检索结果-内蒙古大学图书馆

一种改良的分离小分子蛋白质的电泳方法——Tricine-SDS-PAGE

第二军医大学学报 1999年第9期20卷 696-697页

作者：蔡在龙陈世敏冯伟华周雍毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相... 详细信息

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相对分子质量为２万以下的蛋白质分离效果欠佳。我们结合文献［２，３］，通过探索，建立了一种有效分离小分子蛋白质、多肽的电泳方法，为小分子蛋白质、多肽的研究提供极大方便。１　材料和方法１．１　主要试剂和设备　Ｔｒｉｃｉｎｅ｛Ｎ［三（羟甲基）甲基］甘氨酸｝、尿素、Ｔｒｉｓ购自Ｓｉｇｍａ公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺购自Ｓａｎｇｏｎ公司；垂直平板电泳槽购自中科院生物化学研究所；电泳仪Ｐｏｗ

关键词：蛋白质小分子蛋白分离电泳

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超临界流体萃取-胶束电动毛细管色谱法测定银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素的含量

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第二军医大学学报 2000年第10期21卷 958-960页

作者：佘佳红柳正良王春燕陈燕第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学药学院药物分析教研室上海200433

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4... 详细信息

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4m l;改性剂 0 .2 ml乙醇。 MECC条件 :空心熔融石英毛细管柱 ( 5 5 cm× 75μm ) ;缓冲液为磷酸二氢钠 -硼砂 =2 5 - 6 .2 5mm ol/L ( p H 8.5 ) ;SDS 35 mmol/L ;检测波长 2 5 4nm。结果 :SFE时改性剂对萃取效率的影响最大 ;MECC以肉桂酸为内标 ,在 2 1.2～ 10 6 .0μg/ml和 2 0 .0～ 10 0 .0μg/ml范围内 ,槲皮素和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。 40 ,6 0和 80μl槲皮素的加样回收率分别为 93.87% ,94.0 2 %和 94.10 % ;40 ,6 0和 80μl山奈素的加样回收率分别为 94.5 0 % ,94.17%和 94.2 5 %。结论 :SFE与 MECC法联用 ,简便快速 ,可用于银杏叶粗提物中的黄酮类成分的分离分析。

关键词：银杏叶粗提物斛皮素山奈素 SFE-MECC法

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重组人白介素-11对猕猴的长期毒性实验

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 360-363页

作者：吴浩袁伯俊刘俊平张淑英陆国才戴益民第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 长海医院病理科

目的 :观察重组人白介素 - 11(rh IL - 11)对猕猴的长期毒性。方法 :18只猕猴分别按体质量随机分为 4组。高剂量组6只 ,余均为 4只。低、中、高剂量分别为 0 .1、0 .3和 1.0 mg/kg。每天 sc给药 1次 ,连续 90 d。停药观察 30 d。观察... 详细信息

目的 :观察重组人白介素 - 11(rh IL - 11)对猕猴的长期毒性。方法 :18只猕猴分别按体质量随机分为 4组。高剂量组6只 ,余均为 4只。低、中、高剂量分别为 0 .1、0 .3和 1.0 mg/kg。每天 sc给药 1次 ,连续 90 d。停药观察 30 d。观察症状和检测项目有 :一般状况、心电图、血液学及生化指标、尿液、免疫、骨髓、脏器质量、组织学检查。结果 :所有给药组猕猴食量明显减少 ,体质量有所减轻 ,并有短暂性发热。低剂量组有 1只猕猴肢体活动受限 ,震颤。高剂量组 1只猕猴出现呕吐 ,1只死亡。给药组 RBC、Hb、Hct、MCV、MCH和 MCHC均明显降低 ,Plat则明显增高。 AL T、AST、L DH活性明显下降 ,TP和 Alb含量明显下降 ,AL P活性明显升高。给药 90 d各给药组猕猴均出现抗 IL - 11抗体 ,免疫复合物也明显增高。高、中剂量组骨髓有核细胞增生明显活跃。给药组心、肝的绝对质量有增大的趋势 ,相对质量明显增大。给药 90 d时 ,给药组猕猴肝、肾出现明显的细胞变性 ,中、高剂量组重于低剂量组。停药后 30 d上述变化均趋向恢复。结论 :rh IL - 11对猕猴的毒性靶器官及系统有 :血液系统、肝脏、肾脏、免疫系统、骨髓。其毒性损害均为可逆性。 rh IL - 11对猕猴的 3个月长期毒性安全剂量为每次 0 .1m g/kg。

关键词：重组人白细胞介素-11 毒性猕猴

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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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第二军医大学学报 2000年第4期21卷 322-325页

