检索结果-内蒙古大学图书馆

电镜技术在病理学诊断中的应用

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 628-628,649页

作者：颜永碧陆月良王英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

为摸索出适合临床超微结构病理诊断的电镜技术，更好地发挥其对疾病诊断的作用，现根据多年工作积累并结合临床实际，介绍本实验室在疾病诊断中电镜技术的应用情况。

关键词：病理学诊断电镜技术临床应用疾病诊断

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转基因伯氏疟原虫的建立及报告基因表达的初步研究

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 25-28页

作者：曹毅张冬梅李树玲潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的:通过转染含有绿色荧光蛋白(GFP)和PbfMSP1片段的重组质粒,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫MSP-1 19 000片段(PfMSP1-19)的转基因伯氏疟原虫.方法:构建重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.伯氏疟原虫ANKA株经培养和分离后用电转化... 详细信息

目的:通过转染含有绿色荧光蛋白(GFP)和PbfMSP1片段的重组质粒,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫MSP-1 19 000片段(PfMSP1-19)的转基因伯氏疟原虫.方法:构建重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.伯氏疟原虫ANKA株经培养和分离后用电转化方法转入重组转染质粒,药物筛选转化原虫后进行PCR检测,并于荧光显微镜下检测报告基因GFP的表达.结果:构建了重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的伯氏疟原虫.PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在GFP和PbfMSP1基因.结论:重组质粒已成功转染伯氏疟原虫并表达了GFP报告基因,建立了伯氏疟原虫转染技术.

关键词：伯氏疟原虫转基因绿色荧光蛋白

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恶性疟原虫红内期两个重要候选抗原的相互影响

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 18-21页

作者：钱锋张青锋薛向阳潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的 :分析恶性疟原虫红内期 2个疫苗候选抗原 Pf AMA- 1 ( )和 Pf MSP1 - 1 9的相互关系。方法 :用 EL ISA和竞争EL ISA检测蛋白和抗体的反应 ,一些抗体用特定的蛋白进行预吸附。结果 :Pf MSP1 - 1 9蛋白能去除恶性疟疾患者血浆对Pf A... 详细信息

目的 :分析恶性疟原虫红内期 2个疫苗候选抗原 Pf AMA- 1 ( )和 Pf MSP1 - 1 9的相互关系。方法 :用 EL ISA和竞争EL ISA检测蛋白和抗体的反应 ,一些抗体用特定的蛋白进行预吸附。结果 :Pf MSP1 - 1 9蛋白能去除恶性疟疾患者血浆对Pf AMA- 1 ( )的反应 ,这种能力是剂量依赖的 ,完全去除需要高的蛋白浓度 ;Pf MSP1 - 1 9蛋白也能去除兔抗 Pf CP- 2 .9血清、兔抗 Pf AMA- 1 ( )血清、亲和纯化的兔抗 Pf AMA- 1 ( ) Ig G对 Pf AMA- 1 ( )的反应。结论 :酵母表达的 Pf MSP1 - 1 9重组蛋白能吸附 Pf AMA- 1 ( )

关键词：恶性疟原虫红内期抗原酶联免疫吸附测定抗体

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在减毒伤寒杆菌CVD908疫苗株中四环素诱导表达恶性疟原虫MSP1-31片段基因

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 51-53页

作者：钱锋潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的 :用含 PL tet O启动子的 p ZE11质粒在减毒伤寒杆菌 CVD90 8疫苗株中表达恶性疟原虫 MSP1- 31片段基因。方法 :构建受四环素诱导调控的重组质粒 p ZE11/ MSP1- 31,将该重组质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌 CVD90 8/ tet R... 详细信息

