检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 1999年第3期20卷 158-160页

作者：侍坚路长林曲伸何小龙王成海第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的：观察神经营养素４（ＮＴ－４）基因修饰细胞对成年大鼠脊髓前角运动神经元损伤的保护作用。方法：应用逆转录病毒介导的体外ＮＴ－４基因转移方法，制备高表达ＮＴ－４的基因修饰细胞。离断大鼠左侧坐骨神经作为外周神经损伤模型... 详细信息

目的：观察神经营养素４（ＮＴ－４）基因修饰细胞对成年大鼠脊髓前角运动神经元损伤的保护作用。方法：应用逆转录病毒介导的体外ＮＴ－４基因转移方法，制备高表达ＮＴ－４的基因修饰细胞。离断大鼠左侧坐骨神经作为外周神经损伤模型，右侧作为对照，在离断处移植ＮＴ－４基因修饰细胞。观察大鼠脊髓前角运动神经元尼氏染色和胆碱酯酶染色的变化。结果：在移植ＮＴ－４基因修饰细胞组和对照组间，尼氏和胆碱酯酶染色有显著性差异。结论：移植ＮＴ－４基因修饰细胞对外周神经损伤所造成的运动神经元的退变有显著的改善作用。

关键词：神经营养素4 运动神经元损伤基因修饰大鼠

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基因治疗帕金森病大鼠脑内纹状体多巴胺含量的检测

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中华老年医学杂志 1999年第3期18卷 167-169页

作者：曲伸何小龙侍坚由振东王成海路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因工程成肌细胞脑内纹状体移植对帕金森病（ＰＤ）大鼠脑内纹状体多巴胺含量的影响。方法建立逆转录病毒介导的ＢＤＮＦ表达质粒，并转染成肌细胞进行ＰＤ大鼠脑内纹状体移植。结果细胞移植后... 详细信息

目的观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因工程成肌细胞脑内纹状体移植对帕金森病（ＰＤ）大鼠脑内纹状体多巴胺含量的影响。方法建立逆转录病毒介导的ＢＤＮＦ表达质粒，并转染成肌细胞进行ＰＤ大鼠脑内纹状体移植。结果细胞移植后第２和第８周，移植组毁损侧纹状体多巴胺含量〔分别为（９５７５３±８８９５）和（１０４０２９±１０４７８）ｐｇ／ｍｇ〕较对照组〔分别为（３３５９８±１０２４８）和（３２７８８±７０２３）ｐｇ／ｍｇ〕明显增加（均为Ｐ＜００１），并可维持２个月之久。结论脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植，可使脑内纹状体多巴胺含量明显增加，可能为帕金森病的治疗提供了一种新的治疗方法。

关键词：帕金森病多巴胺基因疗法 BDNF

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庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第6期19卷 475-478页

作者：朱分禄任浩宋燕斌戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３基因片段，克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸＨＴａ后进行核苷酸序列测定，待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱... 详细信息

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３基因片段，克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸＨＴａ后进行核苷酸序列测定，待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱导重组工程菌，用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３８１０处有一条明显的蛋白表达带，占菌体总量的１７．７％。用ＮｉＮＴＡ亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶＲＮＡ阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶＮＳ３抗原，该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ感染的检测。

关键词：庚型肝炎病毒 NS蛋白大肠杆菌表达

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组蛋白脱乙酰化酶HDAC1 cDNA的克隆及其酵母表达质粒的构建

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第二军医大学学报 1999年第4期20卷 205-208页

作者：陈坚张晓琴傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：获得ＨＤＡＣ１的ｃＤＮＡ及构建酵母双杂合系统中的靶基因。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出一约１．４５ｋｂ的ＤＮＡ片段，作全自动测序，重组入ｐＬｅｘＡ载体，构建成ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１，并... 详细信息

目的：获得ＨＤＡＣ１的ｃＤＮＡ及构建酵母双杂合系统中的靶基因。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出一约１．４５ｋｂ的ＤＮＡ片段，作全自动测序，重组入ｐＬｅｘＡ载体，构建成ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１，并用醋酸锂法转化酵母菌ＥＧＹ４８，在选择性培养基上观察ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１在ＥＧＹ４８中的表达情况。结果：获得的１．４５ｋｂ的ＤＮＡ编码的氨基酸序列与文献报道的ＨＤＡＣ１一致，转化的酵母菌在选择性培养基ＳＤ／Ｇａｌ／Ｒａｆ／－Ｕｒａ／－Ｈｉｓ／上培养３ｄ后，长出约１ｍｍ大小的白色菌落。结论：获得了ＨＤＡＣ１的ｃＤＮＡ，ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１对ＥＧＹ４８没有毒性作用，也没有自身激活ＬａｃＺ功能，可作为酵母双杂合系统中的靶基因。

关键词：组蛋白脱乙酰化酶酵母双杂合系统质粒克隆

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糖皮质激素受体基因片段的克隆和目标载体的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 726-728页

作者：姚玉成胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅ... 详细信息

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅｏ质粒框架和同源片段构建载体。结果：详细分析了ＧＲ基因第２外显子及其侧翼的基因组ＤＮＡ片段结构，克隆了同源片段，构建了目标载体。结论：这一载体的构建将为进一步建立ＧＲ基因剔除小鼠奠定基础。

关键词：糖皮质激素受体目标载体克隆 GR基因

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一种改良的分离小分子蛋白质的电泳方法——Tricine-SDS-PAGE

