检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2007年第4期28卷 385-388页

作者：宋赠宋娟欧阳新平高军付爱文田绍文南华大学医学院生理学教研室衡阳421001 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 山东省阳信县计划生育服务站阳信251800

目的:研究不同戒断期对吗啡依赖小鼠自发活动及场景性恐惧条件化表达的影响。方法:以剂量递增法连续皮下注射(sc)盐酸吗啡7 d建立吗啡依赖小鼠模型,随机分成吗啡戒断1 d、吗啡戒断7 d、吗啡戒断21 d组,并设立生理盐水戒断1、7、21 d组... 详细信息

目的:研究不同戒断期对吗啡依赖小鼠自发活动及场景性恐惧条件化表达的影响。方法:以剂量递增法连续皮下注射(sc)盐酸吗啡7 d建立吗啡依赖小鼠模型,随机分成吗啡戒断1 d、吗啡戒断7 d、吗啡戒断21 d组,并设立生理盐水戒断1、7、21 d组作为对照,每组12～13只。戒断后采用旷场实验观察小鼠自发活动(检测穿梭格数、直立次数、理毛时间、中央区活动时间、进入中央次数及外周时间等指标);随后对小鼠进行场景性恐惧条件化,并于24 h后进行恐惧反应(僵直)的检测。结果:与生理盐水对照组相比,吗啡戒断1 d、7 d组小鼠的水平活动度(P<0．001,P<0．001)和进入中央区次数(P<0．001, P<0．05)明显降低;戒断1 d组小鼠垂直运动也显著下降(P<0．001);吗啡戒断1 d组的理毛行为增加(P<0．05);但各吗啡戒断组的中央区、外周活动时间无显著差异。吗啡处理还选择性损害了戒断1 d组小鼠的场景性恐惧条件化表达(P<0．05)。结论:戒断早期降低了吗啡依赖小鼠部分自发活动,同时损害了场景性恐惧条件化表达。

关键词：吗啡依赖物质戒断综合征自发活动恐惧

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人肝癌细胞系P2-HCC的建立及体外诱导分化特性的初步研究

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 247-250页

作者：朱海英张朵谢东甫王新民周旭宇 Joseph T Lau 胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科 The Department of Molecular and Cellular Biology Roswell Park Cancer InstituteElm and Carlton StreetsBuffaloNY 14263USA

目的:从人肝细胞癌中分离肝癌细胞并对其体外诱导分化特性进行分析,试图得到有关导致肝癌发生的“癌干细胞”的相关资料。方法:首先将人原发性肝癌组织小块在裸鼠皮下过继接种,然后将生成的肿瘤进行原代培养并得到单层生长的肿瘤细胞系... 详细信息

目的:从人肝细胞癌中分离肝癌细胞并对其体外诱导分化特性进行分析,试图得到有关导致肝癌发生的“癌干细胞”的相关资料。方法:首先将人原发性肝癌组织小块在裸鼠皮下过继接种,然后将生成的肿瘤进行原代培养并得到单层生长的肿瘤细胞系,利用体外诱导实验对其形态及分子表型的变化情况进行观察和分析。结果:所分离获得的细胞系具有肝肿瘤细胞的特征,但也表达某些干细胞的分子标志如c met。体外诱导分化实验提示胰岛素/氢化可的松、二甲亚砜可能具有诱导该细胞向成熟肝细胞方向分化的作用,诱导后的细胞又重新表达葡萄糖6 磷酸酶,白蛋白表达明显升高。结论:人P2 HCC细胞具有强大的增殖能力,体外实验提示其具有一定的向成熟肝细胞分化的潜能。这些细胞的发生与肝癌干细胞及肝细胞的关系尚待进一步研究。

关键词：癌肝细胞肿瘤细胞,培养的细胞分化

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克隆化的人骨髓间充质干细胞在SCID小鼠肝脏中的植入、增殖和分化

克隆化的人骨髓间充质干细胞在SCID小鼠肝脏中的植入、增殖和分化

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中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

作者：陶欣荣李文林苏娟王新民李建秀胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的:研究体外长期培养的克隆化的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在SCID小鼠肝中的植入、增殖和分化。方法:将标记上绿色荧光蛋白的克隆化的人骨髓间充质干细胞经脾脏注射到CCl4损伤的SCID小鼠肝脏中,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察植... 详细信息

