目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。 方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序...
详细信息
目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。 方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序列正确并转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导表达融合蛋白 GST- h AL R,表达产物通过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析纯化后进行 Throm bin酶切。 结果和结论 :构建成融合蛋白 GST- h AL R的重组表达质粒 ,h AL R在大肠杆菌高效表达 ,重组蛋白主要以可溶形式存在于胞质中 ,融合蛋白的分离纯化简单易行。
目的:观察人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体DNA(mtDNA)基因表达的情况。方法:根据人线粒体DNA(mtDNA)基因序列,利用primer premier 5.0生物软件设计了4对PCR引物,分别是扩增D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6、16sRNA基因,采用RT-PCR方法...
详细信息
目的:观察人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体DNA(mtDNA)基因表达的情况。方法:根据人线粒体DNA(mtDNA)基因序列,利用primer premier 5.0生物软件设计了4对PCR引物,分别是扩增D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6、16sRNA基因,采用RT-PCR方法对SMMC-7721细胞线粒体DNA上D-loop区及其他3个基因的表达进行了检测,并与其在正常人肝细胞株(L02)线粒体中的表达作了比较。结果:我们发现,与正常人肝细胞株(L02)相比,在SMMC-7721细胞中,D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6基因表达总体是增高的,16sRNA基因表达基本不变,同时在同一基因两条链(重链和轻链)之间的表达也存在差异。结论:我们认为,由于线粒体DNA编码的多肽均是氧化磷酸化酶复合物的亚单位,这些基因表达的异常可能造成细胞对氧利用障碍,细胞能量产生减少,成为造成SMMC-7721细胞主要以糖酵解的方式提供能量的重要原因之一。
暂无评论