检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第6期21卷 537-540页

作者：卢洋黎怀星李建秀傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 详细信息

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

关键词：转基因小鼠基因突变 PMTR1质粒

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新型血管内皮细胞抑制因子VEGI151的基因克隆表达及其活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 485-489页

作者：王路潘卫朱分禄焦炳华娄永华肖扬戚中田卫生毒理学教研室!上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室!上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI) 基因克隆表达内皮细胞生物学活性

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TT型病毒基因组的克隆与进化分析

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微生物学报 2001年第4期41卷 408-414页

作者：任浩董辉朱分禄缪晓辉王文戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院感染科

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA... 详细信息

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA片段中特有的限制性内切酶位点将TTV的DNA片段首尾相连,得到近全长的基因组克隆,命名为TTV021.对TTV021的核酸序列进行分析,TFV021长3 472 nt,存在2个阅读框架ORF1和ORF2,分别编码785和146个氨基酸.将TTV021与其它已知的TTV基因组全序列进行了同源性比较,并进行进化分析.结果表明,TTV021序列与TTV分离株CHN2、BDH1的遗传距离较近,而与其它分离株相对较远.

关键词：输血传播性病毒克隆同源性进化分析

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人乙型肝炎病毒(ayw型)全基因组转基因小鼠病理学观察

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 205-207页

作者：余宏宇雷章恒龚志锦沙继宏杨勇骥潘星华王肖鹏傅继梁胡以平第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学基础医学部生物学教研室和医学分子遗传学开放实验室第二军医大学基础医学部电镜室

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３～２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、... 详细信息

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３～２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、肺、心、脑、睾丸（卵巢）、唾液腺、肌肉和皮肤等组织，切片ＨＥ染色后进行光镜和透射电镜形态观察。结果：上述两种清洁级小鼠大体和光镜下各器官和组织未见有明显病变；两种小鼠移入普通级环境下饲养４周后肝脏等器官发生机会性感染的机会相似；透射电镜下所有被检转基因小鼠的部分肝细胞扩张的滑面内质网等处有ＨＢｓＡｇ样颗粒和Ｄａｎｅ样颗粒，部分转基因小鼠之肾小管上皮细胞内见类似病毒颗粒；肝、肾细胞内未见其他亚微病理损害。结论：所建成的ＨＢＶ转基因小鼠既能在肝（其次肾）细胞内产生ＨＢＶ样病毒颗粒，但又不产生明显病理损害。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学动物模型

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生长抑素与脑瘤关系的临床研究

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第二军医大学学报 1995年第5期16卷 426-428页

作者：路红社周晓平赵孟尧过宗南王成海林葆城第二军医大学长海医院神经外科第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

生长抑素（Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳ）与肿瘤的关系日益受到重视。５６例脑瘤患者，男３８例，女１８例。其中脑膜瘤２６例；脑胶质瘤３０例分为Ⅰ级１０例，Ⅱ级１０例，Ⅲ～Ⅳ级１０例。入院时和术后８ｄ采集血标本，入院时、... 详细信息

生长抑素（Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳ）与肿瘤的关系日益受到重视。５６例脑瘤患者，男３８例，女１８例。其中脑膜瘤２６例；脑胶质瘤３０例分为Ⅰ级１０例，Ⅱ级１０例，Ⅲ～Ⅳ级１０例。入院时和术后８ｄ采集血标本，入院时、手术后３、６、８ｄ收集脑脊液，脑组织与瘤周脑组织在手术中收集。采用放射免疫方法测定各种样品的ＳＳ含量。全部脑瘤组织中ＳＳ含量均低于其周围正常脑组织。随着脑胶质瘤恶性程度的升高，其ＳＳ含量比其周围脑组织降低愈显著。提示脑瘤组织中ＳＳ含量的降低与脑瘤的发生、发展及生长有密切关系。

关键词：生长抑素脑肿瘤放射免疫法

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光滑型内毒素类脂A制备的新方法

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 175-176页

作者：焦炳华王梁华朱玉平周炳荣第二军医大学基础医学部微生物学教研室

光滑型内毒素类脂Ａ制备的新方法焦炳华，王梁华，朱玉平，周炳荣内毒素系存在于革兰阴性菌胞壁外膜中的脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）成分，在革兰阴性菌感染的发病机理中起着重要作用［１，２］。类脂Ａ... 详细信息

光滑型内毒素类脂Ａ制备的新方法焦炳华，王梁华，朱玉平，周炳荣内毒素系存在于革兰阴性菌胞壁外膜中的脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）成分，在革兰阴性菌感染的发病机理中起着重要作用［１，２］。类脂Ａ是ＬＰＳ的活性及毒性中心［３］因而...

