检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2001年第4期22卷 319-321页

作者：杨桦戴建新戴旭明傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子 (EF)启动子的表达载体和所转染的克隆明显高于含 CMV启动子及含双拷贝 CMV - GFP表达单元的表达载体 ;而p CMV- GFP和 pd CMV - GFP所转染的克隆之间无显著差别 ;NIH3T3和 ES细胞之间比较 ,GFP的表达水平无显著差异。转录水平与蛋白质水平的测定结果相一致。结论 :(1)在 NIH 3T3和 R1胚胎干细胞系中 ,EF启动子引导下的 GFP基因表达效率明显高于 CMV启动子 ;(2 )外源基因表达单元的拷贝数在染色体中的少量增加 ,不能明显提高表达效率 ;(3)获得了在 R1胚胎干细胞系中稳定、高效表达 GFP的载体 ,为后续工作奠定了基础。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞基因表达影响因素小鼠

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基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 538-541页

作者：郑敬民李坚杨桦傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点... 详细信息

目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的置换型打靶载体 ,经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后 ,用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞 R1株进行基因转染 ,经 G418/ 6 - TG(6 - thioguanine)分组药物筛选 ,进行 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo载体的应用研究。结果 :得到了与设计一致的置换型打靶载体 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo;将线性化的打靶载体导入 ES细胞后 ,能与靶位点有效地发生同源重组 ,获得了 2 0个靶基因被灭活了的 ES细胞克隆。结论 :此研究成功构建了含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6针对小鼠 HPRT基因位点的置换型打靶载体。

关键词：基因打靶胚胎干细胞 HPRT基因 Cre重组酶小鼠

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应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 542-545,T002页

作者：胡振林孙树汉戴建新周凤娟第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性... 详细信息

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。结论 :HBs Ab可与

关键词： CpG免疫激活序列酶母单杂交系统免疫球蛋白特异性结合蛋白

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表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系的生物学特性

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 322-324页

作者：杨桦傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在小鼠胚胎干细胞系 R1中整合并高效稳定表达后对宿主细胞生物学特性的影响。方法 :从生长曲线、碱性磷酸酶表达水平、正常核型率及体内多向分化能力等 4个方面 ,对整合有 GFP高效表达载体的 R1ES细胞亚克... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在小鼠胚胎干细胞系 R1中整合并高效稳定表达后对宿主细胞生物学特性的影响。方法 :从生长曲线、碱性磷酸酶表达水平、正常核型率及体内多向分化能力等 4个方面 ,对整合有 GFP高效表达载体的 R1ES细胞亚克隆 ,进行生物学特性的比较分析。结果 :R1ES细胞与 4个高效稳定表达 GFP的 ES细胞克隆在细胞增殖速率、分化状态及正常核型率上均无显著差异 ;将 GFP(+ ) ES细胞接种裸鼠后 ,均可有效形成含有 3个胚层细胞的畸胎瘤。结论 :外源基因 GFP在 R1ES细胞中的整合及稳定高效表达对于 ES细胞的基本生物学特性无明显影响 ,为有效利用 GFP进行 ES细胞体内的示踪研究提供了保障。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞生物学特性小鼠基因表达

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TT型病毒基因组的克隆与进化分析

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微生物学报 2001年第4期41卷 408-414页

作者：任浩董辉朱分禄缪晓辉王文戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院感染科

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA... 详细信息

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA片段中特有的限制性内切酶位点将TTV的DNA片段首尾相连,得到近全长的基因组克隆,命名为TTV021.对TTV021的核酸序列进行分析,TFV021长3 472 nt,存在2个阅读框架ORF1和ORF2,分别编码785和146个氨基酸.将TTV021与其它已知的TTV基因组全序列进行了同源性比较,并进行进化分析.结果表明,TTV021序列与TTV分离株CHN2、BDH1的遗传距离较近,而与其它分离株相对较远.

关键词：输血传播性病毒克隆同源性进化分析

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腺苷对豚鼠急性声损伤后听力暂时性阈移的保护作用(英文)

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 624-627页

作者：章岚高文元第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的 :研究腺苷在噪声造成急性声损伤中对听力的保护作用 ,探讨腺苷对耳蜗周围神经系统所起的神经调质作用。方法 :豚鼠暴露 118d B SPL白噪声 30 min,同时耳蜗外淋巴灌流单纯或含 1mm ol/L腺苷的人工外淋巴液 ,测试噪声暴露前、后由 cl... 详细信息

目的 :研究腺苷在噪声造成急性声损伤中对听力的保护作用 ,探讨腺苷对耳蜗周围神经系统所起的神经调质作用。方法 :豚鼠暴露 118d B SPL白噪声 30 min,同时耳蜗外淋巴灌流单纯或含 1mm ol/L腺苷的人工外淋巴液 ,测试噪声暴露前、后由 click和各频率短纯音所诱发听神经复合动作电位的听阈 ,计算阈移值。结果 :对照组噪声暴露后 click测试的即刻阈移 (TTS)为 (40± 6 .6 8) d B,给药组为 (2 0± 5 .70 ) d B;对照组短纯音测试 TTS在 32～ 5 0 d B;给药组测试 TTS在 2 0～ 35 d B;暴露 2 h后对照组阈移值增大 4～ 8d B,给药组无明显变化。结论

关键词：腺苷药理学听觉丧失噪声性处淋巴灌流

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静脉注射皮质酮对大鼠头端延髓腹外侧区前交感神经元的作用

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第二军医大学学报 2001年第1期22卷 24-27页

作者：王伟忠杭建良戎伟芳王继江袁文俊第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的 :研究糖皮质激素在交感神经系统和心血管活动调节中的作用。方法 :细胞外记录头端延髓腹外侧区 (RVL M)功能性质明确的前交感神经元自发放电 ;静脉注射皮质酮 (5 0、10 0、15 0μg/ kg)观察前交感神经元放电频率的变化。结果 :静... 详细信息

