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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 765-768页

作者：张昕泂胡惠民董良陆长德第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海200031

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印... 详细信息

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印迹分析鉴定表达产物 ;将全长基因序列、缺失第 1内含子基因序列和 c DNA序列的表达载体 ,分别转染细胞后检测各片段表达产物之间的差异。结果 :测序结果表明人生长激素基因组 DNA在细胞内正确转录、剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌蛋白质。 EL ISA检测发现 3种基因片段中 ,全长的基因序列在表达效果上要高于后两者 (P<0 .0 5 ) ,其中缺失第 1内含子的序列表达效率较 c DNA序列明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :在家蚕细胞中能够正确表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因 ;

关键词：人生长激素基因组 DNA 家蚕 BmN细胞瞬时表达基因表达

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用细胞化学显示神经运动终板的电镜标本制备

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 4-4页

作者：颜永碧陆月良王英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

显示和制作神经的方法有很多，大部分是光镜资料，而最镜制作方法很少~[1，2]。本文介绍用同一束有神经运动终板的肌肉标本，即做光镜水平的乙酰胆碱脂检测，又能做最镜细胞化学和超微结构观察的方法

关键词：电镜标本制备神经运动终板肌纤维细胞化学电子显微镜

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YFP-CD18融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

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生物技术 2003年第4期13卷 4-6页

作者：严鸣毛积芳钟纪根何健朱秋峰徐仁宝基础医学部病理生理学教研室基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院急救科长征医院麻醉科第二军医大学上海200433

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载... 详细信息

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载体 ,并将其转染至U937细胞株中进行表达。通过荧光显微镜观察转染成功后的U937细胞黄色荧光是否存在 ,以及流式细胞术检测确定PMA刺激后YFP -CD18活化后可否由胞浆内转位至膜上和测定PMA活化前后转染的U937细胞与其配基ICAM - 1粘附活性的变化等方面来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,pYFP -CD18构建正确 ,转染U937细胞株后 ,可见YFP -CD18融合蛋白发出的黄色荧光。结论 :构建完成YFP -CD18融合基因并可以在U937细胞株中进行表达。

关键词： YFP CD18 融合蛋白 U937细胞株表达黄色荧光蛋白

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脊髓火器伤后GDNFmRNA表达的实验研究

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实用医药杂志 2003年第11期20卷 838-840页

作者：宋海涛贾连顺陈哲宇陈坚刘传云何成 107医院济南军区创伤骨科中心山东烟台264002 第二军医大学长征医院骨科第二军医大学基础医学部神经生物学教研室第二军医大学海医系军队卫生教研室上海200003

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤... 详细信息

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤后表达逐渐减少,伤后1、4、7、10d分别减少25%、71%、82%、86%。结论脊髓GDNFmRNA表达减少,是由于失去靶组织转运GDNFmRNA所造成,这为外源性GDNF治疗脊髓火器伤提供了理论依据。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子射钉枪脊髓火器伤基因表达

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Envision法免疫组织化学染色研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

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中华临床医药杂志（北京） 2003年第9期4卷 6-8页

作者：肖扬焦炳华朱玉平彭艳王梁华娄永华解放军第118医院肝病科325000 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室200433

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)的抗肿瘤活性及其机制。方法：用重组人可溶性VEGI治疗荷S180肉瘤小鼠；第VIII因子相关抗原(FVIII RAg)标记肿瘤血管内皮细胞，用免疫组... 详细信息

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)的抗肿瘤活性及其机制。方法：用重组人可溶性VEGI治疗荷S180肉瘤小鼠；第VIII因子相关抗原(FVIII RAg)标记肿瘤血管内皮细胞，用免疫组化Envision法检测瘤内微血管密度。结果：重组人可溶性VEGI显著抑制S180肉瘤生长，肿瘤微血管密度大大减低。结论：VEGI具有较强的抗肿瘤活性，其机制可能是通过抗新生血管形成介导的。

关键词： Envision法免疫组织化学染色研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子抗肿瘤活性

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N-硝基-L-精氨酸抑制大鼠吗啡身体依赖的强啡肽机制

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解放军药学学报 2003年第5期19卷 327-330页

