并以此为候选疫苗免疫 (BAL B/c)小鼠 ,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因... 详细信息

目的 :构建乙肝表面抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内整合到宿主细胞基因组上的可能性。方法 :采用PCR法扩增乙肝病毒的 S基因片段后装入 p VAX载体 ,并以此为候选疫苗免疫 (BAL B/c)小鼠 ,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因组 DNA,用 PCR检测 DNA整合情况。结果 :构建了乙肝核酸疫苗 p VAX- HBs Ag。免疫接种该疫苗第 3周时在小鼠肌肉、肝脏、脾脏、胸腺均有不同量的游离质粒存在 ;第 6周除在股四头肌可检测到外 ,其余组织中均为阴性 ;第 12、18周时检测所有组织中均为阴性。结论 :构建的 p VAX- HBs Ag DNA疫苗在小鼠体内无染色体整合。

关键词：乙型肝炎表面抗原核酸疫苗 DNA疫苗宿主染色体整合

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CpG-寡核苷酸对免疫细胞基因表达的影响

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1086-1089页

作者：胡振林万斌周凤娟王静王庆敏孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,... 详细信息

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,寻找经CpG-ODN刺激后差异表达的基因。结果:CpG-ODN刺激RAW264.7细胞6 h后,2次芯片杂交筛选出重复差异表达的基因119条,其中74条上调,45条下调;这些基因涉及细胞周期、免疫调控、脂肪代谢、泡沫细胞形成、信号转导等过程。结论:CpG-ODN可广泛调控巨噬细胞内多种基因的表达,对相关基因群的进一步研究有助于深入了解CpG-ODN的作用机制。

关键词： CpG-寡核苷酸免疫细胞基因表达巨噬细胞表达谱芯片

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