目的:研究体外长期培养的克隆化的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在SCID小鼠肝中的植入、增殖和分化。方法:将标记上绿色荧光蛋白的克隆化的人骨髓间充质干细胞经脾脏注射到CCl4损伤的SCID小鼠肝脏中,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察植入细胞后2周、5周、8周的小鼠肝脏冰冻切片,按观察到的每个绿色细胞簇含有的细胞个数,来显示增殖细胞所占有的比例。利用绿色荧光蛋白与间接免疫荧光双重标记的方法来追踪肝脏组织中植入的hMSCs分化命运,激光共聚焦显微镜下共定位双重标记的植入细胞。结果:植入的人骨髓间充质干细胞在SCID小鼠脑中可以长期存活达8周(冰冻切片检测到8周),形态上有明显的改变,为肝细胞样的细胞。在中央静脉四周和门管区都发现有绿色荧光标记的细胞簇,统计结果表明,植入2w时大部分存活的植入细胞在SCID小鼠肝脏中已经增殖。间接免疫荧光组织化学检测结果显示外源移植的hMSCs细胞,在 CCl4损伤SCID小鼠肝内,还表达自蛋白和α1-抗胰蛋白酶。结论:hMSCs在损伤的肝脏中不仅可以长期存活、增殖,而且能分化为成熟的肝细胞。由于hMSCs在体外长期培养、扩增后仍具有多向分化的潜能,因此显示了hMSCs成为肝功能衰竭、肝脏代谢性疾病细胞治疗的种子细胞的可能性。本研究结果还为hMSCs参与损伤肝重建与修复治疗的研究奠定了基础。

关键词：人骨髓间充质干细胞小鼠肝脏克隆化增殖和分化

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人胎肝干细胞在重症联合免疫缺陷小鼠损伤肝脏中的植入

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 243-246页

作者：苏娟李文林陶欣荣朱海英王新民李建秀田棣余宏宇 Joseph T Lau 胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学长征医院病理科 The Department of Molecular and Cellular Biology Roswell Park Cancer InstituteElm and Carlton StreetsBuffaloNY 14263USA

目的:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离培养肝干细胞,并观察其在重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠损伤肝脏中的植入.方法:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离干细胞并进行体外长期培养,用RT PCR方法检测肝干细胞相关分子标志以及八聚物结合蛋白4(... 详细信息

目的:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离培养肝干细胞,并观察其在重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠损伤肝脏中的植入.方法:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离干细胞并进行体外长期培养,用RT PCR方法检测肝干细胞相关分子标志以及八聚物结合蛋白4(Oct-4)的表达,然后植入经四氯化碳(CCl4)造成急性肝损伤的SCID小鼠体内,在移植后2、l0、17d分别对受体鼠肝脏冰冻切片进行荧光观察和H-E染色.结果:所建立的胎肝细胞系不仅表达二肽水解酶Ⅳ(DPPⅣ)、白蛋白(Alb)、细胞角蛋白(CK)19、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、CK18、肝细胞生长因子受体(c-met)、干细胞因子受体(c-kit)等肝干细胞相关标志,还表达干细胞转录因子Oct-4.在细胞移植后2 d,肝脏冰冻切片未见绿色荧光;移植后10 d和17d肝脏冰冻切片见散在的绿色荧光.对同一切片做H-E染色,发现绿色荧光部位为肝板内的多个成熟肝细胞.结论:从人胚胎肝脏中分离的干细胞能够植入SCID小鼠的损伤肝脏.

关键词：肝干细胞胚胎重症联合免疫缺陷细胞移植

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克隆化的人骨髓间充质干细胞在新生小鼠脑中的植入、迁移和分化

克隆化的人骨髓间充质干细胞在新生小鼠脑中的植入、迁移和分化

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中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

目的:研究体外长期培养的克隆化的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在新生小鼠脑中的植入、迁移和分化。方法:将标记上绿色荧光蛋白的克隆化的人骨髓间充质干细胞直接注射到新生3天小鼠的单侧脑室中,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察植入... 详细信息

目的:研究体外长期培养的克隆化的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在新生小鼠脑中的植入、迁移和分化。方法:将标记上绿色荧光蛋白的克隆化的人骨髓间充质干细胞直接注射到新生3天小鼠的单侧脑室中,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察植入细胞后0天、9天、14天的小鼠脑冠状切片,利用绿色荧光蛋白与间接免疫荧光双重标记的方法来追踪脑组织中植入的hMSCs分化命运, 激光共聚焦显微镜下共定位双重标记的植入细胞。结果:植入的人骨髓间充质干细胞在新生小鼠的脑中可以存活,形态上有明显的改变,为神经元样的细胞。有些植入的细胞从注射部位还向脑组织的其它部位(纹状体、海马、皮层,甚至注射部位的对侧)发生了迁移。间接免疫荧光组织化学检测结果显示,植入的细胞大部分表达神经元特异性的β-TublinⅢ、MAP2、Tau标记蛋白,少部分细胞表达神经胶质细胞特异的GFAP。结论:hMSCs植入后受到脑组织特定的微环境影响,在体内可以分化为神经元细胞和神经胶质细胞。以上结果还提示骨髓间充质干细胞有可能成为中枢神经系统疾病治疗的种子细胞。

