检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第6期21卷 501-503页

作者：陈蕊雯林懿戴建新周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建 HBV核心抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内的表达及其免疫原性。方法 :采用 PCR法从 HBV全基因 DNA中获得核心抗原 DNA片段 ,并将其重组到 pc DNA3载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树 ,并检测其抗HBc Ig G。结果 :... 详细信息

目的 :构建 HBV核心抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内的表达及其免疫原性。方法 :采用 PCR法从 HBV全基因 DNA中获得核心抗原 DNA片段 ,并将其重组到 pc DNA3载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树 ,并检测其抗HBc Ig G。结果 :构建了乙肝核心抗原候选核酸疫苗 pc DNA3- HBc。免疫接种该疫苗后第 2周抗 HBc Ig G水平开始升高 ,小鼠至第 9周 ,树至第 7周升至峰值。结论 :构建的 pc DNA3- HBc

关键词： DNA 乙型肝炎核心抗原乙型肝炎 HBV

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人乙型肝炎病毒(ayw型)全基因组转基因小鼠病理学观察

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 205-207页

作者：余宏宇雷章恒龚志锦沙继宏杨勇骥潘星华王肖鹏傅继梁胡以平第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学基础医学部生物学教研室和医学分子遗传学开放实验室第二军医大学基础医学部电镜室

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３～２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、... 详细信息

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３～２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、肺、心、脑、睾丸（卵巢）、唾液腺、肌肉和皮肤等组织，切片ＨＥ染色后进行光镜和透射电镜形态观察。结果：上述两种清洁级小鼠大体和光镜下各器官和组织未见有明显病变；两种小鼠移入普通级环境下饲养４周后肝脏等器官发生机会性感染的机会相似；透射电镜下所有被检转基因小鼠的部分肝细胞扩张的滑面内质网等处有ＨＢｓＡｇ样颗粒和Ｄａｎｅ样颗粒，部分转基因小鼠之肾小管上皮细胞内见类似病毒颗粒；肝、肾细胞内未见其他亚微病理损害。结论：所建成的ＨＢＶ转基因小鼠既能在肝（其次肾）细胞内产生ＨＢＶ样病毒颗粒，但又不产生明显病理损害。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学动物模型

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钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 374-377页

作者：寇志华孙树汉郭嬴军陈祖欢施柯胡振林张洪英周凤娟第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆... 详细信息

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。

关键词：免疫原性钩端螺旋体外膜蛋白 LipL41基因原核表达基因表达基因克隆

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猪囊尾蚴Annexin32的组织定位

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 830-832页

作者：王庆敏胡振林王中川孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白... 详细信息

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白兔 ,获得抗 Annexin32的多克隆抗体 ;最后将新鲜剥离的囊尾蚴进行冰冻切片 ,用免疫组化方法进行定位研究。结果 :表达的 Annexin32蛋白可以被囊虫病病猪血清特异地识别。制备的多克隆抗体的效价为 1∶ 4 0万。免疫组化定位结果显示 ,Annexin32主要在囊壁中表达 ,头节部表达较少 ;囊尾蚴周边肌肉组织也有表达。结论 :Annexin32主要分布于囊尾蚴的囊壁 ,而且它可能是一种分泌性蛋白。

关键词：猪囊尾蚴 Annexin32 组织定位

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一种简便的蛋白质N端氨基酸测定方法

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第二军医大学学报 2000年第3期21卷 253-253,262页

作者：张平武魏林项洪刚孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

蛋白质(或多肽)的两端氨基酸序列测定是分析未知蛋白质的结构和功能的基础.目前蛋白质N端序列分析的技术已较为成熟,可达20～40个氨基酸残基,但由于N端氨基酸序列分析成本高(1 400～4 000元/次),不大可能反复多次检测.有些多肽N端氨基... 详细信息

蛋白质(或多肽)的两端氨基酸序列测定是分析未知蛋白质的结构和功能的基础.目前蛋白质N端序列分析的技术已较为成熟,可达20～40个氨基酸残基,但由于N端氨基酸序列分析成本高(1 400～4 000元/次),不大可能反复多次检测.有些多肽N端氨基酸是封闭的,降解后才能进行氨基酸序列分析.如果事先知道N端氨基酸是否封闭,一方面有利于选择序列分析的方式(N端、C端或降解后测序),另一方面可节省费用,也利于测序结果的分析.一个结构未知的酵母分泌蛋白,其相对分子质量为7.9×104,我们在分析其结构时采用DNS-Cl法对其N端氨基酸进行了测定,知其N端未封闭,然后进行氨基酸序列分析,取得了很好的效果.