目的 :研究糖皮质激素在交感神经系统和心血管活动调节中的作用。方法 :细胞外记录头端延髓腹外侧区 (RVL M)功能性质明确的前交感神经元自发放电 ;静脉注射皮质酮 (5 0、10 0、15 0μg/ kg)观察前交感神经元放电频率的变化。结果 :静脉注射不同剂量皮质酮后 ,12个 RVL M前交感神经元的放电频率均较注射前明显增加 (P<0 .0 5 ) ,具有剂量依赖性 ,作用潜伏期为 (10 4± 2 5 ) s。结论 :皮质酮能快速兴奋 RVL M前交感神经元 ,提示糖皮质激素可能通过“快速膜效应”

关键词：皮质酮延髓交感神经系统细胞外记录

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MIF基因修饰的瘤苗免疫小鼠后T细胞数量和功能的分析

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第二军医大学学报 2001年第1期22卷 32-35页

作者：刘艳君田野苹曹雪涛张明徽厉永建周正芳郑玲莉第二军医大学基础医学部免疫学教研室上海200433

目的 :研究 T细胞在巨噬细胞游走抑制因子 (MIF)基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应中的作用。方法 :将重组MIF腺病毒转染小鼠 FBL 3红白血病细胞制成的瘤苗接种于小鼠体内 ,观察脾脏和淋巴结中 T细胞数量和功能的改变。结果 :经 MIF... 详细信息

目的 :研究 T细胞在巨噬细胞游走抑制因子 (MIF)基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应中的作用。方法 :将重组MIF腺病毒转染小鼠 FBL 3红白血病细胞制成的瘤苗接种于小鼠体内 ,观察脾脏和淋巴结中 T细胞数量和功能的改变。结果 :经 MIF基因修饰的瘤苗免疫后 ,小鼠脾细胞和腹股沟引流淋巴结细胞数量明显增多 ,脾细胞 CTL活性显著增强 ,引流淋巴结中 CD3+ 、CD2 8+ 、CD4+ 和 CD8+ T细胞百分率均较对照组增加。MIF基因修饰的瘤苗免疫对小鼠受野生型 FBL 3肿瘤细胞再攻击具有明显的保护作用。结论 :MIF基因修饰的瘤苗能诱导 T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。

关键词：巨噬细胞游走抑制因子疫苗 T淋巴细胞基因修饰肿瘤基因治疗

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糖皮质激素对高钾诱导PC12细胞分泌儿茶酚胺的快速调节作用

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第二军医大学学报 2001年第11期22卷 1024-1026页

作者：娄淑杰陈菲陈宜张第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :分析糖皮质激素对高钾诱导 PC12细胞分泌儿茶酚胺的快速调节作用。方法 :采用高效液相色谱 -电化学法 ,检测 PC12细胞分泌的儿茶酚胺。结果 :(1)皮质酮可在 15 min内抑制高钾诱导的 PC12细胞分泌儿茶酚胺。 (2 )高钾持续刺激 PC1... 详细信息

目的 :分析糖皮质激素对高钾诱导 PC12细胞分泌儿茶酚胺的快速调节作用。方法 :采用高效液相色谱 -电化学法 ,检测 PC12细胞分泌的儿茶酚胺。结果 :(1)皮质酮可在 15 min内抑制高钾诱导的 PC12细胞分泌儿茶酚胺。 (2 )高钾持续刺激 PC12细胞的时间不同 ,皮质酮抑制分泌的作用发生改变。(3)地塞米松也可快速抑制高钾诱导 PC12细胞分泌儿茶酚胺 ,作用幅度与皮质酮接近。结论 :糖皮质激素可快速抑制高钾诱导的 PC12细胞分泌儿茶酚胺。

关键词：糖皮质激素儿茶酚胺 PC12细胞钾高效液相色谱

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甲基 - D-天冬氨酸对豚鼠耳蜗内电位的影响(英文)

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第二军医大学学报 2001年第12期22卷 1126-1129页

作者：章岚夏金辉刁明芳高文元第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的 :观察 N-甲基 -D-天冬氨酸 ( NMDA)对耳蜗电位的影响 ,探讨 NMDA对耳蜗的神经毒性作用。方法 :用圆窗电极测试耳蜗的基础复合动作电位 ( CAP)和微音器电位 ( CM)后 ,在 5只豚鼠的圆窗上涂抹 Hanks液 ,并保留 2 0 min作为对照 ;然... 详细信息

目的 :观察 N-甲基 -D-天冬氨酸 ( NMDA)对耳蜗电位的影响 ,探讨 NMDA对耳蜗的神经毒性作用。方法 :用圆窗电极测试耳蜗的基础复合动作电位 ( CAP)和微音器电位 ( CM)后 ,在 5只豚鼠的圆窗上涂抹 Hanks液 ,并保留 2 0 min作为对照 ;然后再涂沫 NMDA,也保留 2 0 min。结果 :NMDA升高所有频率的纯音诱发的 CAP阈值 ,阈移在 13～ 2 7d B;显著降低 CAPN1波幅 ,波幅被抑制达 5 0 %～ 75 % ;显著延长 CAP的潜伏期 ( P<0 .0 5 ) ;NMDA对所有频率纯音诱发的 CM均无影响。结论 :NMDA对耳蜗具有神经毒性作用。

关键词： N-甲基天冬氨酸神经毒素类耳蜗微音电位神经毒性

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