关键词：内毒素类脂A 制备

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HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 209-211页

作者：赵平戚中田潘卫崔晓红朱诗应陈景山第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ... 详细信息

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，检测ＤＮＡ疫苗编码的ＨＣＶ核心蛋白的表达。结果：３０％（３／１０）免疫小鼠产生ＨＣＶ核心蛋白抗体，该抗体能检测到重组质粒在ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达的ＨＣＶ核心蛋白。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白基因 DNA疫苗体液免疫应答

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PCR检测丙型肝炎病毒感染各高危人群

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第二军医大学学报 1995年第5期16卷 405-408页

作者：潘卫戚中田崔晓红印慨宋燕斌杜平第二军医大学基础医学部微生物学教研室

用ＰＣＲ方法克隆了中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者的５＇端非编码区（５＇－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，５＇－ＮＣＲ）序列，并根据此序列合成引物检测我国ＨＣＶ各高危感染人群的病毒复制情况，结果显示ＨＣＶＲＮＡ在慢性... 详细信息

用ＰＣＲ方法克隆了中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者的５＇端非编码区（５＇－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，５＇－ＮＣＲ）序列，并根据此序列合成引物检测我国ＨＣＶ各高危感染人群的病毒复制情况，结果显示ＨＣＶＲＮＡ在慢性丙型肝炎患者的血清标本中的阳性率为８１．８％（９／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的血液透析患者血清标本中的阳性率为６３．６％（７／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的献血员血清标本中的阳性率为２０％（４／２０），在ＨＣＶ抗体阳性的肝细胞癌标本中的阳性率为１００％（５／５），在ＨＣＶ抗体阴性的肝细胞癌标本中的阳性率为３３．３％（７／２１）。表明ＨＣＶ的体内复制情况在各高危风险人群中的情况有明显差别；提示ＨＣＶ感染也是我国肝细胞癌发生的重要风险因子之一。

关键词：丙型肝炎病毒多聚酶链反应核苷酸序列

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肿瘤坏死因子突变体TNF60的研究

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第二军医大学学报 1998年第2期19卷 116-119页

作者：周凯娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：寻找具有更强抗肿瘤活性及增强或抑制ＴＮＦα生物学活性的ＴＮＦα突变蛋白。方法和结果：应用ＰＣＲ技术对ｒｈＴＮＦα进行大片段缺失突变，构建了ｒｈＴＮＦα分子Ｎ端缺失５９个氨基酸的突变体ＴＮＦ６０的编码基因，插入ｐ... 详细信息

目的：寻找具有更强抗肿瘤活性及增强或抑制ＴＮＦα生物学活性的ＴＮＦα突变蛋白。方法和结果：应用ＰＣＲ技术对ｒｈＴＮＦα进行大片段缺失突变，构建了ｒｈＴＮＦα分子Ｎ端缺失５９个氨基酸的突变体ＴＮＦ６０的编码基因，插入ｐＢＶ２２０载体并在蛋白酶缺陷的大肠杆菌ＳＧ１１１７中获得较高表达，表达量为２０．４％。重组蛋白经变性、复性和纯化，纯度＞９７％。ＴＮＦ６０对Ｌ９２９，Ｈｅｐ－２，Ｕ９３７三株细胞均丧失了细胞毒性，但都表现出增强ｒｈＴＮＦα细胞毒性的作用。

关键词：肿瘤坏死因子基因缺失聚合酶链反应基因突变

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重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的制备及纯化

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 324-327页

作者：王梁华焦炳华第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）。方法：高效表达ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎、硫酸铵分段盐析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，得到电泳... 详细信息

目的：制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）。方法：高效表达ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎、硫酸铵分段盐析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，得到电泳纯ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ，其比活性为１．８８×１０８ＩＵ／ｍｇ。进一步超滤浓缩，ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０纯化，比活性达２×１０８ＩＵ／ｍｇ。结果：纯度＞９８．２％，回收率约为６５％，内毒素＜２Ｅｕ·（１０６ＩＵ）－１·ｍｌ－１。结论：建立了适宜的ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ纯化方法，连续三批原料和制剂通过国家卫生部药品生物制品检定所检定，符合ＷＨＯ有关基因工程产品临床用药标准，为过渡到临床验证打下了基础。

关键词：肿瘤坏死因子衍生物纯化制备 rh-TNFαD3a

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