检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第8期23卷 822-824页

作者：杨湘越张毅颜宏利陈蕊雯武圣明孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :在毕赤酵母中表达 Annexin32并研究其功能。方法 :用 G4 18法快速筛选出的 9个高拷贝转化子 ,经平板培养法 (MD和 MM)及 PCR鉴定表型后 ,分别在 BMMY、BMM、MM 3种培养基中以甲醇诱导表达 ,培养上清行 SDS- PAGE和Western印迹鉴... 详细信息

目的 :在毕赤酵母中表达 Annexin32并研究其功能。方法 :用 G4 18法快速筛选出的 9个高拷贝转化子 ,经平板培养法 (MD和 MM)及 PCR鉴定表型后 ,分别在 BMMY、BMM、MM 3种培养基中以甲醇诱导表达 ,培养上清行 SDS- PAGE和Western印迹鉴定 ,用 (NH4 ) 2 SO4 +PI法沉淀 ,过 FPL C- Superdex75分子筛纯化蛋白并以此免疫小鼠。结果 :有两个表型为Muts的高拷贝转化菌表达量较高 ,以 BMMY为优 ,表达产物有两条带 ,相对分子质量分别约为 3.8万和 4万 ,占分泌总蛋白的 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0～ 35 0 m g/ L。Western印迹证实两条表达产物均具有天然 Annexin32分子的免疫原性。动物实验证明 ,酵母表达的 Annexin32的免疫原性明显高于原核表达者。结论 :在毕赤酵母中成功表达了 Annexin32 。

关键词： Annexin32 酵母表达免疫原性毕赤酵母基因表达膜联蛋白

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高密度培养大肠杆菌生产重组钩端螺旋体DNA疫苗

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 828-829页

作者：林懿陈祖欢郭瀛军孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :高密度、高质粒拷贝数培养大肠杆菌生产重组 DNA疫苗 pc D- fla B。方法 :应用 FU S- 5 L自控发酵罐 ,采用补料分批培养技术 ,控制补料的补加使溶氧控制在 30 %～ 6 0 % ,p H控制在 7左右 ,培养中后期采用 4 2℃培养以提高质粒... 详细信息

目的 :高密度、高质粒拷贝数培养大肠杆菌生产重组 DNA疫苗 pc D- fla B。方法 :应用 FU S- 5 L自控发酵罐 ,采用补料分批培养技术 ,控制补料的补加使溶氧控制在 30 %～ 6 0 % ,p H控制在 7左右 ,培养中后期采用 4 2℃培养以提高质粒拷贝数。结果 :重组菌 *** DH5α/ pc DNA 3- fla B发酵液光密度 (D6 0 0 )达到 4 5。经纯化后最终质粒 DNA得率为 5 0 m g/ L。质粒没有发生丢失现象。结论 :本实验为钩端螺旋体 DNA疫苗的大规模生产奠定了基础。

关键词：钩端螺旋体 DNA疫苗大肠杆菌

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猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1192-1194页

作者：吴丹郭瀛军王庆敏孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗... 详细信息

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。

关键词：猪白细胞介素4 基因克隆囊尾蚴 DNA疫苗佐剂作用

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融合蛋白AnxB1ScuPA表达质粒的构建及诱导条件优化

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1205-1207页

作者：贺艳颜宏利陆一鸣张毅杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/ L)诱导蛋白表达 ,并对表达条件进行优化 ,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件。结果 :Anx B1Scu PA在具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL2 1- RIL 表达量较其他宿主菌为高。在菌液生长至 D6 0 0 =0 .8时 ,加入诱导剂 IPTG至终浓度0 .4 m mol/ L ,诱导 0 .5 h后加入利福平至终浓度 15 0μg/ ml,可使蛋白 Anx B1Scu PA的表达量提高至菌体总蛋白的 36 %。结论 :通过选择具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL 2 1- RIL和优化诱导条件 ,使 Anx B1Scu PA在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：膜联蛋白亚家族单链尿激酶融合基因稀有密码子表达利福平

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猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 508-510页

作者：吴丹郭瀛军林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水... 详细信息

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水平 ,并进行仔猪的免疫保护实验。结果 :免疫小鼠第 3周出现特异性 Ig G应答 ,第 8周 Ig G水平达到最高 ;小鼠血清的 Ig G2 a检测显示 ,第 2周 Ig G2 a应答即为阳性 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪使其获得了 73%的保护率。结论 :猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应。

关键词：猪囊尾蚴免疫保护保护性抗原CC1-cDNA

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白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端对HL-60细胞增殖分化的影响

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中华血液学杂志 2004年第11期25卷 679-682页

作者：杨玲刘善荣汤淑萍王凤玫刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433

目的　探讨白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基胞内区远膜端对HL 60细胞增殖分化的影响。方法　构建LIF受体α亚基胞内区远膜端 (gp190CT3 )真核表达载体 ,利用脂质体转染HL 60细胞 ,G418筛选阳性细胞株 ,免疫组化检测其表达。倒置显微镜... 详细信息

