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中国海洋生化学术会议

作者：宋志刚许强芝焦炳华华东师范大学生命科学院第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室华东师范大学生命科学院

海洋生物活性物质,可以为新药研究提供先导化合物。海洋生物将是本世纪人们研究开发的重要药物资源。目前发现的许多海洋生物活性物质分离自海洋微生物(包括海洋细菌、海洋真菌和海洋放线菌),其化学结构丰富多样,许多分子结构新颖独特,... 详细信息

海洋生物活性物质,可以为新药研究提供先导化合物。海洋生物将是本世纪人们研究开发的重要药物资源。目前发现的许多海洋生物活性物质分离自海洋微生物(包括海洋细菌、海洋真菌和海洋放线菌),其化学结构丰富多样,许多分子结构新颖独特,是陆地生物所不具有的,海洋微生物有产生生物活性物质的巨大潜力(Carte, 1996)。由于筛选海洋生物活性物质是独特而且未知的,很难通过经验筛选或定向筛选来获得,而在分离过程中含量较低需要进行活性跟踪才能的到具有活性的化合物。因此如何建立灵敏、方便、快捷的活性物质筛选模型将对实验的成败起着决定性的作用。生物自显影技术可在筛选化合物时起到重要的作用,Homans A.L.等人已经利用它来筛选抗真菌的天然代谢产物。

关键词：生物自显影微生物活性物质纸片法硅胶板枯草芽抱杆菌黄瓜黑星病菌生物自显影技术化合物海洋放线菌培养皿生长抑制

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高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白

高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白

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中国海洋生化学术会议

作者：张兴群王梁华焦炳华缪辉南袁勤生第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室华东理工大学生物反应器国家重点实验室华东理工大学生物反应器国家重点实验室华东理工大学生物反应器国家重点实验室第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室

破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF或称Osteoprotegerin,OPG)可通过抑制破骨细胞形成、抑制成熟破骨细胞活性并诱导其凋亡实现对骨密度的调节,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。骨质疏松症、Paget’s病... 详细信息

破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF或称Osteoprotegerin,OPG)可通过抑制破骨细胞形成、抑制成熟破骨细胞活性并诱导其凋亡实现对骨密度的调节,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。骨质疏松症、Paget’s病、癌症骨转移等导致的骨破坏都与破骨细胞分化增殖异常活跃和骨吸收过量密切相关,因此,OCIF研究将为这些骨骼类疾病的预防和治疗提供帮助。本研究在获得OCIF活性结构域(OCIFAD)克隆与表达基础上,进一步考察了实现发酵罐高密度发酵表达可溶性OCIFAD融合蛋白的各种参数,实现了高表达。

关键词：高密度发酵高密度培养

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浙江舟山群岛12种海洋动物中生物活性物质的初步筛选

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中国海洋药物 2005年第1期24卷 37-39页

作者：范秋领黄才国缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

利用抗菌模型和肿瘤细胞毒模型,对浙江舟山群岛12种海洋动物中的生物活性物质进行了筛选。结果表明,7种动物的乙醇提取物有明显的抗金黄色葡萄球菌作用,其中,泥螺乙醇提取物的活性最强;大竹蛏和泥螺的乙醇提取物以及纵条肌海葵的水提... 详细信息

利用抗菌模型和肿瘤细胞毒模型,对浙江舟山群岛12种海洋动物中的生物活性物质进行了筛选。结果表明,7种动物的乙醇提取物有明显的抗金黄色葡萄球菌作用,其中,泥螺乙醇提取物的活性最强;大竹蛏和泥螺的乙醇提取物以及纵条肌海葵的水提物对SMMU-7721细胞有明显的细胞毒活性,IC50分别为89, 71,63.2μg·mL-1。

关键词：海洋动物抗菌活性肿瘤细胞毒活性筛选

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因氧化损伤与修复研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第10期31卷 887-894页

作者：汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入... 详细信息

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入细胞后 ,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似 ,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化 .由于线粒体的正常功能为修复机制所必需 ,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力 ,发现 9mmol/L四氧嘧啶培养细胞 1h后 ,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后 0 ,2 ,8和 2 4h时间点均无明显变化 .提取各组细胞的mtDNA ,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸 ,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA ,进行DNA印迹实验 ,地高辛抗体碱性磷酸酶系统显色 ,检测完整与断裂的mtDNA量 ,利用Poisson公式 (s=-lnP0 /P ,P0 为未断裂链光密度值 ,P为所有链光密度值总和 )计算一个mtDNA分子的平均损伤频率 ,结果显示 ,9mmol/L四氧嘧啶处理细胞 1h ,链平均损伤频率由对照的 0 11个 /分子增加至 5 6 0个 /分子 ,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤 ,除去药物后 8h ,绝大部分损伤可被修复 ,损伤频率减至

关键词：线粒体DNA tRNA^Leu(UUR) 突变人线粒体亮氨酰tRNA合成酶 A3243G 体外转录基因表达

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胶质细胞源性神经营养因子受体α1定点突变体制备及其稳定转染细胞株的构建及鉴定

