检索结果-内蒙古大学图书馆

中华显微外科杂志 2005年第2期28卷 156-158页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金上海市第二军医大学附属长征医院整形外科 200003 上海市第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧... 详细信息

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧光定量RT-PCR的方法分别检测肌肉移植术后不同时间肌肉样本内ε和γ亚单位mRNA的表达。结果肌肉移植后ε和γ亚单位mRNA表达的拷贝数均是先增高后减少。ε亚单位mRNA表达的拷贝数存术后第3周降到最低后又逐渐增高,但到术后晚期仍低于对照组的水平,差异有统计学意义(P<0.05),而γ亚单位mRNA的拷贝数自术后第2周后开始减少,到术后30周时未完全消失,仍保持低水平的表达。结论终板区亚单位基因的表达变化可能与肌肉游离移植后nAChR的数量减少及功能降低有关系。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体移植后亚单位表达游离 Wistar大鼠 mRNA表达 nAChR 神经肌肉接头亚单位基因拷贝数变化情况基因表达基因水平基因变化功能减退不同时间移植术后荧光定量完全消失表达变化股薄肌 PCR 对照组

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HBV preS2-S DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 286-289页

作者：巴月訾晓渊张南熊俊张树忠李文林李建秀吴逸明胡以平郑州大学公共卫生学院环境卫生学教研室郑州450052 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:构建HBV表面抗原preS2 S 基因表达质粒,并探讨其在小鼠体内的表达及诱导体液免疫应答的能力。方法:采用PCR方法,以PBR322 HBV2.0(adr亚型)质粒DNA为模板获得HBV preS2 S 基因,并将其重组进入pcDNA3.0表达载体中,转染7721细胞系进... 详细信息

目的:构建HBV表面抗原preS2 S 基因表达质粒,并探讨其在小鼠体内的表达及诱导体液免疫应答的能力。方法:采用PCR方法,以PBR322 HBV2.0(adr亚型)质粒DNA为模板获得HBV preS2 S 基因,并将其重组进入pcDNA3.0表达载体中,转染7721细胞系进行稳定表达;以此重组质粒免疫小鼠,ELISA方法检测免疫小鼠抗HBs抗体浓度。结果:构建了HBV preS2 S 基因的表达质粒pcDNAS2 S,该表达质粒可在7721 细胞中稳定高效表达;免疫接种小鼠2 周后抗HBs抗体浓度明显升高,接种后第4周布比卡因处理组小鼠抗HBs抗体的浓度达到峰值161.4 mIU/ml,布比卡因非处理组第5周抗HBs抗体的浓度可达133.7 mIU/ml。结论:所构建的pcDNAS2 S表达质粒能有效表达并诱导小鼠体液免疫应答。

关键词：肝炎病毒乙型抗原,表面免疫抗体生成

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C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达模式分析

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 279-282页

作者：訾晓渊熊俊张南张树忠巴月姚玉成李建秀王新民马凤云胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 郑州大学公共卫生学院环境卫生学教研室郑州450052

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠的月龄、性别和遗传背景与其血清和肝组织中HBsAg表达模式的关系.方法:采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法检测转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达,统计学方法分析转... 详细信息

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠的月龄、性别和遗传背景与其血清和肝组织中HBsAg表达模式的关系.方法:采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法检测转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达,统计学方法分析转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达与小鼠的月龄、性别、遗传背景的相关性.结果:转基因小鼠在出生后1～3个月时,血清中HBsAg的表达较低或甚至不表达,8个月龄左右时最高,此后逐渐降低,但肝组织中HBsAg的表达相对稳定在较高水平,能真实反映转基因小鼠中HBsAg的表达.雄性小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达量高于雌性小鼠(P＜0.05).转基因小鼠与C57BL/6品系、DAB品系和129s品系正常小鼠交配后的子代,其血清和肝组织中HBsAg表达量均未发生变化.血清阳性的小鼠中肝组织HBsAg阳性率为94.05%,两者呈正相关关系(r=0.257,P＜0.01).结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达具有发育调节和性别差异.