目的 :用含 PL tet O启动子的 p ZE11质粒在减毒伤寒杆菌 CVD90 8疫苗株中表达恶性疟原虫 MSP1- 31片段基因。方法 :构建受四环素诱导调控的重组质粒 p ZE11/ MSP1- 31,将该重组质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌 CVD90 8/ tet R疫苗株中 ,用免疫印迹反应检测 MSP1- 31在 CVD90 8/ tet R株中的四环素诱导表达。结果 :构建了重组的 p ZE11/ MSP1- 31质粒 ,免疫印迹反应显示该 MSP1- 31基因在 CVD90 8/ tet R株中得到有效表达 ,且依赖于四环素的存在。结论 :成功地构建了由四环素诱导的、表达恶性疟原虫 MSP1- 31的减毒伤寒杆菌疫苗株。

关键词：伤寒沙门氏菌恶性疟原虫裂殖子表面蛋白-1 四环素基因表达 PLteto启动子

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恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因的构建及其高效表达

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 22-24页

作者：张青锋潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的:构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因(PfCP-TCL),并在毕氏酵母中进行高效分泌表达.方法:选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原CSP、TRAP和LSA-1中的一些重要T、B细胞表位,按一定的次序加以串联连接,并全合成该融合基因.在毕氏... 详细信息

目的:构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因(PfCP-TCL),并在毕氏酵母中进行高效分泌表达.方法:选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原CSP、TRAP和LSA-1中的一些重要T、B细胞表位,按一定的次序加以串联连接,并全合成该融合基因.在毕氏酵母中进行分泌表达,并纯化表达产物.结果:合成的基因在毕氏酵母中高水平分泌表达,产量达1 g/L以上.经离子交换和凝胶过滤2步纯化过程,获得纯度在95%以上的重组蛋白.结论:全合成的多表位融合抗原基因能在毕氏酵母中高水平分泌表达,并产生一种工艺简易的纯化方法.大量获得该重组蛋白为探讨其免疫学功能及作为多价联合疫苗的成分提供了基础.

关键词：恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因表达

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肾小球诊断样品由光镜的冰冻切片补做电镜制样的方法

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 60-60,69页

作者：颜永碧谢志芳陆月良第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

现代肾脏病学已普遍将光镜、电镜诊断作为肾小球病诊断的常规，尤其电镜检查配合临床以明确诊断十分重要。然而，有时因为各种原因在电镜制备的肾组织穿刺（肾穿）标本中找不到肾小球，但临床又非常需要电镜的观察结果。目前普遍采用光... 详细信息

现代肾脏病学已普遍将光镜、电镜诊断作为肾小球病诊断的常规，尤其电镜检查配合临床以明确诊断十分重要。然而，有时因为各种原因在电镜制备的肾组织穿刺（肾穿）标本中找不到肾小球，但临床又非常需要电镜的观察结果。目前普遍采用光镜常规石蜡包埋的肾小球组织经脱蜡后改做电镜制样进行补救，但标本因固定和脱蜡等因素，效果并不太理想。我们通过摸索和比较几种补救措施，现介绍一种用冰冻切片的肾小球经光镜检测后再进行电镜制样的方法

关键词：肾小球冰冻切片电镜制样肾脏病诊断

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重症脑型疟疾和促炎细胞因子

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 501-503页

作者：宋关鸿第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

在全世界感染性疾病中，疟疾发病率仅次于急性肺炎球菌呼吸道感染（3.5%）和结核病（2.8%），居第三位(2.3%)。全世界99个国家和地区的21.7亿人（占世界人口的40%以上）生活在不同程度的疟疾威胁之中。估计全世界每年有3 ～5亿疟疾临床... 详细信息