关键词：蛋白质 N端氨基酸序列分析 DNS-C1法测定

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膜联蛋白A5 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 41-43页

作者：颜宏利贺燕刘凡杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以... 详细信息

目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以亲合层析法纯化表达的融合蛋白 ,用 KPTT法验证抗凝血活性。结果 :凝胶电泳显示 PCR扩增产物的长度为 978bp,重组质粒测序结果表明 ,插入片段与人膜联蛋白 A5的序列完全一致。在 IPTG诱导下 ,K80 2重组菌高效表达出相对分子质量为 5 80 0 0的融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 2 6 %。纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。结论 :成功克隆人膜联蛋白

关键词：膜联蛋白A5 cDNA 克隆大肠杆菌基因表达

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口蹄疫病毒融合表位基因在原核及真核表达系统中的正确表达

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1195-1197页

作者：张洪英郭瀛军陈祖欢林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃... 详细信息

目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃培养2h后用IPTG诱导5h,融合蛋白在2×YT培养液中得到高效表达;全菌中相应蛋白条带与阳性抗体呈阳性反应,阳性反应强弱基本与表位特性及数量有关;得到4个P815细胞阳性克隆,培养上清、细胞膜和细胞质的抗原均为阳性,其中培养上清中浓度较低,细胞膜和细胞质中浓度较高。结论:CAD的融合表位基因在原核和真核系统均得到正确表达;CAD对于表位研究的设计很有帮助。

关键词：口蹄疫病毒表位基因表达真核系统原核系统计算机辅助设计

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Annexin32酵母分泌型表达载体的构建及其高拷贝转化子的快速筛选

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 695-696页

作者：杨湘越武圣明陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

Annexin家族是20世纪70年代末发现的一类钙依赖性磷脂结合蛋白，广泛存在于真核生物细胞内，迄今为止已发现31个annexin亚家族。

关键词： Annexin32 酵母分泌型表达载体构建高拷贝转化子快速筛选毕赤酵母 G418抗性筛选

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猪囊尾蚴DNA疫苗在猪组织中的分布

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 833-835页

作者：郭瀛军王庆敏张洪英陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :分析猪囊尾蚴 DNA疫苗 pc DNA3- c C1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法 :分别于疫苗接种后 1d、7d、4周、8周 ,提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸腺、外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总 DNA,通过 PCR的方... 详细信息

目的 :分析猪囊尾蚴 DNA疫苗 pc DNA3- c C1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法 :分别于疫苗接种后 1d、7d、4周、8周 ,提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸腺、外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总 DNA,通过 PCR的方法检测疫苗质粒在各组织中的分布及随时间变化的情况。结果 :疫苗接种后的第 1天几乎所有组织中都检测到质粒 ;但随着时间的延续 ,仅在注射部位的肌肉和皮肤中检测到质粒的存在 ,并保持到 8周以上。结论 :肌注疫苗质粒后。

关键词：猪囊尾蚴 DNA疫苗猪组织分布药代动力学

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抗平颏海蛇短链神经毒素全人源单克隆抗体的筛选、制备及生物活性研究

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解放军医学杂志 2017年第7期42卷 612-616页

作者：胡适沈亚峰李天雷长海第二军医大学基础医学部生物物理学教研室上海200433

目的重组表达3种平颏海蛇短链神经毒素,利用噬菌体抗体库筛选制备全人源抗毒素单克隆抗体并评估其生物活性。方法以重组表达纯化的神经毒素蛋白作为抗原,从自主构建的噬菌体抗体库中筛选获得噬菌体抗体,经序列测定确定其抗体类型后构建... 详细信息

目的重组表达3种平颏海蛇短链神经毒素,利用噬菌体抗体库筛选制备全人源抗毒素单克隆抗体并评估其生物活性。方法以重组表达纯化的神经毒素蛋白作为抗原,从自主构建的噬菌体抗体库中筛选获得噬菌体抗体,经序列测定确定其抗体类型后构建完整抗体。利用真核表达系统表达纯化抗体后鉴定其抗原结合活性、生化特性及药代动力学特性。在体内验证抗体药物的抗毒素作用。结果经过4轮筛选,获得2株能同时结合3种神经毒素的噬菌体单链抗体,并将其制备成完整的抗体,进一步证实所获得的抗体可特异性结合3种抗原。2株全人源抗体均可拮抗神经毒素对昆明小鼠的致死作用。结论利用重组神经毒素和噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗平颏海蛇短链神经毒素的全人源治疗性抗体。

关键词：平颏海蛇短链神经毒素单克隆抗体全人源抗体抗毒素

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