检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第4期23卷 403-406页

作者：吴晓兰潘卫马仲才陈秋莉武文斌曹明媚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a... 详细信息

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a的活性相当，并能被 IFN-α单抗中和。结论：hlFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达，即成功地建立了噬菌体展示外源肽（hIFN-α）的技术平台。

关键词：人干扰素-α 抗病毒活性噬菌体表面展示

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血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

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第二军医大学学报 2001年第1期22卷 36-39页

作者：贺祥王路潘卫曹明媚芮耀诚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2... 详细信息

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2 0 0分子筛纯化 ;通过体外内皮细胞 (ECV30 4)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜 (CAM)新生血管实验检测其抑制活性。结果 :Endo-statin在 DH5α中的表达率为 2 8.5 % ,纯化后纯度可达 90 .5 %。 Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖 ,IC5 0 为 72μg/ m l;2 0μg/ ml时使细胞于 48h发生明显凋亡 ;2 0 0μg/ ml的 endostatin可使 CAM新生血管化率下降 30 %。结论 :研究结果表明 endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用。

关键词：血管生成抑素基因表达内皮细胞生物学效应 ENDOSTAIN 胶原蛋白

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HCV核心和截短的包膜蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性

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第二军医大学学报 2004年第9期25卷 962-965页

作者：朱诗应赵平任浩赵兰娟戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fa... 详细信息

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fast Bac HTa构建重组转座质粒 p FB- CE2 t,转化 DH10 Bac大肠杆菌 ,获得重组杆状病毒穿梭质粒 Bacmid- CE2 t,以之转染昆虫 Sf9细胞进行外源基因的表达 ,并对其抗原性进行 EL ISA检测。结果 :SDS- PAGE和 Western blot分析表明Bacmid- CE2 t在 Sf9细胞表达了 HCV C- E2蛋白 ,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的 C蛋白和截短的 E2蛋白。纯化后的蛋白能分别与 HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应。结论 :HCV核心蛋白和截短的

关键词：肝炎病毒,丙型核心蛋白截短的E2蛋白昆虫Sf 9细胞

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随机多肽噬菌体展示载体pCANTAB5X的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 723-725页

作者：潘卫戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法：在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列，将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中，再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果：限制... 详细信息

目的：构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法：在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列，将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中，再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果：限制酶切点ＸｂａⅠ和ＨＧＶＣ片段被引入到新构建的噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ中。结论：构建的新的噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ能有效展示外源性随机多肽。

关键词：噬菌体展示随机多肽外源性 pCANTAB5X

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羟甲芬太尼对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 168-171页

作者：许欣李强孙学军张殿尧王成海第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :探讨 μ阿片受体激动剂羟甲芬太尼 (OMF)对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响。方法 :将 86只雄性 SD大鼠随机分为正常组和慢性缺氧组 ,慢性缺氧模型由经尾静脉 6次注射木瓜蛋白酶而建立。正常组大鼠侧脑室微量注射 OMF(n=1 0 )和同体... 详细信息

目的 :探讨 μ阿片受体激动剂羟甲芬太尼 (OMF)对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响。方法 :将 86只雄性 SD大鼠随机分为正常组和慢性缺氧组 ,慢性缺氧模型由经尾静脉 6次注射木瓜蛋白酶而建立。正常组大鼠侧脑室微量注射 OMF(n=1 0 )和同体积人工脑脊液 (a CSF) (n=1 0 )。慢性缺氧组大鼠又随机分为 :(1 )侧脑室组 ,分别微量注射阿片受体拮抗剂纳络酮(NL X) (n=1 2 )和 OMF(n=1 2 ) ,同时另有两组均注射 a CSF(n=1 2 )作为对照 ;(2 )孤束核组 ,分别微量注射 OMF(n=9)和同体积 a CSF(n=9)。在注射后 5、1 5、30、4 5、6 0 min测定各组大鼠呼吸频率 (RR)和潮气量 (VT)。结果 :正常大鼠侧脑室注射OMF后 1 5、30、4 5、6 0 min,RR、VT 均显著下降 (P<0 .0 5 ) ;慢性缺氧大鼠侧脑室及孤束核注射 OMF后 1 5、30、4 5、6 0 m in,RR、VT 均显著降低 (P<0 .0 1 ) ,侧脑室注射 NL X后 1 5、30、4 5、6 0 m in,RR、VT均显著增高 (P<0 .0 5 )。结论 :μ阿片受体激动剂可能通过中枢相应受体降低 RR、VT 等呼吸指标。

关键词：羟甲芬太尼慢性缺氧大鼠呼吸功能 μ阿片受体激动剂

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庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制(英文)

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 389-393页

作者：王宏卫潘欣戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :研究 HGV和 HCV的复制和表达。方法 :利用 HGV全长 c DNA克隆 (HGVqz)及 HCV1 a/ 1 b嵌合体 c DNA克隆分别构建表达质粒 p3.1 HGV和 p3.1 HCV并转染张氏肝细胞 ,以 HGVqz克隆建立 HGV转基因小鼠。分别应用 RT- PCR、免疫组化及 W... 详细信息