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1082-1085页

作者：朱伟张勇陈哲宇王丽梅路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 ... 详细信息

目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 B抗性筛选标记的 pc DNA3.1- RET质粒共转染野生型 PC12细胞 ,建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定PC12细胞株。经 Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入 PC12细胞中的各 r GFRα1突变体基因和 RET基因的表达进行鉴定。结果 :Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达。结论 :成功构建了 r GFRα1各突变体基因和 RET基因同时转入表达的稳定细胞株 ,为研究 r GFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)信号转导的作用奠定基础。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1) RET PC12细胞

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Dok1与表皮生长因子受体之间相互作用的酵母双杂交研究

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第二军医大学学报 2004年第7期25卷 755-758页

作者：张勇刘秀杰张骐阎志勇矫力刘翾路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 ... 详细信息

目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 PTB及 dok1 ΔPTB与 B4 2 AD蛋白融合作为激活域蛋白 ,共转化酵母菌后 ,通过 β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用。结果 :dok1及 dok1 PTB与 EGFR之间在酵母中存在结合 ,而 dok1Δ PTB不与 EGFR结合。结论 :首次证实 EGFR与 dok1之间具有相互作用 ,dok 1的

关键词：表皮生长因子受体 dok1 PTB 酵母双杂交

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疟疾疫苗研究的现状和展望

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 1-4页

作者：潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室

疟原虫抗药性及疟蚊对杀虫剂抗性的产生和迅速扩散迫切需要研究新的疟疾防治方法,以控制该传染病的流行.根据自愿者试验、动物模型及现场研究结果,研制疫苗预防疟疾是可行的.当前,全球科学家正在研制3种类型的疟疾疫苗--抗红内期原虫疫... 详细信息

疟原虫抗药性及疟蚊对杀虫剂抗性的产生和迅速扩散迫切需要研究新的疟疾防治方法,以控制该传染病的流行.根据自愿者试验、动物模型及现场研究结果,研制疫苗预防疟疾是可行的.当前,全球科学家正在研制3种类型的疟疾疫苗--抗红内期原虫疫苗、抗红前期原虫疫苗和传播阻断疫苗,其中一些候选疫苗已进入临床试验,并产生有意义的结果.由于疟原虫具有复杂的生活史、抗原变异和多种入侵途径,有效疫苗的研制将面临极大的困难,但是这种疫苗终究能够研制成功.

关键词：疟疾疫苗红内期红前期传播阻断

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嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 301-303页

作者：马玉海张勇曹莉张少成潘永太麻文谦孙来卿路长林第二军医大学长海医院骨科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用。方法 :30只 SD大鼠随机分为 OECs组和对照组 ,每组 1 5只 ;切除 3m m右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复 ,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的 O... 详细信息

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用。方法 :30只 SD大鼠随机分为 OECs组和对照组 ,每组 1 5只 ;切除 3m m右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复 ,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的 OECs和生理盐水 ;术后 4、8和 1 2周分别行电生理和组织学检查。结果 :术后 4、8和 1 2周 ,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生 ,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0 .0 5 )。结论 :外源性

关键词：嗅鞘细胞大鼠坐骨神经神经再生细胞移植

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疟疾监测及早期预警系统

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 5-8页

作者：朱淮民第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

对疟疾流行情况进行常年监测是疟疾流行病学研究的基本要求。在此基础上发展的疟疾早期预警系统 (MEWS)通过收集、分析各种层次的环境因子以及疟疾流行的资料 ,如发病率和死亡率 ,评估危险因素 ,分析与疟疾传播潜势有关的相关资料如气... 详细信息

对疟疾流行情况进行常年监测是疟疾流行病学研究的基本要求。在此基础上发展的疟疾早期预警系统 (MEWS)通过收集、分析各种层次的环境因子以及疟疾流行的资料 ,如发病率和死亡率 ,评估危险因素 ,分析与疟疾传播潜势有关的相关资料如气候和降雨量预报等相互关系。

关键词：疟疾监测早期预警系统流行病学蚊虫密度

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转基因伯氏疟原虫的建立及报告基因表达的初步研究

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 25-28页

作者：曹毅张冬梅李树玲潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的:通过转染含有绿色荧光蛋白(GFP)和PbfMSP1片段的重组质粒,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫MSP-1 19 000片段(PfMSP1-19)的转基因伯氏疟原虫.方法:构建重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.伯氏疟原虫ANKA株经培养和分离后用电转化... 详细信息

目的:通过转染含有绿色荧光蛋白(GFP)和PbfMSP1片段的重组质粒,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫MSP-1 19 000片段(PfMSP1-19)的转基因伯氏疟原虫.方法:构建重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.伯氏疟原虫ANKA株经培养和分离后用电转化方法转入重组转染质粒,药物筛选转化原虫后进行PCR检测,并于荧光显微镜下检测报告基因GFP的表达.结果:构建了重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的伯氏疟原虫.PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在GFP和PbfMSP1基因.结论:重组质粒已成功转染伯氏疟原虫并表达了GFP报告基因,建立了伯氏疟原虫转染技术.

关键词：伯氏疟原虫转基因绿色荧光蛋白

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