检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2004年第4期25卷 444-446页

作者：朱克军汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和... 详细信息

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体 DNA用 PCR进行长片段扩增 ,比较扩增效果。结果 :用改进的方法制备的线粒体 DNA中没有检测到核 DNA,并能有效扩增 8kb长的目的片段。结论 :改进后的方法简便、快捷 ,制备的线粒体 DNA纯度高 ,也有利于长片段

关键词：外周血线粒体DNA 聚合酶链反应骨骼肌

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层粘连蛋白总糖肽增强巨噬细胞肿瘤杀伤功能的机制探讨

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 222-224页

作者：刘艺萍周柔丽张莎第二军医大学基础医学部生物学教研室北京医科大学细胞生物学教研室

目的：探讨层粘连蛋白总糖肽（ＬＮ－Ｇｐｓ）增强巨噬细胞（Ｍφ）杀伤黑色素瘤Ｂ１６－ＭＢＫ细胞作用的机制。方法：将细菌脂多糖（ＬＰＳ，５ＥＵ／ｍｌ），甘露聚糖（Ｍａｎｎａｎ，１０ｍｇ／ｍｌ），ＬＮ－Ｇｐｓ（２００μｇ／... 详细信息

目的：探讨层粘连蛋白总糖肽（ＬＮ－Ｇｐｓ）增强巨噬细胞（Ｍφ）杀伤黑色素瘤Ｂ１６－ＭＢＫ细胞作用的机制。方法：将细菌脂多糖（ＬＰＳ，５ＥＵ／ｍｌ），甘露聚糖（Ｍａｎｎａｎ，１０ｍｇ／ｍｌ），ＬＮ－Ｇｐｓ（２００μｇ／ｍｌ）及ＰＢＳ（对照），１００μｌ／孔，分别刺激小鼠腹腔Ｍφ，并于持续刺激６，８，１６，２４，３２，４０ｈ后观察Ｍφ对Ｂ１６细胞的直接杀伤作用及其条件培养基对Ｂ１６细胞的杀伤作用。结果：Ｍφ经各种刺激作用１６ｈ后，对Ｂ１６细胞总的杀伤率各组无显著差异；各组在刺激后各时间里Ｍφ对Ｂ１６细胞的直接杀伤率的动态变化相似。但各种刺激时间后收集的条件培养基对Ｂ１６细胞的杀伤率动态曲线明显不同，ＬＰＳ及Ｍａｎｎａｎ刺激后，以６ｈ的条件培养基杀伤作用最强（Ｐ＜０．０５），８ｈ后回到对照水平，而ＬＮ－Ｇｐｓ组则在刺激１６ｈ后逐渐增强，４０ｈ达到高峰。结论：ＬＮ－Ｇｐｓ可刺激Ｍφ分泌一些可溶性物质杀伤Ｂ１６细胞，此作用机制与其所含高甘露糖型糖链结构无关，与ＬＰＳ的作用也明显不同。

关键词：层粘连蛋白糖肽巨噬细胞肿瘤细胞杀伤

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原发性肝癌78例血清HCV　RNA和抗HCV的观察

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 130-131页

作者：崔晓红宋艳斌潘卫印慨陈汉钱光相戚中田吴孟超第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院肝胆外科

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测了７８例原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ、抗ＨＣＶ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫学标志物。结果，ＨＣＶＲＮＡ、抗ＨＣＶ和... 详细信息

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测了７８例原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ、抗ＨＣＶ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫学标志物。结果，ＨＣＶＲＮＡ、抗ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ的检出率分别为２，６％（２／７８）、１１．５％（９／７８）和７４．４％（５８／７８）；抗ＨＣＶ在ＨＢｓＡｇ阳性组和ＨＢｓＡｇ阴性组中的检出率分别为３．５％（２／５８）和３５％（７／２０）。提示，在江浙地区，ＨＢＶ感染仍是ＰＬＣ发生的主要危险因素。

关键词：肝肿瘤丙型肝炎病毒血清聚合酶链反应 ELISA

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皮质激素受体在抑郁大鼠海马GIRK_(1-4) mRNA调控中的作用

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1058-1061页

作者：刘世建马国昭王雪琦高霄飞徐荷何成路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 卫生勤务学系流行病学教研室上海200433