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第二军医大学学报 1999年第9期20卷 696-697页

作者：蔡在龙陈世敏冯伟华周雍毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相... 详细信息

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相对分子质量为２万以下的蛋白质分离效果欠佳。我们结合文献［２，３］，通过探索，建立了一种有效分离小分子蛋白质、多肽的电泳方法，为小分子蛋白质、多肽的研究提供极大方便。１　材料和方法１．１　主要试剂和设备　Ｔｒｉｃｉｎｅ｛Ｎ［三（羟甲基）甲基］甘氨酸｝、尿素、Ｔｒｉｓ购自Ｓｉｇｍａ公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺购自Ｓａｎｇｏｎ公司；垂直平板电泳槽购自中科院生物化学研究所；电泳仪Ｐｏｗ

关键词：蛋白质小分子蛋白分离电泳

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乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠的研究

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第二军医大学学报 1999年第4期20卷 212-215页

作者：胡卫江李建秀余宏宇戴德顺王新民孙伟郝光荣王肖鹏胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学教保处实验动物中心

目的：制备含有２．０拷贝乙型肝炎病毒（ＨＢＶ，ａｄｒ亚型）基因组的转基因小鼠，为ＨＢＶ相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法：应用受精卵原核显微注射的方法，产生ＨＢＶ转基因小鼠。用ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ... 详细信息

目的：制备含有２．０拷贝乙型肝炎病毒（ＨＢＶ，ａｄｒ亚型）基因组的转基因小鼠，为ＨＢＶ相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法：应用受精卵原核显微注射的方法，产生ＨＢＶ转基因小鼠。用ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ杂交、放射免疫、免疫组织化学以及亚显微结构分析等方法，研究外源基因在转基因小鼠体内的整合、表达以及复制。应用常规病理切片及血清生物化学方法分析转基因小鼠的病理学改变。结果：得到了４只整合有ＨＢＶ基因组的建立者小鼠，并证明ＨＢＶ基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，在肝、肾组织内可特异性表达、复制，并在肝细胞内发现了Ｄａｎｅ颗粒。转基因小鼠的肝、肾组织未见明显的病理学改变。结论：获得了ＨＢＶ的转基因小鼠，其病毒基因可以表达，并有病毒颗粒形成。该小鼠对于ＨＢＶ的各个基因产物是免疫耐受的，其基本生物学特性与人类的ＨＢＶ携带者特征相似。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠 Dane颗粒 adr亚型

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妊高征患者脐血、羊水中降钙素基因相关肽含量的变化

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第二军医大学学报 1999年第8期20卷 574-575页

作者：李娟戎霖王成海第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的：探讨妊娠高血压综合征（妊高征）患者脐血、羊水中降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）含量的变化。方法：应用放射免疫测定法，观察２６例正常妊娠妇女和３２例妊高征患者脐血与羊水中ＣＧＲＰ含量的变化。结果：脐动脉血中... 详细信息

目的：探讨妊娠高血压综合征（妊高征）患者脐血、羊水中降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）含量的变化。方法：应用放射免疫测定法，观察２６例正常妊娠妇女和３２例妊高征患者脐血与羊水中ＣＧＲＰ含量的变化。结果：脐动脉血中ＣＧＲＰ含量，妊高征患者显著高于正常妊娠者（Ｐ＜０．０５），且随着病情的加重逐渐增加，重度者显著高于轻度者（Ｐ＜０．０５）；羊水中ＣＧＲＰ含量妊高征患者显著高于正常妊娠对照组（Ｐ＜０．０５）；脐动脉血、羊水中ＣＧＲＰ含量的变化与新生儿１ｍｉｎＡｐｇａｒ评分呈显著负相关（Ｐ＜００１，Ｐ＜０．０５）。结论：脐动脉血、羊水中ＣＧＲＰ含量的变化可能与胎儿宫内缺氧有关。

关键词：胎血羊水 CGRP 妊娠高血压

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随机多肽噬菌体展示载体pCANTAB5X的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 723-725页

作者：潘卫戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法：在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列，将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中，再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果：限制... 详细信息

目的：构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法：在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列，将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中，再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果：限制酶切点ＸｂａⅠ和ＨＧＶＣ片段被引入到新构建的噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ中。结论：构建的新的噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ能有效展示外源性随机多肽。

关键词：噬菌体展示随机多肽外源性 pCANTAB5X

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nm23H1正反义表达载体的构建

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第二军医大学学报 1999年第6期20卷 350-352页

作者：金嗣松潘星华王元和胡以平傅继梁第二军医大学基础医学部生物学教研室第二军医大学长征医院普通外科

目的：构建ｎｍ２３Ｈ１正反义表达载体ｐｃ３ＡＮ和ｐｃ３ＡＭ。方法：将ｎｍ２３Ｈ１基因正、反向插入质粒ｐｃＤＮＡ３和ｐＲＣ／ＣＭＶ，并转染肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１。结果：转染正义表达载体后ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ和蛋白表达... 详细信息

目的：构建ｎｍ２３Ｈ１正反义表达载体ｐｃ３ＡＮ和ｐｃ３ＡＭ。方法：将ｎｍ２３Ｈ１基因正、反向插入质粒ｐｃＤＮＡ３和ｐＲＣ／ＣＭＶ，并转染肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１。结果：转染正义表达载体后ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平增加，转染反义表达载体后ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ和蛋白表达水平降低。结论：构建的载体能在肝癌细胞内有效表达。

关键词：肝肿瘤 nm23H1基因正反义表达载体载体构建

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