目的　探讨白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基胞内区远膜端对HL 60细胞增殖分化的影响。方法　构建LIF受体α亚基胞内区远膜端 (gp190CT3 )真核表达载体 ,利用脂质体转染HL 60细胞 ,G418筛选阳性细胞株 ,免疫组化检测其表达。倒置显微镜观察野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞的生长状态。以Westernblot及流式细胞仪分别检测野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞中细胞增殖核抗原 (PCNA)及CD15水平。结果　转染有gp190CT3的HL 60细胞体积增大 ,与野生型HL 60细胞相比 ,转染有gp190CT3的HL 60细胞增殖速度减慢 ,PC NA的表达水平明显降低 ,而CD15水平明显升高 (转染有gp190CT3的HL 60细胞中CD15阳性细胞百分率为 89.98% ,野生型HL 60对照组中CD15阳性细胞百分率为 40 .79% )。结论　LIF受体α亚基胞内区远膜端参与LIF受体的信号转导 ,其效应是抑制细胞的增殖 ,促进细胞分化。

关键词： HL-60细胞转染受体α CT CD15 胞内区阳性细胞 α亚基增殖分化 LIF

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睫状神经营养因子对应激引起大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制的研究

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生理科学进展 2000年第2期31卷 131-134页

作者：严进第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

本实验用Nissl染色法、Bielschowsky Gros Lawrentjew染色法、常规透射电镜、行为活动测定、双侧海马微量给药、海马神经元原代培养、活细胞连续照相、全细胞膜片钳记录、细胞内游离Ca2 +浓度测定及P5 3蛋白免疫组化测定等方法 ,观察了... 详细信息

本实验用Nissl染色法、Bielschowsky Gros Lawrentjew染色法、常规透射电镜、行为活动测定、双侧海马微量给药、海马神经元原代培养、活细胞连续照相、全细胞膜片钳记录、细胞内游离Ca2 +浓度测定及P5 3蛋白免疫组化测定等方法 ,观察了睫状神经营养因子 (CNTF)对应激引起动物行为变化和海马神经元形态学变化的影响 ,探讨了CNTF的部分作用机制。结果表明 ,急性应激不引起大鼠海马神经元损伤 ,CNTF不能改善急性应激时的焦虑样行为。但CNTF可显著减轻慢性应激引起的大鼠海马神经元损伤 ,并改善慢性应激时的抑郁样行为。CNTF可能通过早期快速抑制谷氨酸 (Glu)膜电流、胞内游离钙 ( [Ca2 +]i)的升高 ,以及后期核内效应 ,发挥其保护神经元的作用。

关键词：应激睫状神经营养因子海马神经元形态学

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错配修复基因MLH1和MSH2多态性分析条件的优化

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第二军医大学学报 2006年第11期27卷 1276-1276,F0003页

作者：王玉招梅倩颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

DNA修复系统是与大肠癌发病密切相关的遗传因素,错配修复基因(mismatch repair genes,MMR)是最重要的一类DNA修复基因,其在维护基因组稳定的细胞内通路中发挥着重要的作用,其主要是通过剪切发生错配的核苷酸而对基因进行修复。[第一段]

关键词：基因错配 DNA修复多态性限制性片段长度

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大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32的抗凝血活性分析

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 825-827页

作者：张毅杨湘越陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的 Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法 :采用白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)法体外检测凝血指标 ,并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果 :两种表达体系制备的蛋白对 K... 详细信息

目的 :比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的 Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法 :采用白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)法体外检测凝血指标 ,并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果 :两种表达体系制备的蛋白对 KPTT有明显延长作用 ,且 1m g/ kg的蛋白均可显著抑制大鼠下腔静脉血栓形成。结论 :两种表达体系制备的

关键词： annexin32 大肠杆菌毕赤酵母基因表达抗凝血活性

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猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 504-507页

作者：王庆敏陈蕊雯郭瀛军孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,... 详细信息

目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,体外培养小鼠脾细胞 ,用刀豆蛋白 A (Con A)和特异性抗原刺激 ,EL ISA试剂盒检测细胞因子 IL - 2和 IL - 4的水平 ,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外 ,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪 ,进行攻击实验 ,计算相对保护率。结果 :注射疫苗后的第 3周起 ,Ig G即为阳性 ,持续升高至第 8周 ;从第 2周起 ,小鼠血清 Ig G2 a为阳性 ,第 4周达到高峰。细胞因子检测表明 ,IL- 2水平远远高于空载体对照组 ,而 IL- 4含量却与空载体对照组无显著差异 ;实验组刺激指数明显高于空载体对照组。副肌球蛋白核酸疫苗对仔猪的相对保护率为 80 %。结论 :猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗在小鼠动物实验中引发了以 Th1型免疫应答占优势的全面免疫应答。pc DNA3- Ag B核酸疫苗对仔猪具有较好的免疫保护性。

关键词：猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸类疫苗 Th1免疫应答

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