检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第2期23卷 129-131页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因... 详细信息

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因转录表达。采用 PCR产物直接克隆法克隆人全长 L IGHT基因及其胞外区编码基因 ,并对胞外区编码基因进行大肠杆菌表达。结果 :当用 IFN-γ和 PMA刺激 PMBC后 4 8h,可诱导 L IGHT基因的明显表达 ,而 L PS、IL - 2和 TNFα则不能诱导。克隆的人 L IGHT全长基因及 L IGHT胞外区编码基因 ,经过 DNA序列测定证实基因序列与文献报道一致。 L IGHT基因胞外区在大肠杆菌获得一定程度的表达。结论 :本研究对人 L IGHT基因及其胞外区编码基因进行了克隆和表达。

关键词： LIGHT TNF超家族外周血单核细胞 RT-PCR 基因克隆基因表达

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重组人可溶性THANK在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 143-146页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PC... 详细信息

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PCR产物克隆于 p MD- 18T,经 DNA测序证实后亚克隆到 p ET- 11a中。重组质粒转化 BL 2 1,以 1m mol/ LIPTG进行诱导表达产物 ,SDS- PAGE分析表达产物 ,对重组蛋白经纯化复性后测定生物学活性。结果 :RT- PCR扩增出编码人 THANK全长编码基因及 PCR扩增出 THANK1 34 - 2 85基因的 c DNA ,经序列分析证实与文献报道完全一致。含有THANK1 34 - 2 85编码基因的表达载体 ,转化大肠杆菌后表达出相对分子质量约 180 0 0的重组蛋白。该重组蛋白经纯化后能够诱导 U937细胞凋亡。结论 :成功克隆了人 THANK基因 ,并在大肠杆菌中表达重组可溶性 THANK,该重组蛋白在实验条件下具有诱导 U937细胞凋亡的作用。

关键词： TNF超家族 RT-PCR 基因克隆基因表达肿瘤重组人可溶性THANK 大肠杆菌

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重组人可溶性VEGI在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 140-142页

作者：娄永华焦炳华肖扬朱玉平王梁华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DN... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DNA测序证实后亚克隆入高表达载体 p L OU- 1,转化大肠杆菌 BL 2 1,获得高表达菌株。经 IPTG诱导获得高表达 ,纯化表达产物并检测其对内皮细胞 ECV30 4增殖的抑制活性。结果 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,约占细菌总蛋白的 4 0 % ;纯化的重组蛋白经复性后具有直接抑制内皮细胞增殖的活性。结论 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,且表达的重组蛋白具有抑制内皮细胞生长作用。

关键词：血管内皮聚合酶链反应血管生长抑制因子基因表达重组人可溶性VEGI 大肠杆菌

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改良PCR-RFLP法测定异质性线粒体基因的相对含量

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第二军医大学学报 2004年第9期25卷 1036-1037页

作者：龙建纲王洁缪明永王学敏第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :改进 PCR- RFL P法 ,确认线粒体异质性基因并测定异质性线粒体基因的相对含量。方法 :依据先期实验中克隆测序得到的 ECV 30 4细胞中线粒体基因 (D- L OOP区 )多态性位点 ,采用两轮 PCR法 ,以第 1轮 PCR胶回收产物为模板 ,作第 2... 详细信息

目的 :改进 PCR- RFL P法 ,确认线粒体异质性基因并测定异质性线粒体基因的相对含量。方法 :依据先期实验中克隆测序得到的 ECV 30 4细胞中线粒体基因 (D- L OOP区 )多态性位点 ,采用两轮 PCR法 ,以第 1轮 PCR胶回收产物为模板 ,作第 2轮 PCR,并在第 2轮 PCR中引入限制性内切酶位点 ,酶切产物行琼脂糖电泳 ,测定异质性线粒体基因的相对含量。结果 :ECV30 4细胞中存在 5 13A/ G异质性 ,二者比例约为 1∶ 3。结论 :确证 ECV30 4细胞中含有 5 13A/ G异质性碱基 ,改良 PCR-RFL P法测定异质性线粒体基因相对含量较为简单可靠。

