检索结果-内蒙古大学图书馆

一种改良的分离小分子蛋白质的电泳方法——Tricine-SDS-PAGE

第二军医大学学报 1999年第9期20卷 696-697页

作者：蔡在龙陈世敏冯伟华周雍毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相... 详细信息

蛋白质电泳是生物化学与分子生物学中的常规技术，蛋白质电泳结果的好坏，影响到整个实验结果和资料分析。以往蛋白质电泳通常用的是ＧｌｙＳＤＳＰＡＧＥ法［１］，这种方法简便、快速、价廉，并具有相对较高的分辨率，然而对于相对分子质量为２万以下的蛋白质分离效果欠佳。我们结合文献［２，３］，通过探索，建立了一种有效分离小分子蛋白质、多肽的电泳方法，为小分子蛋白质、多肽的研究提供极大方便。１　材料和方法１．１　主要试剂和设备　Ｔｒｉｃｉｎｅ｛Ｎ［三（羟甲基）甲基］甘氨酸｝、尿素、Ｔｒｉｓ购自Ｓｉｇｍａ公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺购自Ｓａｎｇｏｎ公司；垂直平板电泳槽购自中科院生物化学研究所；电泳仪Ｐｏｗ

关键词：蛋白质小分子蛋白分离电泳

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人胃癌相关蛋白VRG107基因的扩增及组织表达初步研究

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第二军医大学学报 2003年第12期24卷 1373-1374页

作者：吴浩焦炳华娄永华史薇郭兴中第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾... 详细信息

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾、乳腺等多种组织(包括肿瘤组织)中均有不同程度的表达。在肝癌组织中表达量明显少于癌旁组织(P<0.01),而在结肠癌组织中表达也少于癌旁组织。提示VRG107基因是一个组织分布广泛的基因,在部分肿瘤组织中表达量明显减少。

关键词：人胃癌 VRG107基因基因扩增基因表达癌组织

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大鼠肝再生过程中线粒体氧化磷酸化的调控

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中国病理生理杂志 1999年第5期15卷 398-401页

作者：缪明永蔡在龙刘鹏飞王学敏毛积芳陈克明第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学东方肝胆外科医院

目的：探讨肝部分切除后肝再生过程中线粒体能量代谢的调控。方法：用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠施行肝部分切除复制肝再生模型，肝部分切除后分别观察０５、１、２、４和７ｄ５个肝再生组以及５个相应的对照组，差速离心法分离肝线粒体并... 详细信息

目的：探讨肝部分切除后肝再生过程中线粒体能量代谢的调控。方法：用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠施行肝部分切除复制肝再生模型，肝部分切除后分别观察０５、１、２、４和７ｄ５个肝再生组以及５个相应的对照组，差速离心法分离肝线粒体并用氧电极极谱法测定其氧化磷酸化活性。结果：肝部分切除后肝再生过程中线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）明显高于相应对照组，其中肝部分切除后０５ｄ和４ｄ为二个峰值，７ｄ时降至对照组水平，早期ＲＣＲ的升高主要是Ｒ３升高的所致，１ｄ后ＲＣＲ升高是Ｒ４下降所致。磷氧比值（Ｐ／Ｏ）的变化类似于ＲＣＲ。结论：肝部分切除后肝再生过程中线粒体通过氧化磷酸化偶联增强来适应肝再生的能量需求，这种增强机制很可能主要是通过降低线粒体内膜通透性实现的。

关键词：肝再生线粒体氧化磷酸化大鼠

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人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应条件的确立

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 920-921页

作者：徐晓辉王学敏谭金兴徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

热休克反应在生物界广泛存在，热休克时细胞变化的机制是当前研究的一个重要领域。本实验在热休克反应时糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）减少机制的研究中，确立了人肝癌SMMC-7721细胞的热休克反应条件。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应细胞培养肝肿瘤糖皮质激素