作者：陈志辉管惟滨吴少廷缪为民焦炳华第二军医大学基础医学部寄生虫学教研室上海200433 深圳市卫生防疫站第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

目的：克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白２全基因，并在大肠杆菌中进行表达。方法：采用ＰＣＲ扩增恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＰ２基因，克隆插入ｐＵＣ１９，并重组人表达质粒载体中，转化大肠杆菌，诱导重组质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ／... 详细信息

目的：克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白２全基因，并在大肠杆菌中进行表达。方法：采用ＰＣＲ扩增恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＰ２基因，克隆插入ｐＵＣ１９，并重组人表达质粒载体中，转化大肠杆菌，诱导重组质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ／ｍｓｐ２表达ＭＳＰ２蛋白抗原，对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｗｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增出８２４ｂｐＤＮＡ片段。

关键词：恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2 基因克隆大肠杆菌

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p53截短突变群的建立及其在HeLa细胞的表达

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 57-60页

作者：娄永华彭艳焦炳华孔宪涛第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 长征医院实验诊断科

目的 :建立一组 p5 3截短突变群 ,分析缺失突变对 P5 3蛋白质功能的影响。方法 :以野生型 p5 3基因为模板 ,采用PCR定点突变技术 ,建立一组 P5 3蛋白质 N端和 (或 ) C端缺失的截短突变群 ,构建真核表达载体 ,基因转移 He L a细胞 ,分... 详细信息

目的 :建立一组 p5 3截短突变群 ,分析缺失突变对 P5 3蛋白质功能的影响。方法 :以野生型 p5 3基因为模板 ,采用PCR定点突变技术 ,建立一组 P5 3蛋白质 N端和 (或 ) C端缺失的截短突变群 ,构建真核表达载体 ,基因转移 He L a细胞 ,分析转移基因表达及 p5 3下游相关基因表达。结果 :构建的 p5 3截短突变群在 He L a细胞中表达 ,并对 p5 3下游相关基因的表达模式产生一定的影响。结论 :p5 3截短突变群可以作为一个研究 p5 3与下游基因相互作用的良好工具 ,对于研究 p5 3的功能调节机制有重要的价值。

关键词： p53基因基因点突变基因转染基因表达 HeLa细胞

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重组THANK诱导表达和变性、复性及纯化

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第二军医大学学报 2001年第9期22卷 823-826页

作者：吴东沈锋娄永华彭敏焦炳华吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学基础医学部分子毒理学教研室

目的 :获得较纯的具有生物学活性的 THANK蛋白。方法 :THANK基因在大肠杆菌中高效表达 ,菌体超声破碎后 ,以洗涤剂反复洗涤包涵体。包涵体经 8mol/L尿素变性溶解后 ,再用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤层析初步纯化 ,对重组蛋白浓度、氧... 详细信息

目的 :获得较纯的具有生物学活性的 THANK蛋白。方法 :THANK基因在大肠杆菌中高效表达 ,菌体超声破碎后 ,以洗涤剂反复洗涤包涵体。包涵体经 8mol/L尿素变性溶解后 ,再用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤层析初步纯化 ,对重组蛋白浓度、氧化还原剂等复性参数进行优化和选择 ,将蛋白稀释复性。复性后组分经 Q Sapharose Fast Flow离子交换层析再次纯化 ,最后以 Sep hadex G- 2 5脱盐。结果 :得到了纯度 >97%、具有一定生物学活性的 THANK蛋白。结论 :THANK蛋白变性、复性及纯化方法的建立 ,为

关键词： THANK 重组蛋白质类基因表达基因调控免疫调节肿瘤细胞

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水飞蓟中微量元素与肝炎患者体内微量元素变化的临床意义

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第二军医大学学报 1994年第6期15卷 584-587页

作者：王颖赵德山王淑荣李小萍贺清玉第二军医大学基础医学部化学教研室第二军医大学长海医院传染科河南焦作市第二人民医院第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

水飞蓟中微量元素与肝炎患者体内微量元素变化的临床意义王颖，赵德山，王淑荣，李小萍，贺清玉现已发现影响人体健康的重要微量元素有１５种［１］，其中任何一种元素过多或过少均可使人呈现一种特异性病症。肝脏对维持机体微量元素的... 详细信息

水飞蓟中微量元素与肝炎患者体内微量元素变化的临床意义王颖，赵德山，王淑荣，李小萍，贺清玉现已发现影响人体健康的重要微量元素有１５种［１］，其中任何一种元素过多或过少均可使人呈现一种特异性病症。肝脏对维持机体微量元素的动态平衡起着重要作用，因此，检测肝...

