检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第3期23卷 341-343页

作者：朱晓燕韩建中娄淑杰严进徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部基础医学部神经生物学教研室

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fur... 详细信息

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fura-2的浓度进行了调整，另外PEM作为参与炎症的非兴奋细胞，其活化对[Ca~(2+)]i有很大的影响，而细胞贴壁很可能导致活化，但测定方法又要求只能在贴壁细胞进行。因此，我们使用鼠尾胶缩短贴壁时间，并把检测用的PEM的贴壁时间控制在一定范围之内。取得了比较理想的结果。

关键词： Fura-2 巨噬细胞钙测定优化 PEM

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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达

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中国人兽共患病杂志 2002年第3期18卷 31-33,67页

作者：杨湘越孙树汉陈蕊雯郭瀛军颜宏利上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克... 详细信息

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论　在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原。

关键词： cC1cDNA 克隆表达巴斯德毕赤酵母囊虫病猪囊尾蚴

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尾加压素受体GPR14在大鼠心血管系统及脑内的表达

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 45-47页

作者：李玲袁文俊邱景伟潘秀颉第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的 :观察尾加压素 (U )受体 GPR14在 SD大鼠心血管系统及脑内的表达。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)检测 GPR14。结果 :在心血管系统中 ,大鼠颈总动脉、胸主动脉、左心房及左心室均表达 GPR14m RNA,其中心室表... 详细信息

目的 :观察尾加压素 (U )受体 GPR14在 SD大鼠心血管系统及脑内的表达。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)检测 GPR14。结果 :在心血管系统中 ,大鼠颈总动脉、胸主动脉、左心房及左心室均表达 GPR14m RNA,其中心室表达丰度最高 ;在中枢神经系统中 ,大鼠小脑、大脑皮质、下丘脑及海马均表达 GPR14m RNA,其中小脑表达丰度较高。结论 :U 受体 GPR14在大鼠心血管系统及脑组织中都有表达 ,提示 U 在心血管及中枢神经活动中发挥重要作用。

关键词： G蛋白偶联受体尿紧张素类小脑聚合酶链反应心血管系统大鼠尾加压素受体 GPR14 mRNA

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脉动压力对大鼠颈总动脉血管紧张素Ⅱ分泌的影响

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第二军医大学学报 2002年第7期23卷 738-740页

作者：严志强杨向群姜宗来张炎第二军医大学基础医学部解剖学教研室上海200433

目的 :研究脉动压力改变对动脉血管紧张素分泌的影响。方法 :以脉动的高压力 (16 0 m m Hg,1m m Hg=0 .133k Pa)和正常压力 (80 mm Hg)在体灌流大鼠颈总动脉 ,用放射免疫法测定灌流 0 .5、1、3、6 h后大鼠颈总动脉灌流液中血管紧张... 详细信息

目的 :研究脉动压力改变对动脉血管紧张素分泌的影响。方法 :以脉动的高压力 (16 0 m m Hg,1m m Hg=0 .133k Pa)和正常压力 (80 mm Hg)在体灌流大鼠颈总动脉 ,用放射免疫法测定灌流 0 .5、1、3、6 h后大鼠颈总动脉灌流液中血管紧张素的含量。结果 :大鼠颈总动脉灌流液中血紧张素含量随脉动压力作用时间的延长而增加。高压力组增幅大于正常压力组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,各时相点均显著大于正常组。结论 :脉动压力作用下大鼠颈总动脉血管紧张素的分泌增加 ,且与压力的大小和作用时间有关。提示压力诱导的血管紧张素分泌可在机械应力介导的动脉重建中起重要作用。