目的 :研究 HGV和 HCV的复制和表达。方法 :利用 HGV全长 c DNA克隆 (HGVqz)及 HCV1 a/ 1 b嵌合体 c DNA克隆分别构建表达质粒 p3.1 HGV和 p3.1 HCV并转染张氏肝细胞 ,以 HGVqz克隆建立 HGV转基因小鼠。分别应用 RT- PCR、免疫组化及 Western印迹分析病毒正、负链 RNA,蛋白表达和剪切。结果 :在转染 p3.1 HCV的张氏肝细胞及 HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链 RNA,但在转染 p3.1 HGV的张氏肝细胞中未能检出 HGV负链 RNA。Western印迹在转染 p3.1 HCV的张氏肝细胞中检测到针对 HCV NS3蛋白、相对分子质量约 70 0 0 0的特异性条带 ,在 HGV转基因小鼠某些组织中检测到 2条特异性条带 ,相对分子质量约 4 2 0 0 0和 1 0 0 0 0 0 ,分别相当于 HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而 ,在转染p3.1 HGV的张氏肝细胞中检测到针对 HGV E2蛋白的特异性条带 ,其相对分子质量约为 31 0 0 0 0 ,相当于 HGV整个前体蛋白。结论 :HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用 ,HGV和 HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异。

关键词：庚型肝炎病毒全长cDNA克隆表达复制丙型肝炎病毒

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人胚胎生殖系细胞分离与体外培养的初步研究

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 941-943页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏熊俊蒋正戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消... 详细信息

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消化法培养所获得的克隆较单纯机械分离方法多,原代培养时种植到饲养层上效果较好.将分离到的组织用0.25%胰酶消化3 min,种植到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞上培养3 d,挑取克隆传代,在第10天形成30.7 个阳性克隆,显著高于其他方法获得的阳性克隆数.用碱性磷酸酶标记的细胞(克隆)具有多样性,细胞胞体为圆形,分为有突起和无突起两种;阳性细胞克隆呈圆球形、条带形和块形,与周围细胞分界清楚.结论:人胚胎体内的微环境限制生殖系细胞的体外扩增培养,原代培养需要在饲养层上进行且宜用酶消化法尽早传代.

关键词：胚胎生殖系细胞细胞分离体外培养碱性磷酸酶

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人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应条件的确立

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 920-921页

作者：徐晓辉王学敏谭金兴徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

热休克反应在生物界广泛存在，热休克时细胞变化的机制是当前研究的一个重要领域。本实验在热休克反应时糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）减少机制的研究中，确立了人肝癌SMMC-7721细胞的热休克反应条件。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应细胞培养肝肿瘤糖皮质激素

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原发性肝癌CD44v　mRNA表达与肝癌复发的关系

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 561-563页

作者：刘鹏飞吴孟超陈汉钱光相傅继梁第二军医大学东方肝胆外科医院第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：研究原发性肝癌ＣＤ４４ｖ的表达与其侵袭转移的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法及术后随访分析５４例原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况及其与侵袭转移的关系。结果：９２．５９％的病例肝癌组织ｃＤ４４ｖｍＲＮＡ阳性表... 详细信息

目的：研究原发性肝癌ＣＤ４４ｖ的表达与其侵袭转移的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法及术后随访分析５４例原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况及其与侵袭转移的关系。结果：９２．５９％的病例肝癌组织ｃＤ４４ｖｍＲＮＡ阳性表达，其中中－高度表达者占７７．７８％。在中－高度表达的病例中，肿瘤包膜的缺如、穿破，门静脉癌栓及瘤周卫星结节形成等侵袭转移相关指标明显高于阴性－微弱表达的病例（Ｐ＜０．００１）。随访回报４６例，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ中－高度表达者复发率（７７．１５％）明显高于阴性－微弱表达的病例（３６．３６％，Ｐ＜０．０２５），而前者生存率（２５．７１％）则明显较后者（７７．７８％）为低（Ｐ＜０．００５）。结论：原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达能够反映肝癌的侵袭转移潜能。

关键词： CD44 肝肿瘤复发 mRNA 表达癌

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原发性肝癌CD44v mRNA表达与抑癌基因DCC mRNA表达、癌细胞DNA含量的关系

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 215-218页

作者：刘鹏飞吴孟超陈汉钱光相傅继梁第二军医大学东方肝胆外科医院第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：探讨原发性肝癌中ＣＤ４４ｖ表达与抑癌基因ＤＣＣ表达、癌细胞ＤＮＡ含量之间的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测３０例原发性肝癌中ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ和ＤＣＣｍＲＮＡ的表达情况，并根据ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况取２... 详细信息

目的：探讨原发性肝癌中ＣＤ４４ｖ表达与抑癌基因ＤＣＣ表达、癌细胞ＤＮＡ含量之间的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测３０例原发性肝癌中ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ和ＤＣＣｍＲＮＡ的表达情况，并根据ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况取２０例标本（阴性及微弱表达者１０例为Ⅰ组；高度表达者１０例为Ⅱ组）检测其癌细胞ＤＮＡ干系水平。结果：３０例受检标本中，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ中度以上表达２３例（７６．６７％），ＤＣＣｍＲＮＡ表达缺失者１８例（６０％），且两者基本重合。在ＤＮＡ干系水平方面，Ⅰ组病例二倍体明显高于Ⅱ组病例，异倍体则明显低于Ⅱ组的病例（Ｐ＜０．０１）；转移相关的临床病理指标Ⅱ组亦较Ⅰ组为重。结论：在原发性肝癌的侵袭转移过程中，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的高表达与ＤＣＣｍＲＮＡ的表达缺失关系密切，两者间可能有协同关系。此外，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ表达与肝癌细胞ＤＮＡ干系水平的变化一致，再次证实了ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ表达在肝癌侵袭转移中的重要性。

关键词：肝肿瘤细胞粘附分子 mRNA 抑癌基因 CD44V

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