检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第7期24卷 710-712页

作者：黄力郭瀛军张术王开宇陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免... 详细信息

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。

关键词： SARS 冠状病毒M基因片段克隆 DNA疫苗体液免疫严重急性呼吸综合征

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新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 515-518页

作者：魏林戴建新孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建新城疫病毒 (NDV )血凝素神经氨酸酶 (HN)基因真核表达质粒 ,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法 :用 RT- PCR从 NDV中克隆 HN c DNA,并构建 HN的真核表达载体 ,转染 COS- 7细胞表达。注射至小鼠B16黑素瘤模... 详细信息

目的 :构建新城疫病毒 (NDV )血凝素神经氨酸酶 (HN)基因真核表达质粒 ,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法 :用 RT- PCR从 NDV中克隆 HN c DNA,并构建 HN的真核表达载体 ,转染 COS- 7细胞表达。注射至小鼠B16黑素瘤模型 ,检测其抗肿瘤作用。结果 :成功地克隆了 NDV HN c DNA,所构建的 pc DNA3- HN有良好的表达 ,动物实验显示 ,pc DNA3- HN有增强荷瘤小鼠 CTL ,NK杀伤活性的作用。结论 :NDV HN的真核表达质粒具有增强荷瘤小鼠抗肿瘤CTL ,NK细胞反应的作用。

关键词：新城疫病毒抗肿瘤作用 HN基因真核表达质粒

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结核杆菌保护性抗原-遍在蛋白质系统的建立

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 61-63页

作者：王庆敏胡振林孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过... 详细信息

目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过柔性接头将遍在蛋白质与 4种抗原的基因分别融合在一起 ,并插入到 p VAX质粒中。结果 :扩增出来的 4种抗原基因大小分别约为 0 .3、0 .7、1.0、1.6 5 kb,遍在蛋白质 PCR产物约为 0 .2 kb,均与 Gen Bank中登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果显示融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序显示抗原基因和遍在蛋白质基因均为所需基因 ,柔性接头序列也完全正确。结论 :成功地构建了中国株结核杆菌的 4种保护性抗原基因 -遍在蛋白质融合系统。

关键词：结核杆菌遍在蛋白质 DNA疫苗结核病

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乳酸脱氢酶法检测恶性疟原虫融合蛋白-2.9免疫血清体外抑制效果

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第3期24卷 223-225页

作者：曲莉潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的用乳酸脱氢酶(LDH)法检测恶性疟原虫融合蛋白(PfCP-2.9)免疫兔血清体外抑制恶性疟原虫生长的效果。方法将恶性疟原虫起始培养物的原虫率稀释为(0.4±0.1)%,红细胞压积为2%,使用不同浓度恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9免疫兔血清进... 详细信息

目的用乳酸脱氢酶(LDH)法检测恶性疟原虫融合蛋白(PfCP-2.9)免疫兔血清体外抑制恶性疟原虫生长的效果。方法将恶性疟原虫起始培养物的原虫率稀释为(0.4±0.1)%,红细胞压积为2%,使用不同浓度恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9免疫兔血清进行恶性疟原虫体外生长抑制试验,40～42h后分别用LDH检测法和传统镜检计数法检测原虫生长抑制率。结果PfCP-2.9免疫兔血清在体外对恶性疟原虫有较强的抑制作用。LDH测定法与传统镜检法测得体外恶性疟原虫抑制率相近(分别为97%和100%),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论LDH法检测恶性疟原虫体外抑制试验是一种简单、可行的实验方法。

关键词：恶性疟原虫体外抑制试验乳酸脱氢酶

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表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系的生物学特性

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 322-324页

作者：杨桦傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在小鼠胚胎干细胞系 R1中整合并高效稳定表达后对宿主细胞生物学特性的影响。方法 :从生长曲线、碱性磷酸酶表达水平、正常核型率及体内多向分化能力等 4个方面 ,对整合有 GFP高效表达载体的 R1ES细胞亚克... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在小鼠胚胎干细胞系 R1中整合并高效稳定表达后对宿主细胞生物学特性的影响。方法 :从生长曲线、碱性磷酸酶表达水平、正常核型率及体内多向分化能力等 4个方面 ,对整合有 GFP高效表达载体的 R1ES细胞亚克隆 ,进行生物学特性的比较分析。结果 :R1ES细胞与 4个高效稳定表达 GFP的 ES细胞克隆在细胞增殖速率、分化状态及正常核型率上均无显著差异 ;将 GFP(+ ) ES细胞接种裸鼠后 ,均可有效形成含有 3个胚层细胞的畸胎瘤。结论 :外源基因 GFP在 R1ES细胞中的整合及稳定高效表达对于 ES细胞的基本生物学特性无明显影响 ,为有效利用 GFP进行 ES细胞体内的示踪研究提供了保障。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞生物学特性小鼠基因表达

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CpG-寡核苷酸对巨噬泡沫细胞形成相关基因表达的调控作用

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 458-459页

作者：万斌胡振林周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片... 详细信息

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片杂交的结果．我们采用RT—PCR技术对相关基因的表达作了进一步研究。