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PTEN cDNA重组腺病毒载体的构建

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第二军医大学学报 2004年第5期25卷 556-558页

作者：杨培丽刘玉环蔡在龙娄永华崔英杨志峰毛积芳长海医院妇产科第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN。方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同... 详细信息

目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN。方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,产生重组PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,通过脂质体介导将pAdPTEN cDNA转染至HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒AdPTEN,并测定其滴度。结果:产生具有感染能力的重组腺病毒AdPTEN,滴度约为5×109pfu／ml。结论:成功构建出含有PTEN cDNA的具有感染能力的腺病毒,并可获得较高的病毒滴度,为进一步研究PTEN基因的功能和相关肿瘤的基因治疗提供有效的基因转移载体。

关键词： PTEN cDNA 重组腺病毒载体构建抑癌基因

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核酸适配体对岩沙海葵毒素细胞毒性的拮抗作用

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海军军医大学学报 2022年第12期43卷 1391-1396页

作者：童启聆程鼎原高思懿邹彬亓茉言邓博文李振钢孙铭娟王梁华海军军医大学(第二军医大学)基础医学院学员队上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的探究核酸适配体对岩沙海葵毒素(PLTX)细胞毒性的拮抗作用。方法采用细胞毒性实验分别检测并比较PLTX对小鼠胚胎成纤维细胞株NIH-3T3、仓鼠卵巢细胞亚株CHO-K1及人永生化角质形成细胞株HaCaT的毒性作用,以及核酸适配体13-S3对PLTX... 详细信息

目的探究核酸适配体对岩沙海葵毒素(PLTX)细胞毒性的拮抗作用。方法采用细胞毒性实验分别检测并比较PLTX对小鼠胚胎成纤维细胞株NIH-3T3、仓鼠卵巢细胞亚株CHO-K1及人永生化角质形成细胞株HaCaT的毒性作用,以及核酸适配体13-S3对PLTX细胞毒性的拮抗作用(PLTX与适配体的浓度比例均为1∶1)。采用红细胞溶血实验检测PLTX对绵羊红细胞的溶血作用,以及适配体对PLTX溶血活性的抑制作用。结果细胞毒性实验结果显示,HaCaT细胞的IC50为(1.24±0.93)nmol/L,CHO-K1细胞的IC50为(3.95±0.78)×10^(-3)nmol/L,NIH-3T3细胞的IC50为(5.18±1.92)×10^(-3)nmol/L。与PLTX对照组比较,各浓度(9.3×10^(-4)、9.3×10^(-3)、9.3×10^(-2)、9.3×10^(-1)、9.3、93.3 nmol/L)PLTX+适配体13-S3组的HaCaT细胞存活率均升高(P均<0.05)。在12.5 nmol/L PLTX浓度下,与PLTX+适配体N7-T(节球藻毒素R的特异性适配体)组相比,PLTX+适配体13-S3组的溶血率下降更明显(P<0.05),表明适配体13-S3能够特异性地抑制PLTX对绵羊红细胞的溶血活性。结论 HaCaT细胞存活率对PLTX浓度变化(9.3×10^(-4)~93.3 nmol/L)具有较好的梯度响应,相应浓度的核酸适配体能够拮抗PLTX对HaCaT细胞的毒性作用。在12.5 nmol/L PLTX浓度下,相应浓度适配体能够有效抑制PLTX对绵羊红细胞的溶血活性,具有细胞保护作用。

关键词：岩沙海葵毒素适配体细胞毒性细胞保护作用

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应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

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TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 136-139页

作者：王梁华朱玉平蔡清萍娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长征医院普通外科

目的 :分析原核重组表达的人可溶性 TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,并观察凋亡作用与 FHIT基因突变的关系。方法 :观察人可溶性 TRAIL对 2 8株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用 ,RT- PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失... 详细信息