关键词：线粒体基因异质性 PCR-RFLP

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镉诱导大鼠睾丸三种类型细胞和肝脏金属硫蛋白基因表达的研究

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 184-187页

作者：张建鹏仲燕任绪义周雍冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半... 详细信息

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半定量 RT- PCR、EL ISA、原子分光光度吸收法 ,观察镉处理后不同时相大鼠睾丸三种类型细胞与肝脏 MT基因表达的变化。结果 :睾丸组织中存在 MT。同时还发现 0 h对照组大鼠镉处理后肝脏 MT m RNA增加并保持较高的基础水平 ,3h达峰值后下降 ;而睾丸支持细胞和间质细胞则在 6 h达高峰。镉中毒大鼠睾丸支持细胞和肝脏 MT1m RNA的变化幅度要低于MT2 m RNA,而在间质细胞中则相反。此外 ,生精细胞 MT1m RNA在镉处理后 0～ 3h减少 ,然后增加 ,而 MT2 m RNA的变化则相反 ,而且它们的诱导变化幅度较其他细胞低。镉暴露后肝脏 MT m RNA和 MT均升高 ,但在睾丸三种类型细胞中 MT的表达并没有增加。结论 :镉诱导后 MT m RNA的表达具有细胞和时间依赖性 ;镉虽然能诱导睾丸 MT m RNA的转录但没有促进其 MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸间质细胞生精细胞肝脏

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人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38经^(60)Co照射后线粒体量与功能的改变

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 885-887页

作者：孙青菊王学敏朱克军龙建刚缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:检测人胚肺二倍体成纤维细胞WI38受到60Coγ射线照射后线粒体DNA(mtDNA)的相对含量和线粒体功能的改变;探讨γ射线照射后细胞线粒体的变化规律。方法:四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;采用竞争PCR法测定mtDNA的相对含量;荧光染料R12... 详细信息

目的:检测人胚肺二倍体成纤维细胞WI38受到60Coγ射线照射后线粒体DNA(mtDNA)的相对含量和线粒体功能的改变;探讨γ射线照射后细胞线粒体的变化规律。方法:四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;采用竞争PCR法测定mtDNA的相对含量;荧光染料R123和TMRM分别标记,流式细胞仪测定线粒体膜电位的变化;酶标分光仪测定线粒体呼吸链氧化酶NADH氧化酶反应2min内活性变化。结果:与正常细胞相比,60Coγ射线照射后,照射组细胞明显肿胀,变短,边缘不整齐,排列紊乱,数量减少;细胞活力(0.359±0.02)明显低于正常组(0.598±0.03,P<0.05);线粒体膜电位约下降为原来的50%;NADH氧化酶活性也降低,最大反应速度由48.93μmol/(mg·min)降为27.80μmol/(mg·min);以核18SrDNA为内参照,照射组mtDNA相对含量为(1.680±0.082),明显高于正常组的(1.296±0.077)。结论:γ射线照射后,WI38细胞mtDNA相对含量的增高可能是线粒体功能下降的一种代偿性反应。

关键词： WI-38细胞 γ射线 DNA,线粒体膜电位

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海螵蛸多糖CPS-1对小鼠实验性溃疡性结肠炎作用的初步观察

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 28-30页

作者：魏江洲张建鹏刘军华徐红丽冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨海螵蛸多糖相对均一组分———CPS-1对小鼠实验性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用。方法:采用DSS诱导法建立小鼠UC模型,以SMZ-TMP为对照,通过临床症状、体质量改变、局部肠黏膜(溃疡发生)改变情况等指标对高、低剂量CPS-1对UC小鼠... 详细信息

