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华东理工大学学报（自然科学版） 2005年第5期31卷 598-601,634页

作者：范秋领黄才国金艳缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

以400 m g/kg 2次腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1 h以80 m g/kg 2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸(A... 详细信息

以400 m g/kg 2次腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1 h以80 m g/kg 2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸(ADP)诱导的氧消耗、呼吸控制率(RCR)、磷/氧比(P/O)、氧化磷酸化率均低于对照组,而预防组线粒体ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率、P/O和氧化磷酸化效率均高于模型组;TAA降低了线粒体中谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶的水平,而鲨鱼肝蛋白粗提物则使线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的水平明显升高,说明鲨鱼肝蛋白粗提物能部分修复线粒体受损的呼吸功能,增强线粒体抗氧化能力。

关键词：鲨鱼肝蛋白粗提物硫代乙酰胺急性肝损伤线粒体呼吸功能抗氧化

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高密度发酵制备重组人可溶性TRAIL

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 132-135页

作者：王梁华朱玉平娄永华周劲松彭玉珍球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海恰尔生物技术有限公司

目的 :利用原核重组表达技术 ,完成人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL ,又称凋亡素 2配体 ,Apo- 2 L )的中试。方法 :可溶性 TRAIL编码基因插入改建的 p BV 2 2 0载体 ;在发酵过程中 ,控制溶解氧在 30 %～ 5 0 % ,30℃生长 6... 详细信息

目的 :利用原核重组表达技术 ,完成人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL ,又称凋亡素 2配体 ,Apo- 2 L )的中试。方法 :可溶性 TRAIL编码基因插入改建的 p BV 2 2 0载体 ;在发酵过程中 ,控制溶解氧在 30 %～ 5 0 % ,30℃生长 6 h,4 2℃诱导培养 4 h;菌体上清行金属亲和层析。结果 :发酵液中最终菌体密度 D(6 0 0 )达 8.0 (相当于每升发酵液含 15 g湿菌体 ) ,TRAIL占菌体总蛋白的 4 0 %左右 ,含量超过 0 .6 g/ L。其中 ,所表达的 TRAIL 2 0 %～ 30 %在上清而直接有活性 ,70 %～ 80 %呈包涵体。上清用亲和层析一步使其纯度达 70 %以上 ;包涵体超声破菌后经两次洗涤 ,纯度达到 80 %以上。　结论 :TRAIL

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组蛋白质发酵分批补料重组人可溶性TRAIL

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晕船适应与不适应大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的比较与鉴定

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第二军医大学学报 2006年第4期27卷 382-385页

作者：苏波张建鹏冯伟华杜鹏任绪义郭俊生第二军医大学海军医学系军队卫生学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立晕船适应及不适应大鼠脑干总蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨晕船适应的可能机制。方法:30只大鼠根据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减分为不晕组(n=10)、晕船适应组(n=12)和不适应组(n=8),另设未接受模拟晕船刺... 详细信息

目的:建立晕船适应及不适应大鼠脑干总蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨晕船适应的可能机制。方法:30只大鼠根据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减分为不晕组(n=10)、晕船适应组(n=12)和不适应组(n=8),另设未接受模拟晕船刺激的正常大鼠作为空白对照组(n=10)。应用双向电泳技术,分离晕船适应组和不适应组大鼠脑干蛋白(n=6),肽指纹图谱鉴定两组间差异表达蛋白质。结果:模拟晕船刺激21 d后,与空白对照组相比,晕船适应组大鼠异嗜高岭土量经历了一个由少到多又逐渐回落的过程,不适应组大鼠异嗜高岭土量则始终维持在一个较高的水平(P<0.01或P<0.05)。获得了9个晕船适应相关蛋白质:硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅰ、硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ、低分子量神经丝蛋白、泛素羧基末端水解酶PGP9.5和谷氨酰胺合成酶上调;碳酸酐酶Ⅱ、磷酸丙糖异构酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B和线粒体电压依赖型阴离子通道下调。结论:大鼠对晕船适应后可诱导脑干蛋白质组表达的改变,主要与能量代谢、神经递质调节和氧化应激有关。

关键词：晕动病脑干蛋白质组双向电泳

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周围神经损伤再生后肌肉nAChRε亚单位基因表达的变化

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 13-16页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学长征医院整形外科上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法... 详细信息

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性。同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。结果:用该方法检测nAChRε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6 个数量级,最低检测下限为1×102 拷贝,最高检测上限为1×107 拷贝。大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3 周降到最低后又逐渐增高,但到术后30 周仍处于低水平(P<0.01)。结论:采用Taq Man实时荧光定量RT PCR检测nAChRε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点。神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体ε亚单位荧光定量逆转录聚合酶链反应周围神经损伤基因表达和调控

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hVEGF_(165)和嵌合水蛭肽融合基因的真核表达载体的构建及其表达

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 983-987页

作者：陈少萍沈雳秦永文蔡在龙第二军医大学长海医院心内科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVE... 详细信息

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0。对重组质粒进行酶切鉴定和测序分析,将正确克隆的质粒分别作体外快速转录翻译鉴定,以及经脂质体介导转染人内皮细胞株,并对表达产物进行鉴定。结果:hVEGF165和FH成功融合,形成711 bp的目的片段,并成功构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0,重组质粒转染人内皮细胞株有hVEGF165-FH表达。结论:重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0在人内皮细胞株中得到表达,为其融合蛋白活性研究及基因治疗打下良好基础。