关键词： CpG-寡核苷酸巨噬泡沫细胞形成相关基因表达调控作用 RT—PCR技术

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抗阿尔茨海默病重组真核表达载体的构建

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 55-57页

作者：何颖黄力章亚男黎怀星陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,... 详细信息

目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,然后以克隆出的小鼠 Ig G重链区 c DNA为模板 ,用 PCR法克隆出由柔性接头将抗原表位和 Ig G重链区基因融合在一起的序列 ,并插入到 p VAX质粒载体中。结果 :扩增出来的 4种不同组合的抗原表位基因和 Ig G重链区基因融合序列大小分别为 999、1 0 2 0、1 0 0 5、1 0 2 6 bp,均与 Gen Bank上登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果表明融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序亦显示抗原表位基因和 Ig G重链区基因为所需基因 ,接头序列也完全正确。结论 :成功构建了抗阿尔茨海默病的 4种表位基因 - Ig G重链区融合表达的重组质粒。

关键词：阿尔茨海默病重组真核表达载体抗原基因序列基因表达

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利用生物信息学鉴定新发现的膜联蛋白亚家族anx32

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 381-383页

作者：颜宏利孙树汉陈蕊雯第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海2004331

目的：对抗原基因cC1进行结构分析和初步功能研究。方法：利用网上生物信息学软件进行cC1的一级结构、二级结构分析，同源建模预测三级结构。白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）检测重组蛋白GST－anx32的抗凝血活性。结果：cC1在核酸水平... 详细信息

目的：对抗原基因cC1进行结构分析和初步功能研究。方法：利用网上生物信息学软件进行cC1的一级结构、二级结构分析，同源建模预测三级结构。白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）检测重组蛋白GST－anx32的抗凝血活性。结果：cC1在核酸水平和氨基酸水平均与膜联蛋白基因同源，具有4个同源结构区域，且每一个同源区域均具有膜联蛋白的典型motif“G－X－G－T（38 residues）－D／E”。抗凝血实验表明大肠杆菌表达的谷胱甘肽转移酶－cC1融合蛋白具有很强的抗凝血活性。结论；抗原基因cC1具有膜联蛋白家族的典型特征，但与已知的31个亚家族氨基酸序列的同源性均低于48％，因此是一个新的膜联蛋白亚家族成员，命名为膜联蛋白32（anx32）。为进一步研究其生理功能及核酸疫苗pcDNA3－γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的分子机制打下了基础。

关键词：生物信息学膜联蛋白同源建模抗凝药抗原基因结构分析重组蛋白GST-anx32

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Annexin B1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白

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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 333-334页

作者：张毅郭瀛军王芳高远舰颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC... 详细信息

目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC标记的AnnexinB1检测凋亡细胞。结果 :FITC标记的AnnexinB1与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合 ,使凋亡细胞呈阳性着色 ,能有效检测细胞凋亡。结论 :开发得到了一种新的细胞凋亡检测用蛋白AnnexinB1,为推广高效快捷的凋亡检测技术提供国产试剂奠定了基础。

关键词： AnnexinB1 细胞凋亡检测用蛋白

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乙肝DNA疫苗pVAX-PS对树鼩的免疫保护作用

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1102-1104页

作者：周凤娟胡振林戴建新施柯陈蕊雯林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:以树(鼠句)为实验对象研究乙肝DNA疫苗接种后所产生的免疫应答及对乙肝病毒攻击的保护作用。方法:以PCR法从adr亚型乙肝患者血清的病毒基因组中扩增含乙肝病毒的PreS2+S基因,插入pVAX1载体构建乙肝DNA疫苗pVAX-PS,并以此为候选疫苗... 详细信息

目的:以树(鼠句)为实验对象研究乙肝DNA疫苗接种后所产生的免疫应答及对乙肝病毒攻击的保护作用。方法:以PCR法从adr亚型乙肝患者血清的病毒基因组中扩增含乙肝病毒的PreS2+S基因,插入pVAX1载体构建乙肝DNA疫苗pVAX-PS,并以此为候选疫苗,从股四头肌接种免疫树(鼠句)。免疫接种方式为肌注2次,间隔2周。用ELISA法分析DNA免疫诱导的抗体水平及阳转率。DNA免疫后部分树(鼠句)用乙肝患者(HBsA+,HBeAg+,HBcAb+)血清进行病毒攻击实验,通过检测乙肝感染的备种血清学指标及肝组织病理的变化来评价DNA疫苗的免疫保护作用。结果:DNA疫苗免疫2周后开始检出HBsAB,6周后达到峰值,8周后所有免疫接种树(鼠句)抗体阳转;与阴性对照组相比,DNA疫苗免疫使乙肝病毒攻击所致的各项血清学指标阳转率明显降低,肝脏病理性损伤明显减轻。结论:乙肝DNA疫苗pVAX-PS免疫树(鼠句)后诱发明显的体液免疫应答,并对乙肝病毒感染提供有效的保护作用。

关键词：乙型肝炎 DNA疫苗 pVAX—PS 树鼩免疫保护作用免疫应答

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