检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第6期21卷 534-536页

作者：陈世敏蔡在龙毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序... 详细信息

目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序列正确并转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导表达融合蛋白 GST- h AL R,表达产物通过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析纯化后进行 Throm bin酶切。结果和结论 :构建成融合蛋白 GST- h AL R的重组表达质粒 ,h AL R在大肠杆菌高效表达 ,重组蛋白主要以可溶形式存在于胞质中 ,融合蛋白的分离纯化简单易行。

关键词：肝再生基因表达纯化 cDNA 克隆

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庚型肝炎病毒E2蛋白在转基因小鼠细胞内的定位及致病性研究

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 842-845页

作者：胡卫江陈景山戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 美国耶鲁大学

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆... 详细信息

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆抗体对 HGV包膜蛋白 E2的表达进行分析和定位。通过血清 AL T检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。结果 :免疫组织化学结果表明 ,HGV E2主要表达于转基因小鼠肝细胞膜 ,少量表达于胞质内 ;肾脏、心脏、肺及脾脏均未呈现 E2蛋白的阳性反应。组织病理学检查显示转基因小鼠的肝细胞出现水样变性、脂肪变性及淋巴细胞浸润等轻度炎性反应 ,这些变化不随年龄增长而加重 ;其他组织的病理学检查无异常。转基因小鼠血清转氨酶 AL T与对照小鼠无明显差异。结论 :HGV包膜蛋白 E2的表达具有相对的嗜肝性 ,主要分布在转基因小鼠的肝细胞膜 ,并可引起轻度肝细胞损伤。

关键词：转基因 E2蛋白致病性庚型肝炎 HGV

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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 857-860页

作者：潘卫戚中田贺祥陈秋莉潘欣第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学科研部

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 详细信息

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。

关键词：噬菌体随机展示肽库核心蛋白丙型肝炎 HCV

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中国姥鲨软骨源新生血管抑制因子(Sp8)的分离纯化及生物学活性

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第二军医大学学报 2000年第2期21卷 107-110页

作者：陈建鹤焦炳华缪为民王路王梁华缪辉南解放军第422医院内二科广东湛江524005 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细... 详细信息

目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细胞增殖、体内抑制新生血管生长和抑制小鼠移植 S180肉瘤生长作为筛选指标。结果 :Sp8可在体外抑制血管内皮细胞增殖 ,40μg/ml浓度时抑制率为 2 0 % ;在体内具有抑制新生血管生长的作用 ,兔角膜模型抑制率为 72 .7% ,鸡胚模型 (CAM)抑制率为 79% ;并能明显抑制小鼠体内移植 S180肉瘤的生长 (P<0 .0 0 1)。结论 :Sp8介导了鲨鱼软骨中的抗肿瘤活性 ,其作用可能是通过抑制肿瘤诱生新生血管形成这一途径来实现的。

关键词：鲨鱼软骨抑制因子新生血管抗肿瘤活性

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睫状神经营养因子对体外培养骨骼肌细胞的促增殖效应

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中国应用生理学杂志 2000年第1期16卷 59-62页

作者：邓小华侍坚蒋春雷路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 成都军区总医院

目的 :探讨睫状神经营养因子 (CNTF)对骨骼肌细胞的直接营养作用 ,从而为神经肌肉系统损伤和退行性病变的治疗提供新的思路。结果 :CNTF可以促进体外培养的L6 TG肌母细胞和新生SD大鼠原代骨骼肌细胞增殖。结论 :CNTF对体外骨骼肌细胞... 详细信息

目的 :探讨睫状神经营养因子 (CNTF)对骨骼肌细胞的直接营养作用 ,从而为神经肌肉系统损伤和退行性病变的治疗提供新的思路。结果 :CNTF可以促进体外培养的L6 TG肌母细胞和新生SD大鼠原代骨骼肌细胞增殖。结论 :CNTF对体外骨骼肌细胞具有营养作用。CNTF的神经和肌肉双重营养性能使其可能在神经肌肉损伤和退行性病变的治疗上发挥重要作用。

关键词：骨骼肌细胞增殖神经肌肉疾病 CNTF

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国产葛属药用植物叶表面的扫描电镜观察

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第二军医大学学报 2000年第10期21卷 996-998页

作者：曾明郑水庆张汉明叶熙亭陶朝阳苏中武第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

葛根是一味常用中药,其原植物为豆科葛属植物野葛[Pueraria lobata (Willd. )Ohwi]和粉葛(P. thomsonii Benth.).除上述两种植物外,同属的一些植物如食用葛、峨嵋葛、三裂叶葛等在我国部分地区也作葛根使用[1].我们已对葛属植物的花粉[2... 详细信息

葛根是一味常用中药,其原植物为豆科葛属植物野葛[Pueraria lobata (Willd. )Ohwi]和粉葛(P. thomsonii Benth.).除上述两种植物外,同属的一些植物如食用葛、峨嵋葛、三裂叶葛等在我国部分地区也作葛根使用[1].我们已对葛属植物的花粉[2]及花冠表面显微特征[3]进行了研究,而叶片作为植物的最外部分之一,其表皮和毛被特征必将最快地反映外界环境的变化,一些特征已明显处于基因的控制之下[4],从而成为分类和鉴定的有用证据.尤其是随着电镜扫描(SEM)的应用,这些特征更广泛地应用于不同的分类群的区分.本文报道了野葛、粉葛及同属的6个种和1个变种植物叶表面特征的SEM观察结果,以期为更好地识别种、变种,并为该属植物的鉴定和分类提供更多的形态学依据.