关键词：水飞蓟微量元素肝炎

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建立pESnx／FL穿梭质粒致突变测试系统的实验研究

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第二军医大学学报 1994年第4期15卷 318-322页

作者：印木泉徐唯邱信芳薛京伦第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室复旦大学遗传学研究所

本研究用电穿孔法将带有邻苯二酚氧化酶基因（ｘＹ１Ｅ基因）的质粒ｐＥＳｎｘ转染至５种哺乳动物细胞（ＦＬ，ＨＴ，ＬＴＲ，ＰＡ３１７和Ｗｇ３－ｈ）。结果表明，质粒ｐＥＳｎｘ在５种细胞中均可形成抗性克隆。但是，仅ｐＥＳｎｘ／... 详细信息

本研究用电穿孔法将带有邻苯二酚氧化酶基因（ｘＹ１Ｅ基因）的质粒ｐＥＳｎｘ转染至５种哺乳动物细胞（ＦＬ，ＨＴ，ＬＴＲ，ＰＡ３１７和Ｗｇ３－ｈ）。结果表明，质粒ｐＥＳｎｘ在５种细胞中均可形成抗性克隆。但是，仅ｐＥＳｎｘ／ＦＬ克隆可获得每皿５０个以上的转化子和低于１０－４的自发突变率，符合穿梭质粒测试系统的要求。为进一步验证可用于检测致突变性，用已知可诱发点突变的致癌物亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理ｐＥＳｎｘ／ＦＬ克隆细胞。结果表明，ＭＮＮＧ的诱发突变率高于自发突变率２７．８倍，并有剂量－效应关系。突变子快速鉴定结果显示，质粒稳定地存在于突变子中，并无大片段缺失和分子量改变，证实ＭＮＮＧ诱变的是点突变。

关键词：邻苯二酚氧化酶基因致突变质粒

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Toll样受体及其信号转导

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 304-308页

作者：王梁华司宇红焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 中国药科大学生物制药学院南京210009

Toll样受体 (TLR)介导着绝大部分哺乳动物、昆虫及植物的宿主防御 .TLR4与配体结合涉及膜抗原CD14和分泌蛋白MD 2的调节并一起形成受体复合物 ,然后与接头分子MyD88结合 ,使IRAK磷酸化 ,再使TRAF6寡聚化 ,随后激活控制着各种效应基因表... 详细信息

Toll样受体 (TLR)介导着绝大部分哺乳动物、昆虫及植物的宿主防御 .TLR4与配体结合涉及膜抗原CD14和分泌蛋白MD 2的调节并一起形成受体复合物 ,然后与接头分子MyD88结合 ,使IRAK磷酸化 ,再使TRAF6寡聚化 ,随后激活控制着各种效应基因表达的转录因子NF κB .

关键词：病原识别 Toll样受体信号转导

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骨骼肌兴奋-收缩偶联超微结构瞬时变化研究

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第二军医大学学报 1999年第3期20卷 151-153页

作者：杨勇骥雷长海吴越沙继宏叶煦亭余宏宇夏金辉第二军医大学基础医学部生物物理研究所第二军医大学卫生勤务学系计算机教研室第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学基础医学部生理学教研室

目的：从毫秒级功能变化水平实时观察骨骼肌在潜伏期内的细胞超微结构形态变化。方法：采用双向红外线探测器－计算机控制的电刺激与超低温快速冷冻固定同步技术，对电刺激后的蟾蜍腓肠肌组织作快速冷冻固定，采用透射电镜对该肌在电刺... 详细信息

目的：从毫秒级功能变化水平实时观察骨骼肌在潜伏期内的细胞超微结构形态变化。方法：采用双向红外线探测器－计算机控制的电刺激与超低温快速冷冻固定同步技术，对电刺激后的蟾蜍腓肠肌组织作快速冷冻固定，采用透射电镜对该肌在电刺激后０．８，５．６，８．４ｍｓ及静息期的超微结构变化进行对比研究。结果：骨骼肌组织处于静息期时，其肌膜与肌纤维的间隙较宽，受电刺激后０．８ｍｓ开始至８．４ｍｓ，肌膜与肌细胞间的间隙大大变窄。并发现骨骼肌组织在电刺激后０．８，５．６及８．４ｍｓ时肌浆网前端的膜产生两个圆孔，而当骨骼肌处于静息期时肌浆网膜并无此形态结构。结论：当骨骼肌兴奋－收缩偶联发生时，肌膜在产生去极化的同时产生位移，并与肌纤维的间距发生改变；骨骼肌收缩时肌浆网膜出现小孔。

关键词：骨骼肌兴奋-收缩偶联超微结构

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