目的 :侧脑室给予螺内酯和 (或 )米非司酮 ,观察大鼠海马 G蛋白偶联内向整流钾通道 1- 4 (GIRK1 - 4) m RNA的表达 ,初步探讨皮质激素受体在调控 GIRK m RNA中的作用。方法 :雄性 SD大鼠 ,随机分为 9组 (每组 5只 ) :对照组 (CON) ,生... 详细信息

目的 :侧脑室给予螺内酯和 (或 )米非司酮 ,观察大鼠海马 G蛋白偶联内向整流钾通道 1- 4 (GIRK1 - 4) m RNA的表达 ,初步探讨皮质激素受体在调控 GIRK m RNA中的作用。方法 :雄性 SD大鼠 ,随机分为 9组 (每组 5只 ) :对照组 (CON) ,生理盐水组 (NS) ,螺内酯组 (SPI) ,米非司酮组 (MIF) ,SPI+MIF组 ,抑郁 (DEP) +NS组 ,DEP+SPI组 ,DEP+MIF组 ,DEP+SPI+MIF组。用地高辛 (DIG)标记的 GIRK1 - 4c RNA探针进行原位杂交 ;切片贴于涂有铬矾明胶的载玻片上 ,37℃烘箱中过夜。常规脱水 ,透明 ,中性树胶封片。利用 L eica图像分析系统测定海马各区 GIRK1 - 4m RNA杂交阳性信号的平均灰度。使用SPSS进行统计学分析。结果 :与 CON组相比 ,DEP+NS组海马 CA1- 3区和齿状回 GIRK1 - 4m RNA表达均明显下降 ;与DEP+NS组相比 ,DEP+SPI组和 DEP+SPI+MIF组海马各区 GIRK1 - 4m RNA表达均明显升高 ,DEP+MIF组变化不显著 ,SPI组、MIF组和 SPI+MIF组与 NS组相比 ,GIRK1 - 4m RNA表达无明显差异 ,表明 SPI和 MIF本身对正常大鼠 GIRK表达的影响不明显。结论 :糖皮质激素受体通过与 GIRK1 中的糖皮质激素受体反应元件结合 ,使 GIRKs m RNA在海马的表达增加 ,皮质酮通过海马的 5 - HT1 A受体增加 GIRKs通道的通透性。

关键词：糖皮质激素受体 G蛋白偶联内向整流型钾通道海马应激型抑郁症

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庚型肝炎病毒E2蛋白在转基因小鼠细胞内的定位及致病性研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 842-845页

作者：胡卫江陈景山戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 美国耶鲁大学

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆... 详细信息

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆抗体对 HGV包膜蛋白 E2的表达进行分析和定位。通过血清 AL T检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。结果 :免疫组织化学结果表明 ,HGV E2主要表达于转基因小鼠肝细胞膜 ,少量表达于胞质内 ;肾脏、心脏、肺及脾脏均未呈现 E2蛋白的阳性反应。组织病理学检查显示转基因小鼠的肝细胞出现水样变性、脂肪变性及淋巴细胞浸润等轻度炎性反应 ,这些变化不随年龄增长而加重 ;其他组织的病理学检查无异常。转基因小鼠血清转氨酶 AL T与对照小鼠无明显差异。结论 :HGV包膜蛋白 E2的表达具有相对的嗜肝性 ,主要分布在转基因小鼠的肝细胞膜 ,并可引起轻度肝细胞损伤。

关键词：转基因 E2蛋白致病性庚型肝炎 HGV

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胞嘧啶脱氨酶基因的体外前药转换胃癌细胞的杀伤作用研究

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中华消化杂志 1998年第2期18卷 72-75页

作者：程慧玉张忠兵李石张兴荣朱玉平第二军医大学长征医院消化内科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的建立胃癌组织细胞自杀基因体外前药转换基因治疗方法。方法和结果首先将含ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体ｐＣＤ２在ＰＡ３１７细胞中包装、筛选、收获病毒上清及进行病毒滴度测定后，体外转导Ｍ８５胃癌细胞，以ＰＣＲ方法证明ＣＤ... 详细信息

目的建立胃癌组织细胞自杀基因体外前药转换基因治疗方法。方法和结果首先将含ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体ｐＣＤ２在ＰＡ３１７细胞中包装、筛选、收获病毒上清及进行病毒滴度测定后，体外转导Ｍ８５胃癌细胞，以ＰＣＲ方法证明ＣＤ基因稳定整合到宿主细胞基因组中，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析了ＣＤ基因的表达；转基因胃癌细胞在前药５－ＦＣ作用下呈现明显的选择性生长抑制效应。且观察到强效的“旁观者效应”。结论为胃癌组织基因治疗提供了极有意义的资料。