在全世界感染性疾病中，疟疾发病率仅次于急性肺炎球菌呼吸道感染（3.5%）和结核病（2.8%），居第三位(2.3%)。全世界99个国家和地区的21.7亿人（占世界人口的40%以上）生活在不同程度的疟疾威胁之中。估计全世界每年有3 ～5亿疟疾临床患者，每年有约150～270万患者死于疟疾。非洲每年约有100万人因疟疾死亡，其中大多数是婴儿和5岁以下儿童。在感染人的恶性疟原虫(Plasmodium falciparum) 、间日疟原虫（P. vivax）、三日疟原虫(P. malariae)和卵形疟原虫（P. ovale）中，恶性疟原虫对人的生命威胁最大。恶性疟原虫感染可迅速地引起多个重要脏器功能障碍，发生重症恶性疟疾。重症恶性疟疾患者的预后很差，即使用有效的抗疟药物和合理的临床治疗，病死率仍可达15%～2 0%。疟疾死亡患者几乎都是恶性疟原虫引起的重症恶性疟疾。重症恶性疟疾的临床表现很复杂，常见的有全身衰竭、意识障碍、呼吸窘迫、多发性惊厥、循环性虚脱、肺水肿、异常出血、黄疸、血红蛋白尿、恶性贫血等。在不同疟疾流行区和不同的人群中，重症恶性疟疾的高发人群和临床表现都很不同。脑型疟疾在所有的年龄组都可发生。

关键词：脑型疟疾炎性细胞因子临床表现红细胞滞留

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伯氏疟原虫氯喹抗性株红内期虫体在肝内的清除

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 512-514页

作者：严继舟宋关鸿第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的 :探讨伯氏疟原虫 (Plasmodium berghei)氯喹抗性 (RC)株红内期虫体在宿主体内消亡的机制。方法 :电镜观察感染伯氏疟原虫 RC株和药物敏感 (N)株小鼠肝脏内白细胞和疟原虫的相互作用。结果 :感染 N株小鼠的肝脏内未见白细胞增生、浸... 详细信息

目的 :探讨伯氏疟原虫 (Plasmodium berghei)氯喹抗性 (RC)株红内期虫体在宿主体内消亡的机制。方法 :电镜观察感染伯氏疟原虫 RC株和药物敏感 (N)株小鼠肝脏内白细胞和疟原虫的相互作用。结果 :感染 N株小鼠的肝脏内未见白细胞增生、浸润 ,感染 RC株小鼠肝脏的门管区和血窦内可见大量单核 -巨噬细胞和少量淋巴细胞及中性粒细胞增生、浸润 ,并伴有大量感染疟原虫的红细胞滞留。活化的单核 -巨噬细胞和感染疟原虫红细胞的表膜相互粘附 ,大量与吞噬细胞直接接触或未接触的感染疟原虫红细胞内的虫体出现危机状态 (crisis form )。偶见巨噬细胞吞噬游离的裂殖子 ,但未见吞噬整个感染疟原虫红细胞。结论 :宿主可能主要通过活化单核 -巨噬细胞诱导疟原虫发生危机状态 ,清除 RC株红内期疟原虫 ,而并非依赖白细胞直接吞噬。

关键词：伯氏疟原虫氯喹清除单核-巨噬细胞危机状态

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人肝癌SM MC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探

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中华内分泌代谢杂志 2002年第6期18卷 478-480页

作者：徐晓辉王学敏向正华郭兴中缪明永徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 ... 详细信息

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 89%以上 )及人GR内含子E的DNA片段 ,构建转录质粒 ,并在体外进行转录 ,用地高辛标记反义RNA探针 ,进行细胞原位杂交 ,碱性磷酸酶底物NBT BCIP显色 ,计算机图像分析系统进行扫描半定量分析。结果　人肝癌SMMC 772 1细胞 44℃培养 1h后 ,用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低 ;加放线菌素D后热休克反应组 ,用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低 ,而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高 ;加放线菌酮后热休克反应组 ,用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高。结论　热休克反应时GRmRNA转录过程受抑 ,GRmRNA前体成熟过程存在剪接障碍。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应糖皮质激素受体 mRNA

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糖皮质激素受体基因片段的克隆和目标载体的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 726-728页

作者：姚玉成胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅ... 详细信息

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅｏ质粒框架和同源片段构建载体。结果：详细分析了ＧＲ基因第２外显子及其侧翼的基因组ＤＮＡ片段结构，克隆了同源片段，构建了目标载体。结论：这一载体的构建将为进一步建立ＧＲ基因剔除小鼠奠定基础。

关键词：糖皮质激素受体目标载体克隆 GR基因

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