检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第3期23卷 254-256页

作者：张志珍毛积芳杨生生窦鸿第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶... 详细信息

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P-

关键词：高密度培养人胰高血糖素样肽-1 基因表达融合蛋白质类大肠杆菌强降血糖肽

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成体小鼠肝干细胞的长期体外培养和体内分化研究

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1166-1168页

作者：苏娟朱海英李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长... 详细信息

目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长,不仅可稳定传代,而且移植至经致死剂量照射的小鼠体内能够形成脾结节,结节中含有肝细胞和胆管上皮细胞特异性标志的细胞。结论:成体小鼠肝脏中存在具有多潜能性的肝干细胞,该细胞的体外成功培养为肝干细胞生物学特性的研究及肝干细胞的应用奠定了基础。

关键词：肝干细胞体外培养体内分化

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重组人可溶性VEGI在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 140-142页

作者：娄永华焦炳华肖扬朱玉平王梁华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DN... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DNA测序证实后亚克隆入高表达载体 p L OU- 1,转化大肠杆菌 BL 2 1,获得高表达菌株。经 IPTG诱导获得高表达 ,纯化表达产物并检测其对内皮细胞 ECV30 4增殖的抑制活性。结果 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,约占细菌总蛋白的 4 0 % ;纯化的重组蛋白经复性后具有直接抑制内皮细胞增殖的活性。结论 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,且表达的重组蛋白具有抑制内皮细胞生长作用。

关键词：血管内皮聚合酶链反应血管生长抑制因子基因表达重组人可溶性VEGI 大肠杆菌

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外周血单核细胞LIGHT的诱导表达及基因克隆

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 129-131页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因... 详细信息

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因转录表达。采用 PCR产物直接克隆法克隆人全长 L IGHT基因及其胞外区编码基因 ,并对胞外区编码基因进行大肠杆菌表达。结果 :当用 IFN-γ和 PMA刺激 PMBC后 4 8h,可诱导 L IGHT基因的明显表达 ,而 L PS、IL - 2和 TNFα则不能诱导。克隆的人 L IGHT全长基因及 L IGHT胞外区编码基因 ,经过 DNA序列测定证实基因序列与文献报道一致。 L IGHT基因胞外区在大肠杆菌获得一定程度的表达。结论 :本研究对人 L IGHT基因及其胞外区编码基因进行了克隆和表达。

关键词： LIGHT TNF超家族外周血单核细胞 RT-PCR 基因克隆基因表达

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p53截短突变群的建立及其在HeLa细胞的表达

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 57-60页

作者：娄永华彭艳焦炳华孔宪涛第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 长征医院实验诊断科

目的 :建立一组 p5 3截短突变群 ,分析缺失突变对 P5 3蛋白质功能的影响。方法 :以野生型 p5 3基因为模板 ,采用PCR定点突变技术 ,建立一组 P5 3蛋白质 N端和 (或 ) C端缺失的截短突变群 ,构建真核表达载体 ,基因转移 He L a细胞 ,分... 详细信息

目的 :建立一组 p5 3截短突变群 ,分析缺失突变对 P5 3蛋白质功能的影响。方法 :以野生型 p5 3基因为模板 ,采用PCR定点突变技术 ,建立一组 P5 3蛋白质 N端和 (或 ) C端缺失的截短突变群 ,构建真核表达载体 ,基因转移 He L a细胞 ,分析转移基因表达及 p5 3下游相关基因表达。结果 :构建的 p5 3截短突变群在 He L a细胞中表达 ,并对 p5 3下游相关基因的表达模式产生一定的影响。结论 :p5 3截短突变群可以作为一个研究 p5 3与下游基因相互作用的良好工具 ,对于研究 p5 3的功能调节机制有重要的价值。

关键词： p53基因基因点突变基因转染基因表达 HeLa细胞

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骨髓细胞多向分化潜能的初步研究

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1172-1174页

作者：朱海英苏娟李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-... 详细信息

目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-cre基因的分布及表达情况。结果:PCR和免疫组化分析结果均显示,供体细胞的两个标志sry及Mx-cre在受体鼠的肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等多个器官中都有表达。结论:骨髓细胞不仅可以重建受致死剂量照射受体鼠的造血系统,而且具有分化为肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等组织细胞类型的多向潜能性。