关键词：病毒乙型肝炎小鼠转基因 HBsAg 血清肝

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红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1116-1119页

作者：郭美丽姜伟张志珍张戈毛积芳殷明苏中武第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学药学院药理学教研室

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西... 详细信息

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析。结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型。RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大。结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据。

关键词：红花种质随机扩增多态性 DNA 分子鉴定

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HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 159-163页

作者：刘红姚玉成葛军辉李建秀苏娟张钦宪胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院病理科郑州大学医学院组织胚胎学教研室郑州450025

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小... 详细信息

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)体内 ,不同时间点静脉采血检测小鼠血清 HBs Ag、抗 HBs抗体、前 S2抗原、前 S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化 ,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。结果 :DNA免疫正常小鼠后 8～14周 ,抗 HBs抗体的浓度维持在 130～ 14 0 m IU/ ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)后 2、4、7和 14 d,小鼠血清中未检测到 HBs Ag和前 S2抗原 ,抗 HBs抗体持续阳性 ,前 S2抗体 14 d时转阴 ;AL T2、4 d升高 ,7d恢复到正常 ;AST14 d内始终高于正常值 ,4 d时达高峰 ;尿素氮异常 ,γ- GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变 ,初期 (2 d、4 d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润 ,4 d肝细胞开始肿胀 ;中期 (7d)全小叶出现肝细胞气球样变 ,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润 ,汇管区轻度单个核细胞的浸润 ;后期 (14 d)时肝细胞肿胀明显减轻。

关键词：乙型肝炎病毒 preS2-S基因体液免疫转基因小鼠乙型肝炎

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乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠的建立

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 172-174页

作者：刘红姚玉成何金李文林李建秀苏小平张钦宪胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院病理科郑州大学医学院组织胚胎学教研室郑州450025

目的 :建立乙型肝炎病毒核心抗原 (ayw亚型 )转基因小鼠模型。方法 :采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠 ,以 PCR、免疫组化和 H- E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合、肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果 :得到 6只基... 详细信息

目的 :建立乙型肝炎病毒核心抗原 (ayw亚型 )转基因小鼠模型。方法 :采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠 ,以 PCR、免疫组化和 H- E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合、肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果 :得到 6只基因组中整合了核心抗原基因的首建者 (founder)小鼠 ,其中 1只在肝细胞核和胞浆均有 HBc Ag的表达。将肝脏中表达的小鼠继续传代 ,F1 代 10只小鼠中的 4只小鼠肝细胞有 HBc Ag的表达。结论 :建立了乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠 ,核心抗原基因能够在小鼠肝脏中表达。

关键词：乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠动物模型

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成年大鼠局灶性脑梗死后神经元前体细胞的迁移研究

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2242-2244页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的... 详细信息

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的梗死灶周均可见神经元前体细胞;在缺血再灌注后第7天阳性细胞的数量达到高峰,随后逐渐下降;但在梗死区域的镜像区域未见到阳性细胞的表达。结论成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注可激活神经元前体细胞的发生,并诱导神经元前体细胞朝着梗死区域迁移。

关键词：神经元前体细胞大脑中动脉栓塞缺血再灌注迁移

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周围神经损伤再生后肌肉nAChRε亚单位基因表达的变化

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 13-16页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学长征医院整形外科上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法... 详细信息

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性。同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。结果:用该方法检测nAChRε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6 个数量级,最低检测下限为1×102 拷贝,最高检测上限为1×107 拷贝。大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3 周降到最低后又逐渐增高,但到术后30 周仍处于低水平(P<0.01)。结论:采用Taq Man实时荧光定量RT PCR检测nAChRε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点。神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体ε亚单位荧光定量逆转录聚合酶链反应周围神经损伤基因表达和调控

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hVEGF_(165)和嵌合水蛭肽融合基因的真核表达载体的构建及其表达

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 983-987页

作者：陈少萍沈雳秦永文蔡在龙第二军医大学长海医院心内科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVE... 详细信息

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0。对重组质粒进行酶切鉴定和测序分析,将正确克隆的质粒分别作体外快速转录翻译鉴定,以及经脂质体介导转染人内皮细胞株,并对表达产物进行鉴定。结果:hVEGF165和FH成功融合,形成711 bp的目的片段,并成功构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0,重组质粒转染人内皮细胞株有hVEGF165-FH表达。结论:重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0在人内皮细胞株中得到表达,为其融合蛋白活性研究及基因治疗打下良好基础。

关键词： hVEGF165 水蛭肽基因融合基因表达载体

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鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2005年第5期31卷 598-601,634页

作者：范秋领黄才国金艳缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

以400 m g/kg 2次腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1 h以80 m g/kg 2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸(A... 详细信息

以400 m g/kg 2次腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1 h以80 m g/kg 2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸(ADP)诱导的氧消耗、呼吸控制率(RCR)、磷/氧比(P/O)、氧化磷酸化率均低于对照组,而预防组线粒体ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率、P/O和氧化磷酸化效率均高于模型组;TAA降低了线粒体中谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶的水平,而鲨鱼肝蛋白粗提物则使线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的水平明显升高,说明鲨鱼肝蛋白粗提物能部分修复线粒体受损的呼吸功能,增强线粒体抗氧化能力。

关键词：鲨鱼肝蛋白粗提物硫代乙酰胺急性肝损伤线粒体呼吸功能抗氧化

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