检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1081-1085页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融... 详细信息

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力。作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成。结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白。通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍。经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR)。反应的亲和常数(Km)为16.67μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17s-1。结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化。

关键词：线粒体亮氨酰tRNA合成酶基因表达动力学纯化酶促动力学参数

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小胶质细胞蛋白质组三维分离方法的建立

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第二军医大学学报 2005年第6期26卷 687-689页

作者：蒋平彭艳倪健向正华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海富纯中南生物技术有限公司上海201203

目的:建立基于二维液相色谱法的三维分离小胶质细胞蛋白质组的方法。方法:将小胶质细胞裂解后制备全细胞蛋白,在传统的一维HPCF、二维HPRP分离后,增加了三维SDSPAGE电泳,对小胶质细胞实现了三维分离。结果:经过优化后的三维分离,小胶质... 详细信息

目的:建立基于二维液相色谱法的三维分离小胶质细胞蛋白质组的方法。方法:将小胶质细胞裂解后制备全细胞蛋白,在传统的一维HPCF、二维HPRP分离后,增加了三维SDSPAGE电泳,对小胶质细胞实现了三维分离。结果:经过优化后的三维分离,小胶质细胞全蛋白按照pH值由高到低的顺序分为34个组分,其中pH8.5～4.0的部分包含16个组分,每一个组分又包含若干种蛋白质。结论:同传统的二维液相色谱分离方法相比,改进后的三维分离方法对小胶质细胞全蛋白具有更彻底、更好的分离效果,为后续的质谱鉴定提供了分离度更好的样品。

关键词：小胶质细胞分离方法蛋白质组三维 SDS-PAGE电泳液相色谱法细胞蛋白分离效果质谱鉴定二维组分 pH值改进后分离度传统

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CD11b-BFP融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 188-191页

作者：严鸣毛积芳钟纪根何建朱秋峰娄淑杰徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院急救科长征医院麻醉科基础医学部神经生物学教研室

目的 :构建并表达巨噬细胞分化抗原 1(Mac- 1)的 α链 CD11b与蓝色荧光蛋白 (BFP)的融合蛋白 CD11b- BFP,为进一步直视研究 Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将 CD11b的全长 c DNA进行酶切并获得 2个片段 ,... 详细信息

目的 :构建并表达巨噬细胞分化抗原 1(Mac- 1)的 α链 CD11b与蓝色荧光蛋白 (BFP)的融合蛋白 CD11b- BFP,为进一步直视研究 Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将 CD11b的全长 c DNA进行酶切并获得 2个片段 ,将其中含有终止密码的片段作为模板 ,通过设计引物进行 PCR,获得不含有终止密码的该片段 ,然后与另一片段进行连接 ,形成不含有终止密码的 Mac- 1全长 c DNA,将其插入到表达载体 p EBFP- N1中 ,构建完成 CD11b- BFP融合基因 ,最后将其转染至 U937细胞株中 ,通过荧光显微镜观察与流式细胞术检测 Mac- 1的表达及其黏附活性来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,p CD11b- BFP构建完全正确 ,转染 U937细胞株后 ,可见 CD11b- BFP融合蛋白发出的蓝色荧光。结论 :构建完成 CD11b-BFP融合基因并在

关键词：巨噬细胞分化抗原1 蓝色荧光蛋白融合蛋白

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肝再生早期线粒体差异表达蛋白质组分析

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解放军医学杂志 2010年第11期35卷 1341-1344页

作者：孙青菊梁冰缪明永郭巍焦炳华山东青岛解放军401医院检验科 266071 上海第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 200433

目的探讨线粒体在肝再生早期的作用,寻找肝再生早期的标志蛋白。方法 30只SD大鼠随机均分为70%肝部分切除组(PH组)和假手术组(SH组),每组再分为3个小组,每组5只,手术24h后处死大鼠,取相同部位的肝组织进行检测。PH组和SH组配对,独立重... 详细信息

目的探讨线粒体在肝再生早期的作用,寻找肝再生早期的标志蛋白。方法 30只SD大鼠随机均分为70%肝部分切除组(PH组)和假手术组(SH组),每组再分为3个小组,每组5只,手术24h后处死大鼠,取相同部位的肝组织进行检测。PH组和SH组配对,独立重复实验3次;Nycodenz密度梯度离心分离线粒体,二维电泳(2-DE)分离线粒体蛋白质,采用PDQuest 7.4软件分析2-DE图谱;MALDI-TOF MS技术鉴定差异表达蛋白,采用Mascot方法进行数据检索,对部分差异蛋白进行Western blotting验证。结果共筛选出25个差异表达蛋白点(P<0.05);与SH组比较,PH组中有3个蛋白点上调,22个蛋白点下调。质谱技术成功鉴定出其中22个差异蛋白。生物信息学分析显示这些差异蛋白参与了多条代谢途径,如糖代谢、脂代谢、呼吸链和氧化磷酸化、生物转化以及信号转导等。结论肝再生早期,线粒体通过多条代谢途径对其进行调节;亚细胞蛋白质组学技术有利于寻找肝再生相关的标志蛋白,为肝再生的深入研究提供新的方向和思路。

关键词：蛋白质组学肝切除术肝再生线粒体肝

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SMO保存液对犬肾低温保存期间皮质细胞凋亡的影响

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1059-1062页

作者：牛强朱有华于常虎罗明缪明永第二军医大学长征医院全军器官移植研究所上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的：探讨自制上海多器官保存液（Shanghai multi-organ preservation solution,SMO液）对低温保存期间犬肾皮质细胞凋亡的影响,以探讨SMO液的作用机制.方法：犬肾分别以0～4℃的SMO液、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液（HC-A）或UW液（Universit... 详细信息