作者：黄矛万兴旺何雅琴李万亥由振东路长林中国人民解放军第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院国际合作生物信号转导研究中心上海200433 中国人民解放军第二军医大学药学院药理教研室上海200433 中国人民解放军第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在抑制吗啡身体依赖形成中的作用及探讨强啡肽在该过程中的可能作用。方法　采用剂量递增皮下注射吗啡法建立大鼠吗啡身体依赖模型 ;身体依赖程度采用皮下注射 5mg·kg-1 纳洛酮激发戒断症状... 详细信息

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在抑制吗啡身体依赖形成中的作用及探讨强啡肽在该过程中的可能作用。方法　采用剂量递增皮下注射吗啡法建立大鼠吗啡身体依赖模型 ;身体依赖程度采用皮下注射 5mg·kg-1 纳洛酮激发戒断症状并对大鼠 6 0min内可数和不可数的戒断症状评分的方法进行 ;采用放射免疫法分别测定大鼠脑各分区、垂体、脊髓和血浆内免疫活性强啡肽A(ir-Dyn)的含量。结果　NO2 Arg可剂量相关性地抑制吗啡身体依赖的形成 ,其中 5mg·kg-1 NO2 Arg可显著抑制吗啡依赖大鼠大多数戒断症状 ;NO2 Arg处理可显著升高吗啡依赖大鼠脊髓、纹状体、垂体及血浆内ir-Dyn的水平。该作用可被特异性κ -受体阻滞剂norbinaltorphimine (nor-BNI)所拮抗。结论　NO2 Arg剂量相关性地抑制吗啡身体依赖的形成。

关键词：吗啡依赖身体依赖 N-硝基-L-精氨酸强啡肽一氧化氮

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镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 811-815页

作者：任绪义周雍张建鹏冯伟华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2m... 详细信息

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2mRNA明显升高 ,但MT没有相应增加 ;肝脏镉中毒后MTmRNA与MT均明显升高 .结果提示 :镉虽然能诱导睾丸MTmRNA的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：镉中毒大鼠睾丸肝脏金属硫蛋白表达时相研究

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嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 593-597,F004页

作者：曹莉叶俊丽刘丽陈菲陈哲宇李建红路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 ... 详细信息

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况 ,并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价 OECs和 GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果 :(1) OECs和 GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用 ,可促进脊髓下行传导束再生 ,肢体运动功能恢复。 (2 ) OECs和 GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强 ,高于 GDNF或 OECs单用组。结论 :联合应用 GDNF和 OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。

关键词：嗅鞘细胞移植 GDNF 大鼠脊髓损伤治疗作用胶质细胞源性神经营养因子红核脊髓束皮质脊髓束

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用Fura-2测定单个巨噬细胞内游离钙的条件的优化

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 341-343页

作者：朱晓燕韩建中娄淑杰严进徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部基础医学部神经生物学教研室

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fur... 详细信息

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fura-2的浓度进行了调整，另外PEM作为参与炎症的非兴奋细胞，其活化对[Ca~(2+)]i有很大的影响，而细胞贴壁很可能导致活化，但测定方法又要求只能在贴壁细胞进行。因此，我们使用鼠尾胶缩短贴壁时间，并把检测用的PEM的贴壁时间控制在一定范围之内。取得了比较理想的结果。

关键词： Fura-2 巨噬细胞钙测定优化 PEM

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抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元NGF含量及其mRNA的表达

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 590-592,I006页

作者：王雪琦由振东赵小林王勇姿路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :观察实验性抑郁症大鼠脑内神经生长因子含量及其 m RNA表达的变化。方法 :采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁症模型。运用 openfield法观察大鼠行为学变化 ,运用免疫组化和原位杂交法观察神经元 NGF含量及其m RNA表达... 详细信息

目的 :观察实验性抑郁症大鼠脑内神经生长因子含量及其 m RNA表达的变化。方法 :采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁症模型。运用 openfield法观察大鼠行为学变化 ,运用免疫组化和原位杂交法观察神经元 NGF含量及其m RNA表达的变化。结果 :与对照组相比 ,抑郁组大鼠海马和顶叶皮质神经元 NGF免疫阳性颗粒数目减少 ,着色浅淡 ;NGFm RNA杂交阳性信号减少。结论 :实验性抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元 NGF含量下降 ,NGF m RNA表达水平降低。

关键词：抑郁症大鼠海马顶叶皮质神经元 NGF 含量 mRNA 神经生长因子

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