关键词：脉动压力大鼠颈总动脉血管紧张素Ⅱ 分泌放射免疫测定

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脱氢皮质酮对大鼠海马神经元的毒性作用及其机制的探讨

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 632-635页

作者：万顺伦孙刚等第二军医大学基础医学部生理学教研室，上海200433

目的 :研究糖皮质激素的代谢产物 11-脱氢皮质酮对大鼠海马神经元的毒性作用及其机制。方法 :采用 Westernblotting、放射性酶活性测定及 MTT染色测定法进行实验。结果 :Western blotting和放射性酶活性测定均证明了原代培养大鼠海马... 详细信息

目的 :研究糖皮质激素的代谢产物 11-脱氢皮质酮对大鼠海马神经元的毒性作用及其机制。方法 :采用 Westernblotting、放射性酶活性测定及 MTT染色测定法进行实验。结果 :Western blotting和放射性酶活性测定均证明了原代培养大鼠海马神经元内存在使 11-脱氢皮质酮转化为皮质酮的酶 ,即型 11β-羟基类固醇脱氢酶 (11β- HSD1)。 11-脱氢皮质酮能够促进 11β- HSD1蛋白的表达。细胞存活实验表明 :11-脱氢皮质酮 (10 - 6 m ol/ L )可对无血清 DMEM培养的大鼠海马神经元产生损伤作用 ,此作用不仅可为 11β- HSD1抑制剂甘珀酸 (carbenoxolone,CBX)所阻断 ,还能为糖皮质激素受体 (glucocorticoidreceptor,GR)拮抗剂阻断 ,但不能为肾上腺皮质激素受体 (m ineralocorticoid receptor,MR)拮抗剂所阻断。结论 :11-脱氢皮质酮能够对大鼠海马神经元产生毒性作用 ,此毒性作用是由 11β- HSD1参与并由 GR受体介导的。 11-脱氢皮质酮使 11β- HSD1蛋白表达增加 ,又反过来促进 11-脱氢皮质酮向皮质酮的转化 ,此正反馈作用可能在应激性迟发性神经元死亡中发挥一定的作用。

关键词： 11-脱氢皮质酮 11β-羟基类固醇脱氢酶脱氢皮质酮大鼠海马神经元毒性作用

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糖皮质激素在认知过程中的作用

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第二军医大学学报 2002年第7期23卷 793-795页

作者：陈辉万顺伦孙刚第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

近年来 ,皮质醇能够导致认知缺陷已经在动物实验和人类中得到证实 ,而且研究中都观察到了糖皮质激素剂量与认知缺陷程度之间存在倒“U”字曲线关系。进一步的研究发现脑中存在盐皮质激素受体和糖皮质激素受体 ,上述的倒“U”字曲线关系... 详细信息

近年来 ,皮质醇能够导致认知缺陷已经在动物实验和人类中得到证实 ,而且研究中都观察到了糖皮质激素剂量与认知缺陷程度之间存在倒“U”字曲线关系。进一步的研究发现脑中存在盐皮质激素受体和糖皮质激素受体 ,上述的倒“U”字曲线关系可能与这两型受体的活化有关。不同的受体在认知过程的不同阶段起作用 ,盐皮质激素受体参与记忆的感知整合过程 ,而糖皮质激素受体参与记忆的保持过程。

关键词：糖皮质激素认知作用糖皮质激素受体

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人肝癌SM MC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探

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中华内分泌代谢杂志 2002年第6期18卷 478-480页

作者：徐晓辉王学敏向正华郭兴中缪明永徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 ... 详细信息

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 89%以上 )及人GR内含子E的DNA片段 ,构建转录质粒 ,并在体外进行转录 ,用地高辛标记反义RNA探针 ,进行细胞原位杂交 ,碱性磷酸酶底物NBT BCIP显色 ,计算机图像分析系统进行扫描半定量分析。结果　人肝癌SMMC 772 1细胞 44℃培养 1h后 ,用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低 ;加放线菌素D后热休克反应组 ,用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低 ,而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高 ;加放线菌酮后热休克反应组 ,用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高。结论　热休克反应时GRmRNA转录过程受抑 ,GRmRNA前体成熟过程存在剪接障碍。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应糖皮质激素受体 mRNA