目的:探讨海螵蛸多糖相对均一组分———CPS-1对小鼠实验性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用。方法:采用DSS诱导法建立小鼠UC模型,以SMZ-TMP为对照,通过临床症状、体质量改变、局部肠黏膜(溃疡发生)改变情况等指标对高、低剂量CPS-1对UC小鼠的保护作用进行初步观察。并采用ELISA方法测定了小鼠血清中某些内皮增殖及炎症相关的细胞因子的含量变化。结果:海螵蛸多糖治疗组小鼠模型建立后的体质量没有明显降低,小鼠的一般生长情况都良好,血清中EGF和PDGF的含量较模型建立前明显增加,而TNF-α的含量与阳性对照组相比则明显降低(P<0.05)。结论:海螵蛸多糖CPS-1能够明显的提高UC小鼠血液中EGF和PDGF的含量,加速溃疡组织的愈合;同时降低TNF-α的表达,从而缓解炎症。因此,海螵蛸多糖CPS-1能够加速溃疡组织的愈合和修复过程。

关键词：海螺蛸多糖类结肠炎溃疡性小鼠

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大鼠肝再生时线粒体通透性转换的变化

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 292-294页

作者：缪明永朱克军汪振诚刘军华蒋雷王学敏焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换 (PT)的变化规律。方法 :SD大鼠肝 70 %部分切除 (PH)制作肝再生模型 ,断头取肝分离线粒体后 ,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在 5 4 0 nm处光密度值 (D540 )变... 详细信息

目的 :研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换 (PT)的变化规律。方法 :SD大鼠肝 70 %部分切除 (PH)制作肝再生模型 ,断头取肝分离线粒体后 ,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在 5 4 0 nm处光密度值 (D540 )变化来观察线粒体 PT的时相变化。结果 :与对照组比较 ,大鼠肝再生早期 (PH后 0～ 2 4 h)和后期 (PH后 1 2 0～ 1 6 8h)都表现为肝线粒体先收缩后肿胀 ,也即通透性先下降后增高 ;同时大鼠肝再生早期肝线粒体可明显抵抗钙离子的诱导作用 ,而 PH后2 4 h和 1 6 8h组的大鼠肝线粒体对钙离子的诱导非常敏感。环孢素 A(Cs A)可阻断钙的诱导作用。结论 :大鼠肝再生过程中线粒体 PT出现明显规律性改变。

关键词：大鼠肝再生线粒体通透性转换钙离子环孢素A

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一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 444-446页

作者：朱克军汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和... 详细信息

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体 DNA用 PCR进行长片段扩增 ,比较扩增效果。结果 :用改进的方法制备的线粒体 DNA中没有检测到核 DNA,并能有效扩增 8kb长的目的片段。结论 :改进后的方法简便、快捷 ,制备的线粒体 DNA纯度高 ,也有利于长片段

关键词：外周血线粒体DNA 聚合酶链反应骨骼肌

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人胰高血糖素样肽-1 cDNA的克隆与表达

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 316-318页

作者：张志珍毛积芳窦鸿杨生生第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人胰高血糖素样肽 - 1(h GL P- 1) c DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 4T- 3/ h GL P- 1c DNA,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶 - h GL P- 1(GST- h GL P- 1)融合蛋白。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 6个 h GL P- 1c DNA的寡核苷酸片... 详细信息

目的 :克隆人胰高血糖素样肽 - 1(h GL P- 1) c DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 4T- 3/ h GL P- 1c DNA,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶 - h GL P- 1(GST- h GL P- 1)融合蛋白。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 6个 h GL P- 1c DNA的寡核苷酸片段 ,拼接成完整的 h GL P- 1c DNA ,克隆至 p BS SK(+ / - )载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把 h GL P- 1c DNA定向插入融合基因表达载体 p GEX- 4T- 3的多克隆位点上 ,构建重组质粒 p GEX- 4T- 3/ h GL P- 1c DNA,并转化大肠杆菌 TG1。结果 :经限制性内切酶Bam H 、Xho 酶切和电泳 ,证明 h GL P- 1c DNA已插入到 p GEX- 4T- 3中并诱导表达出融合蛋白。结论 :成功诱导表达出融合蛋白 GST- h GL P- 1,为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组 h GL P- 1创造条件。

关键词：胰高血糖素样肽-1 克隆分子基因表达糖尿病 cDNA

来源：评论

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