检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2004年第3期25卷 277-279页

作者：施柯黎怀星吴丹李雅慧孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告... 详细信息

目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告基因的上游而获得 ph P5 3- luc表达质粒。用脂质体转染法将 ph P5 3- luc转染入 NIH3T3细胞并分别用 5 -氟尿嘧啶 (5 -FU)处理 ,最后裂解细胞用 Dual- L uciferase Reporter Assay System检测荧光素酶报告基因表达。结果 :构建了 2个分别由p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,位于这 2个质粒上的荧光素酶报告基因在 NIH3T3细胞内的表达显著地受遗传毒性化学物质的诱导 ,其表达比对照的 p GL 3- BASIC载体上的荧光素酶报告基因高近 2 4 0倍。结论 :基于人 p5

关键词： phP53—luc质粒检测化学物质遗传毒性 p53基因 5—氟尿嘧啶

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Annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 44-46页

作者：王芳张毅颜宏利高远舰刘凡贺艳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1... 详细信息

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin

关键词： Annexin B1 磷脂酰丝氨酸结合活性血小板活化细胞凋亡

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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1090-1091,I002页

作者：孙树汉郭瀛军陈蕊雯杨桦第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 详细信息

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象。

关键词：核酸疫苗囊尾蚴细胞凋亡 pcDNA3-γcC1

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肿瘤基因治疗研究若干新进展

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1258-1260页

作者：贺艳王水良孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方面的研究... 详细信息

肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方面的研究进展作一综述。

关键词：肿瘤基因治疗病毒载体综述文献

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Annexin B1分子结构、Ca^(2+)结合位点与进化的分析

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1078-1081页

作者：王凯慧郭瀛军高远舰王开宇颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :An... 详细信息

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :Annexin B1包含 4个序列和结构高度相似的结构域 ,含有 8个 Ca2 + 结合位点 ,二级结构显示蛋白主要由 α螺旋结构组成 ,具有寄生生物所特有的氨基酸残基。在物种进化上 ,Annexin B1和节肢动物为 1支 ,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为 1支 ,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为 1支。另外 ,Annexin B1与 Annexin A1在进化上有较强的亲缘关系 ,结构和功能上 An-nexin A1和 Annexin A5相似。结论 :Annexin B1具有膜联蛋白的结构特征 ,含有抗凝血、参与细胞凋亡、炎性反应、信号转导和细胞分化等细胞生理功能的氨基酸结构域和决定种属特异性的氨基酸序列 ,在进化上同源于 Annexin A1。

关键词： Annexin B1 结构功能进化

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SARS相关冠状病毒S1融合蛋白的原核表达与纯化

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 704-706页

作者：张术王开宇郭瀛军黄力陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V) S1蛋白编码 DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 5 T/ S1,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增合成 S1片段 ,并克隆入载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把S1序... 详细信息

目的 :克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V) S1蛋白编码 DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 5 T/ S1,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增合成 S1片段 ,并克隆入载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把S1序列定向插入原核表达载体 p GEX- 5 T的多克隆位点 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,将纯化后的融合蛋白用于 SARS- Co V抗体阳性血清的检测。结果 :GST- S1融合蛋白以可溶形式表达 ,纯化后的蛋白用 EL ISA法检测 ,结果与对照相符。结论 :成功诱导原核表达并纯化出融合蛋白 S1,为将其应用于 SARS- Co

关键词：严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 S1融合蛋白原核表达纯化 SARS

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单核苷酸多态性在复杂性状疾病易感基因研究中的应用

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 140-142页

作者：陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下... 详细信息

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下几个方面对 SNPs与复杂性状疾病易感基因研究的策略和方法学问题作了较为详细的综述 :(1 ) SNP特点及其有关网上资源 ;(2 )对直接测序法、单碱基延伸法、Taq Man法、基于实时动态荧光 (动力学 ) PCR的等位基因特异扩增法 ,变性高效液相色谱 (DHPL C)法和 OL A/ PCR的 SNPs基因分型方法的原理、通量和优缺点进行了比较 ;(3)

关键词：单核苷酸多态性复杂性状疾病易感基因发病机制基因组学

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核酸疫苗及其在疾病免疫防治中的应用

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 519-521页

作者：孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病... 详细信息

自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病以及肿瘤等预防和治疗的研究。本文就核酸疫苗的免疫机制、优越性、安全性 ,以及目前的研究进展状况作一综述。

关键词：核酸类疫苗免疫机制免疫疗法

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钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB的构建及其免疫机制的初步研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 511-514页

作者：寇志华张平武孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠... 详细信息

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠腹腔巨噬细胞分泌的 TNF活性的影响。结果 :该疫苗对同型钩体的保护率为 10 0 % ,特异性抗体水平在疫苗注射第 6周达到高峰 ,TNF的活性明显增高。结论 :DNA疫苗 pc D- fla B对同型钩体感染有较强的保护作用 ;能够有效地诱导机体的体液免疫应答 ,并增强巨噬细胞所产生的 TNF的活性。

关键词：钩端螺旋体 DNA 疫苗巨噬细胞肿瘤坏死因子

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稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 384-386页

作者：周凤娟戴建新胡振林孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了... 详细信息

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了重组质粒pcDNA3－HBsAg（S），转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg（S）的存在，PCR扩增也证实HBSAg（S）基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论：获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株，为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。

关键词：乙肝DNA疫苗体外细胞感染 PCR方法乙型肝炎表面抗原 adr亚型 P815细株

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