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嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 593-597,F004页

作者：曹莉叶俊丽刘丽陈菲陈哲宇李建红路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 ... 详细信息

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况 ,并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价 OECs和 GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果 :(1) OECs和 GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用 ,可促进脊髓下行传导束再生 ,肢体运动功能恢复。 (2 ) OECs和 GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强 ,高于 GDNF或 OECs单用组。结论 :联合应用 GDNF和 OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。

关键词：嗅鞘细胞移植 GDNF 大鼠脊髓损伤治疗作用胶质细胞源性神经营养因子红核脊髓束皮质脊髓束

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供肝冷保存再灌注期间核因子 NF-κB和抑制蛋白 IκBs的变化及其意义

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第二军医大学学报 2002年第5期23卷 511-514页

作者：曹云飞俞卫锋朱海英杨立群武圣明吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科上海200438 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的 :研究肝移植期间供肝组织中核因子 NF-κB的激活特征及其活性调控机制。方法 :改良 Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型 ,按供肝在 4℃乳酸林格液中的冷保存时间 ,实验分冷保存 2 h组和 6 h组 ,凝胶迁移率改变分析法 (EMSA)和 West... 详细信息

目的 :研究肝移植期间供肝组织中核因子 NF-κB的激活特征及其活性调控机制。方法 :改良 Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型 ,按供肝在 4℃乳酸林格液中的冷保存时间 ,实验分冷保存 2 h组和 6 h组 ,凝胶迁移率改变分析法 (EMSA)和 Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中 NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白 IκB-α、IκB-β的表达水平。结果 :两组供肝组织在冷缺血保存期间其 NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,再灌注后 30 m in至 6 h两组的 NF-κB活性均出现显著的诱导激活 (P<0 .0 1) ,其中冷保存 2 h组供肝组织的 NF-κB活性高峰出现在再灌注 1h;而冷保存 6 h组在再灌注 30 min即达到活性高峰 ,并维持在较高的激活水平 ;供肝组织中抑制蛋白 IκB-α的含量显著高于 IκB-β,两组的 IκB-α蛋白在再灌注 30 min至 1h均有明显降解 (P<0 .0 5 ) ,而 IκB-β蛋白仅在冷保存 6 h组有较明显的降解 (再灌注 30 m in)。结论 :核因子 NF- κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活 ,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关 ,抑制蛋白 IκB- α在供肝的 NF-

关键词：肝移植再灌注损伤抑制蛋白IкBs 活性调控机制动物实验冷保存核因子NF-к

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人支气管上皮细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 54-56页

作者：吴涛印木泉第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :建立一个新的促癌剂检测模型。方法 :采用电穿孔法 ,将人类突变的 c- Ha- ras V1 2 G基因转入人支气管上皮细胞BEAS- 2 B中 ,将获得的 G418抗性 (G418r)单克隆细胞株用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率、锚着独立性生长及... 详细信息

目的 :建立一个新的促癌剂检测模型。方法 :采用电穿孔法 ,将人类突变的 c- Ha- ras V1 2 G基因转入人支气管上皮细胞BEAS- 2 B中 ,将获得的 G418抗性 (G418r)单克隆细胞株用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率、锚着独立性生长及血清抗性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测。结果 :(1)在促癌剂 PMA作用下 ,BEAS- 2 B基因转染细胞发生了恶性转化 ;(2 )表达突变 ras基因的上皮细胞 ,在大剂量 PMA(>1μmol)的急性刺激 (2 4h)下 ,可诱导细胞死亡 ;(3)随着细胞恶性程度的增加 ,某些促癌剂的促细胞分化作用将减弱 ,并有生长刺激作用。结论 :该模型可用于促癌剂的检测及促癌作用机制研究。

关键词：基因转染细胞佛波醇酯促癌剂支气管上皮细胞

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