关键词： hVEGF165 水蛭肽基因融合基因表达载体

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肌肉游离移植后烟碱型乙酰胆碱受体ε和γ亚单位表达的变化及意义

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中华显微外科杂志 2005年第2期28卷 156-158页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金上海市第二军医大学附属长征医院整形外科 200003 上海市第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧... 详细信息

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧光定量RT-PCR的方法分别检测肌肉移植术后不同时间肌肉样本内ε和γ亚单位mRNA的表达。结果肌肉移植后ε和γ亚单位mRNA表达的拷贝数均是先增高后减少。ε亚单位mRNA表达的拷贝数存术后第3周降到最低后又逐渐增高,但到术后晚期仍低于对照组的水平,差异有统计学意义(P<0.05),而γ亚单位mRNA的拷贝数自术后第2周后开始减少,到术后30周时未完全消失,仍保持低水平的表达。结论终板区亚单位基因的表达变化可能与肌肉游离移植后nAChR的数量减少及功能降低有关系。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体移植后亚单位表达游离 Wistar大鼠 mRNA表达 nAChR 神经肌肉接头亚单位基因拷贝数变化情况基因表达基因水平基因变化功能减退不同时间移植术后荧光定量完全消失表达变化股薄肌 PCR 对照组

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红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1116-1119页

作者：郭美丽姜伟张志珍张戈毛积芳殷明苏中武第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学药学院药理学教研室

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西... 详细信息

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析。结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型。RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大。结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据。

关键词：红花种质随机扩增多态性 DNA 分子鉴定

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东海洋山港沿岸土壤、海水样本中Ⅰ型PKS基因的初步筛选鉴定与功能分析

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微生物学通报 2008年第9期35卷 1359-1366页

作者：董晓毅王梁华孙铭娟宗英焦豫良焦炳华中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复... 详细信息

为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复序列后,共获得了23条不同的KS片段(长度为630bp^690bp),提交GenBank皆获登录号,其中19条来自土壤(DQ640993、DQ640997、DQ641926、DQ641927、DQ673137~DQ673151),4条来自海水(DQ673151,EF554859~EF554861),由核苷酸序列推断出的氨基酸序列保守,与GenBank中已知KS基因片段的相似度在45%到85%之间,种系发生分析表明,其中14条KS片段(来源于海水的KS片段皆在其中)应来源于典型的KS群,而剩余9条则来源于杂合的PKS/NRPS(Non-ribosomal peptide synthetase,非核糖体多肽合成酶)群。另外,几条KS基因特征明显,可用于进一步的研究。

关键词：未获得培养微生物聚酮合酶酮缩合酶土壤海水

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刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响

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第二军医大学学报 2006年第9期27卷 969-972页

作者：薛春雨邢新李蠡张敬德蒋平龚志锦第二军医大学长海医院整形外科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院病理科

目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组)。利用RT-PCR方法检测刺鼠信... 详细信息

目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组)。利用RT-PCR方法检测刺鼠信号蛋白作用后自体移植皮片(n=12)黑素细胞中酪氨酸酶mRNA的表达,银染-丽春红染色后检测皮片中黑色素的含量,并与对照组(n=13)及正常豚鼠皮肤(n=5)相比较。结果:经刺鼠信号蛋白作用后,皮片中酪氨酸酶mRNA表达和黑素含量均明显减少,与对照组皮片和正常豚鼠皮肤相比其差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:刺鼠信号蛋白在自体移植皮片中,能竞争性拮抗α-黑素细胞刺激素的黑素合成作用,使皮片着色能力降低。进一步证明了皮片移植后表皮细胞中α-黑素细胞刺激素的表达上调是皮片呈过度色素沉着的重要原因。

关键词：刺鼠信号蛋白 α-黑素细胞刺激素酪氨酸酶皮肤移植色素沉着过多

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人血管内皮生长因子裸质粒DNA心肌注射促进缺血心肌侧支循环形成的研究

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临床心血管病杂志 2001年第8期17卷 367-368,372页

作者：陈少萍顾洪边长勇秦永文张国元第二军医大学长海医院心内科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学长征医院心内科

目的 :观察人血管内皮生长因子 (h VEGF)裸质粒 DNA直接心肌注射对大鼠急性心肌缺血后侧支循环形成的影响。方法 :建立大鼠左冠状动脉结扎的急性心肌缺血模型 ,取缺血边缘区以先期构建的真核表达质粒 pc DNA3/ h VEGF1 6 5和真核载体 pc... 详细信息

目的 :观察人血管内皮生长因子 (h VEGF)裸质粒 DNA直接心肌注射对大鼠急性心肌缺血后侧支循环形成的影响。方法 :建立大鼠左冠状动脉结扎的急性心肌缺血模型 ,取缺血边缘区以先期构建的真核表达质粒 pc DNA3/ h VEGF1 6 5和真核载体 pc DNA3的 DNA分别多点心肌注射。给药后 4周先行大鼠冠状动脉造影 ,再取材分别行苏木精 -伊红染色、平滑肌肌动蛋白 (SMA)染色和 Northern Blot分析。结果 :给药后 4周冠状动脉造影示治疗组左室造影剂聚集较对照组明显增加 ;SMA染色示治疗组新生血管数目明显多于对照组 ;Northern Blot分析显示治疗组 VEGF m RNA表达较对照组明显增强。结论 :pc DNA3/ h V EGF1 6 5裸质粒 DNA心肌注射能转染心肌细胞并持续表达至少 4周。

关键词：心肌缺血血管内皮生长因子基因治疗侧支循环 DNA hVEGF 裸质粒

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