关键词：胃肿瘤基因疗法胞嘧啶脱氨酶

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人肾细胞癌细胞的原代培养及癌基因表达初步分析

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 280-282页

作者：张晓琴曹广文侯建国戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院泌尿外科

目的：研究人肾细胞癌（ＲＣＣ）原代细胞生物学特性及其癌基因的表达情况。方法：应用改良的原代肿瘤细胞分离法分离培养７例人ＲＣＣ原代细胞。应用染色体核型分析和免疫组化方法，分析原代细胞核型以及癌基因与抑癌基因的表达。结果... 详细信息

目的：研究人肾细胞癌（ＲＣＣ）原代细胞生物学特性及其癌基因的表达情况。方法：应用改良的原代肿瘤细胞分离法分离培养７例人ＲＣＣ原代细胞。应用染色体核型分析和免疫组化方法，分析原代细胞核型以及癌基因与抑癌基因的表达。结果：用本法培养的原代细胞比其他常规方法所得细胞既多且纯。所培养的人ＲＣＣ原代细胞的癌基因表达分析发现ｂｃｌ－２，ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｃ－ｍｅｔ，表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）有轻度至中度表达，而ｐ５３没有表达。结论：人ＲＣＣ原代培养及其癌基因表达检测，为应用原代ＲＣＣ所开展ｅｘｖｉｖｏ的ＲＣＣ基因治疗打下了初步的基础。

关键词：肾肿瘤原代培养癌基因肾细胞癌

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TGFβ_1基因对肝癌细胞癌基因表达的体外观察

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 292-294,F003页

作者：封岩曹广文张晓琴高峰孔宪涛第二军医大学长征医院临床免疫中心第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）转入对人肝癌细胞系癌基因表达的影响。方法：ｐＬ（ＴＧＦβ１）ＳＮ和相应重组病毒上清用脂质体转染包装细胞及肝癌细胞，经Ｇ４１８筛选后，进行免疫组化染色，观察癌基因蛋白表达的改变。... 详细信息

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）转入对人肝癌细胞系癌基因表达的影响。方法：ｐＬ（ＴＧＦβ１）ＳＮ和相应重组病毒上清用脂质体转染包装细胞及肝癌细胞，经Ｇ４１８筛选后，进行免疫组化染色，观察癌基因蛋白表达的改变。结果：提取的ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ连接物经酶切鉴定，证明有正向插入及反向插入两类。病毒上清ＴＧＦβ１含量在１６～４１ｎｇ／ｍｌ，套式ＰＣＲ后均出现２９０ｂｐ条带。转基因后肝癌细胞癌基因蛋白免疫组化染色结果：ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｍｅｔ及ｒａｓ癌基因表达，反向ＴＧＦβ１转入者为（＋）～（），而正向转入均为（－）。免疫组化检测其ＴＧＦβ１表达蛋白，空白对照染色（±），正向则为（）。结论：正向插入的ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ可使癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｍｅｔ及ｒａｓ表达减少，提示它在体外对肝癌细胞具有负调控作用。

关键词：肝肿瘤癌基因转化生长因子 TGFβ1

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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 857-860页

作者：潘卫戚中田贺祥陈秋莉潘欣第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学科研部

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 详细信息

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。

关键词：噬菌体随机展示肽库核心蛋白丙型肝炎 HCV

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中国姥鲨软骨源新生血管抑制因子(Sp8)的分离纯化及生物学活性

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 107-110页

作者：陈建鹤焦炳华缪为民王路王梁华缪辉南解放军第422医院内二科广东湛江524005 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细... 详细信息

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细胞增殖、体内抑制新生血管生长和抑制小鼠移植 S180肉瘤生长作为筛选指标。结果 :Sp8可在体外抑制血管内皮细胞增殖 ,40μg/ml浓度时抑制率为 2 0 % ;在体内具有抑制新生血管生长的作用 ,兔角膜模型抑制率为 72 .7% ,鸡胚模型 (CAM)抑制率为 79% ;并能明显抑制小鼠体内移植 S180肉瘤的生长 (P<0 .0 0 1)。结论 :Sp8介导了鲨鱼软骨中的抗肿瘤活性 ,其作用可能是通过抑制肿瘤诱生新生血管形成这一途径来实现的。

关键词：鲨鱼软骨抑制因子新生血管抗肿瘤活性

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