关键词：葛属药用植物叶表面扫描电镜形态学

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人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 586-589页

作者：张燕王学敏杨雨善蒋蕾郑惠民谢惠君第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院神经内科

目的 :了解线粒体 DNA大片段缺失突变及其意义。方法 :采用 6种方法提取人外周血细胞 DNA ,其中 1种方法先分离线粒体 ,再抽提线粒体 DNA。以得到的人外周血细胞 DNA为模板进行 PCR扩增 ,其产物经琼脂糖凝胶回收后与p GEM- T载体连接、... 详细信息

目的 :了解线粒体 DNA大片段缺失突变及其意义。方法 :采用 6种方法提取人外周血细胞 DNA ,其中 1种方法先分离线粒体 ,再抽提线粒体 DNA。以得到的人外周血细胞 DNA为模板进行 PCR扩增 ,其产物经琼脂糖凝胶回收后与p GEM- T载体连接、转化、测序。结果 :6种方法抽提 DNA进行 PCR扩增后 ,产物电泳行为相同 ,发现人血细胞线粒体 DNA存在 13 16 2 bp特大片段缺失突变。结论 :此缺失是首次发现的 ,经测序证明为人线粒体 DNA最大片段的缺失。

关键词： DNA 线粒体染色体缺失外周血细胞 DNA损伤

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汉族人胶质细胞源性神经营养因子前体cDNA的核苷酸序列分析及其功能研究

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第二军医大学学报 2000年第5期21卷 401-405页

作者：陈哲宇黄爱军何成路长林吴祥甫第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 中国科学院上海生物化学研究所

目的 :对汉族人胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)前体 c DNA进行核苷酸序列分析及功能研究。方法 :通过RT- PCR法扩增汉族人 GDNF前体 c DNA ,利用昆虫杆状病毒表达系统 (BES)表达此前体 c DNA,原代培养中脑多巴胺能神经元对表达产物... 详细信息

目的 :对汉族人胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)前体 c DNA进行核苷酸序列分析及功能研究。方法 :通过RT- PCR法扩增汉族人 GDNF前体 c DNA ,利用昆虫杆状病毒表达系统 (BES)表达此前体 c DNA,原代培养中脑多巴胺能神经元对表达产物进行活性测定。结果 :汉族人 GDNF前体 c DNA为截短的 5 5 5 bp的转录体 ,其在昆虫细胞中的分泌表达产物能促进多巴胺能神经元的存活和分化。结论 :汉族人 GDNF前体 c DNA序列与文献报道的 6 33 bp的序列相比缺失了 78个碱基 ,此 78个碱基的缺失并不影响人

关键词：胶质细胞源性神经营养因子基因克隆 cDNA 序列

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从噬菌体随机肽库筛选庚型肝炎病毒E2抗原表位

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 838-841页

作者：柯屾戚中田施明赵平王建安姚志建沈倍奋第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所北方基因研究中心

目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :... 详细信息

目的 :筛选能识别庚型肝炎病毒 (HGV) E2区的单克隆抗体和有竞争抑制活性的多肽。方法 :利用抗 HGV E2区的3株单克隆抗体 M6 ,M13,M30作为筛选配基 ,对构象限制性的随机环 9肽库进行亲和筛选 ,并对阳性噬菌体克隆进行功能鉴定。结果 :证实亲和筛选具有良好的富集效果后 ,随机挑出 16个噬菌体克隆进行交叉结合实验 ,有 14个克隆与 M6抗体有较强的特异结合 ;其中 10个克隆在竞争抑制实验中抑制率大于 5 0 %。 DNA测序表明 9个克隆具有氨基酸核心序列 GYAPL S,该序列与 HGV E2区第 30 6～ 311位氨基酸有较好的同源性。用合成肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P9GC5和 P9GC11进行HGV E2抗原抗体实验 ,显示它们的 IC5 0 分别为 4.5和 7.2 nmol/ L。结论 :从噬菌体随机肽库中筛选到能与 HGV E2抗体特异性结合的 HGV抗原表位 ,并确定与合成了具有活性的核心多肽序列。

关键词：噬菌体随机肽库 E2蛋白抗原表位庚型肝炎 HGV

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基因修饰细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的电生理评价

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第二军医大学学报 2000年第7期21卷 621-624页

作者：余科炜叶晓健冯红曲伸李家顺路长林武警上海总队医院骨科上海201103 第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学长海医院药学部长海医院内分泌科基础医学部神经生物学教研室

目的 :采用神经电生理检查方法 ,观察逆转录病毒载体介导脑源性神经营养因子 ( BDNF)基因修饰成肌细胞对损伤脊髓的治疗作用。方法 :3 0只 SD大鼠在 T9水平制成脊髓横断损伤模型 ,并随机分为基因细胞组 ( A组 )、成肌细胞组 ( B组 )及... 详细信息

目的 :采用神经电生理检查方法 ,观察逆转录病毒载体介导脑源性神经营养因子 ( BDNF)基因修饰成肌细胞对损伤脊髓的治疗作用。方法 :3 0只 SD大鼠在 T9水平制成脊髓横断损伤模型 ,并随机分为基因细胞组 ( A组 )、成肌细胞组 ( B组 )及损伤对照组 ( C组 ) ,每组 10只大鼠。术后 3个月 ,采用皮质体感诱发电位 ( CSEP)和运动诱发电位 ( MEP)等电生理检测技术 ,观察轴突是否有再生及其神经功能恢复程度。结果 :( 1) A组中 3只大鼠损伤 3个月后出现 CSEP波 ,5只出现 MEP波 ,B,C组动物未发现电生理信号恢复 ;( 2 )重新出现的 CSEP或 MEP信号均较损伤前波幅减低 ,潜伏期延长。结论

关键词：脊髓损伤基因修饰成肌细胞移植电生理

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