关键词：人骨髓间充质干细胞新生小鼠克隆化

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SMO保存液对犬肾低温保存期间皮质细胞凋亡的影响

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1059-1062页

作者：牛强朱有华于常虎罗明缪明永第二军医大学长征医院全军器官移植研究所上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的：探讨自制上海多器官保存液（Shanghai multi-organ preservation solution,SMO液）对低温保存期间犬肾皮质细胞凋亡的影响,以探讨SMO液的作用机制.方法：犬肾分别以0～4℃的SMO液、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液（HC-A）或UW液（Universit... 详细信息

目的：探讨自制上海多器官保存液（Shanghai multi-organ preservation solution,SMO液）对低温保存期间犬肾皮质细胞凋亡的影响,以探讨SMO液的作用机制.方法：犬肾分别以0～4℃的SMO液、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液（HC-A）或UW液（University of Wisconsin solution）灌洗保存,在低温保存各时间点取肾皮质标本作形态学观察;采用TUNEL法检测皮质细胞凋亡发生情况;以硫代巴比妥酸法测定各保存液组肾皮质丙二醛（MDA）含量的改变,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性变化.结果：低温保存第1天光镜观察细胞水肿、胞质空泡化、肾小管坏死等改变,三组相似,但保存2 d后SMO组和UW组形态学改变明显轻于HC-A组.随低温保存时间延长,各保存液组肾皮质细胞凋亡的发生增加,而SMO组凋亡指数显著低于同时点HC-A液组（P＜0.05）.随着低温保存时间延长,各保存液组肾皮质MDA含量增加,保存1～3 d SMO液组MDA含量显著低于HC-A液组（P＜0.05）;低温保存中SMO液组、HC-A液组、UW液组肾皮质SOD酶活性无明显差异.结论：SMO液可以提高肾皮质保存效果,可能与其减少低温保存期间肾皮质细胞凋亡和抑制脂质过氧化损伤有关.

关键词：器官保存反应性氧族低温细胞凋亡

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肝再生早期线粒体差异表达蛋白质组分析

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解放军医学杂志 2010年第11期35卷 1341-1344页

作者：孙青菊梁冰缪明永郭巍焦炳华山东青岛解放军401医院检验科 266071 上海第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 200433

目的探讨线粒体在肝再生早期的作用,寻找肝再生早期的标志蛋白。方法 30只SD大鼠随机均分为70%肝部分切除组(PH组)和假手术组(SH组),每组再分为3个小组,每组5只,手术24h后处死大鼠,取相同部位的肝组织进行检测。PH组和SH组配对,独立重... 详细信息

目的探讨线粒体在肝再生早期的作用,寻找肝再生早期的标志蛋白。方法 30只SD大鼠随机均分为70%肝部分切除组(PH组)和假手术组(SH组),每组再分为3个小组,每组5只,手术24h后处死大鼠,取相同部位的肝组织进行检测。PH组和SH组配对,独立重复实验3次;Nycodenz密度梯度离心分离线粒体,二维电泳(2-DE)分离线粒体蛋白质,采用PDQuest 7.4软件分析2-DE图谱;MALDI-TOF MS技术鉴定差异表达蛋白,采用Mascot方法进行数据检索,对部分差异蛋白进行Western blotting验证。结果共筛选出25个差异表达蛋白点(P<0.05);与SH组比较,PH组中有3个蛋白点上调,22个蛋白点下调。质谱技术成功鉴定出其中22个差异蛋白。生物信息学分析显示这些差异蛋白参与了多条代谢途径,如糖代谢、脂代谢、呼吸链和氧化磷酸化、生物转化以及信号转导等。结论肝再生早期,线粒体通过多条代谢途径对其进行调节;亚细胞蛋白质组学技术有利于寻找肝再生相关的标志蛋白,为肝再生的深入研究提供新的方向和思路。