关键词：骨髓细胞造血干细胞细胞分化

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干细胞样肝原始细胞的体外分化

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1169-1171页

作者：熊俊姚玉成訾晓渊李文林朱海英王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中... 详细信息

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中的形态学变化并用显微摄影记录结果,最后利用免疫细胞化学分析鉴定分化后细胞的性质。结果:干细胞样肝原始细胞集落在体外培养时可形成类似肝小叶的形状,集落中央大部分细胞分化成双核细胞,集落周边细胞仍为单核细胞,但体积明显增大,整个集落中的细胞呈放射状排布。分化后,细胞群中的部分细胞表达成熟肝细胞标志白蛋白(albumin),少部分细胞表达胆管上皮细胞标志细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19),但所有细胞均不表达低分化肝细胞标志α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)。结论:干细胞样肝原始细胞在体外具有多向分化能力,可分化为表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞标志的细胞。

关键词：干细胞样肝原始细胞肝干细胞细胞培养体外分化

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冷适应对大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白与嘌呤核苷三磷酸结合的影响

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中国病理生理杂志 2002年第4期18卷 378-380页

作者：拓西平苗振春邹大进王学敏第二军医大学附属长海医院老年病科上海200433 第二军医大学附属长海医院内分泌科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海200433

目的 :探讨冷适应对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白 (UCP)活性与含量的影响。方法 :用 [3 H]标记的鸟嘌呤核苷三磷酸 (GTP)与解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经Scatchardplot分析得出两者结合的解离常数 (Kd)和最... 详细信息

目的 :探讨冷适应对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白 (UCP)活性与含量的影响。方法 :用 [3 H]标记的鸟嘌呤核苷三磷酸 (GTP)与解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经Scatchardplot分析得出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。结果 :冷适应能使棕色脂肪增加 ;冷适应组Bmax显著高于对照组 ,Kd值显著低于对照组。结论 :冷适应不仅能使棕色脂肪线粒体内膜UCP含量增加 ,而且能使其活性增加。

关键词：棕色脂肪解偶联蛋白鸟苷三磷酸脂肪组织线粒体 GTP 动物实验肥胖冷适应

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吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 611-613页

作者：俞卫锋杨立群纪筠陶勇缪明永第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科上海200438 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的 :通过观察吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响 ,研究吸入麻醉药肝毒性与线粒体能量代谢的关系。方法 :应用碱性藏红为探针 ,在 3ml的反应体系中分别加入 5、10、2 0、5 0μl/ ml氟烷、恩氟烷、异氟烷及七氟烷 ,用 UV - 30 ... 详细信息

目的 :通过观察吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响 ,研究吸入麻醉药肝毒性与线粒体能量代谢的关系。方法 :应用碱性藏红为探针 ,在 3ml的反应体系中分别加入 5、10、2 0、5 0μl/ ml氟烷、恩氟烷、异氟烷及七氟烷 ,用 UV - 30 0 0分光光度计进行双波长 (5 11～ 5 33nm )扫描 ,观察上述 4种药物对 ATP或琥珀酸能化及非能化鼠肝线粒体跨膜电位 (Δψ)的影响。结果 :氟烷与经典的解耦联剂氰化 -对 -三氟甲氧基苯腙相似 ,能明显降低能化及非能化线粒体的跨膜电位 ,而其余 3种药物仅在大剂量时才降低线粒体的跨膜电位。结论 :氟烷具有解耦联作用。氟烷与其他吸入麻醉药在能量代谢上的这种差异是否为它们肝毒性差异的原因值得引起重视。

关键词：麻醉药线粒体跨膜电位影响肝毒性离体肝吸入麻醉

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诊断级超声波辐照对人早孕绒毛组织的影响

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 314-315页

作者：李卫萍沙继宏朱玲仙叶煦亭第二军医大学长海医院超声科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部细胞生物学教研室长海医院妇产科

目的 :研究早孕时经超声辐照后绒毛组织的超微结构变化和细胞化学反应变化。方法 :15例妊娠 6～ 8周健康妇女分为 4组 ,A组 (对照组 ) 3例 ,未行超声辐照 ;B组 4例 ,超声辐照 10 min;C组、D组各 4例 ,辐照 2 0 m in。B、C组超声辐照后... 详细信息

目的 :研究早孕时经超声辐照后绒毛组织的超微结构变化和细胞化学反应变化。方法 :15例妊娠 6～ 8周健康妇女分为 4组 ,A组 (对照组 ) 3例 ,未行超声辐照 ;B组 4例 ,超声辐照 10 min;C组、D组各 4例 ,辐照 2 0 m in。B、C组超声辐照后即时取材 ,D组超声辐照后 3 d取材。观察绒毛组织超微结构和细胞化学反应的变化。结果 :C组 ,即超声辐照 2 0 m in后即时取材组 ,与正常组相比较绒毛组织有变化 ,合体滋养细胞线粒体嵴间隙及内质网扩张 ,过氧化氢细胞化学反应为阳性 ,合体滋养细胞微绒毛上有致密物沉积。A组、B组、D组均无明显异常。结论

关键词：超声检查绒毛膜绒毛超微结构组织细胞化学早孕

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