目的 :分析原核重组表达的人可溶性 TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,并观察凋亡作用与 FHIT基因突变的关系。方法 :观察人可溶性 TRAIL对 2 8株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用 ,RT- PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况。结果 :1～ 10 0 mg/ L的重组人可溶性 TRAIL蛋白即可诱导 19株细胞 (包括人肿瘤细胞株 )如 1990(胰腺导管癌 )、MCF- 7(乳腺癌 )、A 5 4 9(肺癌 )、U 2 5 1(星形胶质瘤 )、Hep G- 2 (肝细胞癌 )、M85 (胃癌 )、CNE- 2 (鼻咽癌 )、Hep- 2(喉癌 )、AT- 2 9(结肠癌 )、3AO (卵巢癌 )和 B16 - MB(黑色素瘤 ) ,髓性恶性细胞如 Jurkat、K5 6 2、U937、6 T- CEM,鼠源性 S180(肉瘤 )、Ehrlich(腹水瘤 )和 L ewis(肺癌 ) ,以及人内皮细胞株 ECV 30 4等发生凋亡 ;而其他 9株细胞 ,如 SK- N - SH(人神经母细胞瘤 )、8898(人胰腺导管癌 )、He L a(人宫颈癌 )、SMMU 772 1(人肝癌 )、HL 6 0 (人白血病 )、COS- 7(猴肾 )、人成纤维细胞、L 92 9(鼠成纤维细胞 )、Wish(人羊膜细胞 )等需大于 10 0 mg/ L的 TRAIL才能使其凋亡 ;观察到上述部分对 TRAIL敏感的人源细胞的 FHIT基因有缺失突变 ,而不敏感的人源细胞 FHIT基因完整。结论 :原核表达的人可溶性 TRAIL 具有明显诱导多种?

关键词： TRAIL 细胞凋亡 FHIT基因基因突变肿瘤细胞

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急性镉中毒大鼠睾丸氧化损伤机制的研究

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 64-66页

作者：周雍金慧英冯伟华胡惠民郑尊印木泉第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝... 详细信息

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝、睾丸两器官均发生严重的氧化损伤 ,细胞的抗氧化能力明显降低。但两者的变化规律不同 :肝脏在 6 h组 MT大量表达 (达正常值的 6 .7倍 )后 ,上述损伤逐渐减轻 ;而睾丸 MT表达的氧化损伤尽管在前 3h并不严重 ,但此后不断加剧。结论 :急性镉中毒时睾丸与肝氧化损伤规律明显不同 ,MT在睾丸中不能被诱导表达是睾丸对镉极其敏感的原因之一。

关键词：镉中毒氧化还原金属硫蛋白大鼠睾丸损伤

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FGF对关节软骨细胞基质及其TGFβ_1表达的作用

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 773-776页

作者：徐卫东侯铁胜张春才胡惠民毛积芳颜永碧第二军医大学长海医院骨科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学基础医学部电镜中心

目的：观察成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）表达的影响。方法：培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入ＦＧＦ１００ｎｇ／ｍｌ，铺满后收集细胞，作关节软骨细... 详细信息

目的：观察成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）表达的影响。方法：培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入ＦＧＦ１００ｎｇ／ｍｌ，铺满后收集细胞，作关节软骨细胞ＴＧＦβ１检测及电镜免疫组织化学观察。采用氯胺Ｔ法和Ａｎｔｏｎｏｐｏｕｌｏｓ法，作细胞基质的胶原和蛋白多糖含量测定。结果：ＦＧＦ能明显促进胶原和蛋白多糖的合成，并且与剂量、时间呈正相关（Ｐ＜０．０１）。光镜下实验组细胞明显呈棕色，电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附。结论：ＦＧＦ能促进关节软骨细胞ＴＧＦβ１的表达及基质合成，推迟了关节软骨细胞的成熟，维持细胞的软骨表现型，这些作用有利于关节软骨损伤后的修复，可能具有一定的临床意义。

关键词：关节软骨细胞细胞基质 TGFβ1 FGF

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