关键词：蛋白质组学肝切除术肝再生线粒体肝

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不同条件下人乳白蛋白YAC的高效定点打靶修饰

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第二军医大学学报 2004年第6期25卷 633-637页

作者：张绪峰吴国祥朱克军焦炳华成国祥第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海转基因研究中心上海201203 上海转基因研究中心

目的?对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到 his3缺陷的YPH925菌株... 详细信息

目的?对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到 his3缺陷的YPH925菌株。分别以HIS3(对YPH925菌株)和G418R(对YPH925和AB1380两种菌株)为选择标记,用含 HLA-YAC的酵母基因组为模板,PCR克隆人乳白蛋白(HLA)基因的5′和3′端非翻译区各684bp和940bp为同源臂,构建打靶载体,线性化的打靶载体经电转化或醋酸锂转化转入酵母内,以菌落PCR为鉴定方法,辅以测序验证。结果:HLA-YA 在目的位置完成了定点打靶修饰,G418R的筛选效率高于HIS3,醋酸锂转化方法的打靶效率稍高于电转化。结论:对YA 的成功修饰为在动物体内的表达及调控研究打下了基础。

关键词：人乳白蛋白 YAC 高效定点打靶修饰酵母人工染色体酵母人工染色庠转移

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乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠的生物学特性

乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠的生物学特性

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中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

本研究利用我们实验室建立并优选的乙肝全基因组转基因小鼠C57-TgN(HBVadr2．0)SMMU“3 号”品系为实验对象,从DNA、RNA、蛋白质、病毒学、病理学角度,综合研究了该品系转基因小鼠的生物学特性。基因组DNA PCR、Southern blotting和DNA... 详细信息

本研究利用我们实验室建立并优选的乙肝全基因组转基因小鼠C57-TgN(HBVadr2．0)SMMU“3 号”品系为实验对象,从DNA、RNA、蛋白质、病毒学、病理学角度,综合研究了该品系转基因小鼠的生物学特性。基因组DNA PCR、Southern blotting和DNA测序分析表明,adr亚型的乙型肝炎病毒全基因组转基因已稳定的整合在转基因小鼠的基因组中,并能通过生殖系以孟德尔遗传方式在世代间稳定遗传。RT-PCR和real-time RT-PCR分析表明转基因小鼠中整合的HBV基因能够转录出病毒的所有mRNAs。肝组织免疫组织化学分析显示,转基因小鼠肝细胞中表达HBsAg、HBcAg和 X蛋白三种病毒蛋白,三种病毒蛋白的检出率分别为: 85．82％(HBsAg)、58．25％(HBcAg)和 49．61％(X蛋白)。血清ELISA和Western blotting分析发现,转基因小鼠肝细胞中表达的病毒蛋白可分泌入血,小鼠血清中HBsAg和HBeAg的检出率分别为:55．20％和25．00％。对小鼠血清DNA进行PCR和real-time PCR分析发现,转基因小鼠血清中存在HBV DNA,其含量达到临床患者阳性标准,表明转基因小鼠中整合的HBV基因组DNA可复制包装成病毒颗粒并分泌入血。肝组织H-E染色分析发现,部分转基因小鼠肝组织中出现了不同程度的肝细胞变性(45．52％)、肝细胞坏死区和汇管区数量不等的单个核细胞浸润(47．01％)。浸银染色分析发现,29．10％(39／134)的转基因小鼠肝组织出现了纤维组织增生,特别是单个核细胞浸润处。透射电镜分析发现,转基因小鼠肝脏组织发生了超微病理损伤,主要有:线粒体肿胀、线粒体嵴消失、内质网扩张、髓样体结构形成、胶原纤维增生。这些结果表明,转基因小鼠发生了与人类慢性HBV无症状携带者相似的肝组织病理性损伤, 总体为轻度慢性肝炎。

关键词： HBV 肝组织乙型肝炎病毒全基因组生物学特性

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大鼠脑外伤时嘌呤受体P2X4受体的表达

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解剖学杂志 2003年第3期26卷 203-208页

作者：向正华吕军蒋平焦炳华 Burnstock G 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 英国伦敦大学学院自主神经科学研究所

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后... 详细信息

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后期主要以具有突起的细胞为主。结论:脑外伤早期,损伤区P2X4受体免疫反应阳性细胞主要为小胶质细胞,中后期可能星形胶质细胞为多;由此推测P2X4参与脑外伤时大脑生理或病理生理功能的调节。

关键词：大鼠脑外伤嘌呤受体 P2X4 免疫组织化学细胞免疫反应 RT-PCR

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