目的：探讨自制上海多器官保存液（Shanghai multi-organ preservation solution,SMO液）对低温保存期间犬肾皮质细胞凋亡的影响,以探讨SMO液的作用机制.方法：犬肾分别以0～4℃的SMO液、高渗枸橼酸盐腺嘌呤液（HC-A）或UW液（University of Wisconsin solution）灌洗保存,在低温保存各时间点取肾皮质标本作形态学观察;采用TUNEL法检测皮质细胞凋亡发生情况;以硫代巴比妥酸法测定各保存液组肾皮质丙二醛（MDA）含量的改变,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性变化.结果：低温保存第1天光镜观察细胞水肿、胞质空泡化、肾小管坏死等改变,三组相似,但保存2 d后SMO组和UW组形态学改变明显轻于HC-A组.随低温保存时间延长,各保存液组肾皮质细胞凋亡的发生增加,而SMO组凋亡指数显著低于同时点HC-A液组（P＜0.05）.随着低温保存时间延长,各保存液组肾皮质MDA含量增加,保存1～3 d SMO液组MDA含量显著低于HC-A液组（P＜0.05）;低温保存中SMO液组、HC-A液组、UW液组肾皮质SOD酶活性无明显差异.结论：SMO液可以提高肾皮质保存效果,可能与其减少低温保存期间肾皮质细胞凋亡和抑制脂质过氧化损伤有关.

关键词：器官保存反应性氧族低温细胞凋亡

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不同条件下人乳白蛋白YAC的高效定点打靶修饰

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第二军医大学学报 2004年第6期25卷 633-637页

作者：张绪峰吴国祥朱克军焦炳华成国祥第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海转基因研究中心上海201203 上海转基因研究中心

目的?对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到 his3缺陷的YPH925菌株... 详细信息

目的?对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到 his3缺陷的YPH925菌株。分别以HIS3(对YPH925菌株)和G418R(对YPH925和AB1380两种菌株)为选择标记,用含 HLA-YAC的酵母基因组为模板,PCR克隆人乳白蛋白(HLA)基因的5′和3′端非翻译区各684bp和940bp为同源臂,构建打靶载体,线性化的打靶载体经电转化或醋酸锂转化转入酵母内,以菌落PCR为鉴定方法,辅以测序验证。结果:HLA-YA 在目的位置完成了定点打靶修饰,G418R的筛选效率高于HIS3,醋酸锂转化方法的打靶效率稍高于电转化。结论:对YA 的成功修饰为在动物体内的表达及调控研究打下了基础。

关键词：人乳白蛋白 YAC 高效定点打靶修饰酵母人工染色体酵母人工染色庠转移

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应用加速器质谱技术检测体外细胞中^(14)C标记的苯并芘-DNA加合物

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 454-455页

作者：游冬青陈杞潘真韩玲蔡建明邹鲁峰孙红芳王海芳刘元方第二军医大学海军医学系放射医学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室北京大学技术物理系

DNA加合物是亲电化合物与DNA形成共价相联的结合物。在机体中被加合物修饰的DNA若无法修复和被错误修复，就有可能导致一系列细胞生物学行为的改变，并最终导致体细胞突变或恶性变。

关键词：加速器质谱仪 DNA加合物苯并花化学致癌机制体外细胞 ^14C标记

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葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶表达的调控作用(英文)

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中西医结合学报 2008年第10期6卷 1017-1023页

作者：李燕巍蔡在龙沈慰杨生生俞超芹第二军医大学长海医院中医科上海200433 第二军医大学长海医院实验中心上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-time poly... 详细信息

目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测药物对RL95-2细胞P450arom mRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2(PⅡ)转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载体pGL3-Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL95-2细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RT-PCR及Western blotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果:与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450arom mRNA表达(P<0.01),抑制作用在6、12 h较显著(P<0.01)。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒(-1 017,-763,-543,-234^+8 bp)。瞬时转染系列质粒至细胞中,于12 h后加入葛根素(10-7mol/L)刺激,又12 h后检测荧光蛋白水平。结果表明,-763^-543 bp间的活性被抑制(P<0.05),通过转录因子分析找到了-410/-401 bp的AP-1(c-jun/c-fos)。利用RT-PCR、Western blotting及荧光素酶活性检测发现葛根素(10-7mol/L)对AP-1(c-jun/c-fos)的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论:低浓度葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP-1(c-jun/c-fos)的影响。

关键词：葛根素芳香化酶P450 子宫内膜异位症

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海螵蛸多糖的提取分离及活性组分CPS-1的纯化

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 17-21页

作者：魏江洲张建鹏刘军华王顺春冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海中医药大学中药研究所上海201203

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质。对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖。方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法。对粗品组分进... 详细信息

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质。对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖。方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法。对粗品组分进行总糖量测定。用DEAE-Sepharose F.F柱及Sepharose CL-6B柱对海螵蛸多糖粗品进行分离。通过活性检测实验确定活性部分。最后使用Sephacryl S-300柱进一步纯化。用HPLC来检测精品多糖的纯度。标准曲线法测定相对分子质量。结果:成功得到海螵蛸粗多糖。经过离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B柱及分子筛Sephacr-yl S-300柱的进一步分离纯化和活性跟踪,最后得到相对均一的活性精品多糖CPS-1,其含糖量达93.6%,相对分子质量为1×106。结论:不同的提取条件影响海螵蛸多糖的得率。不同性质的分离材料能够将相对分子质量及电荷有差异的多糖分离,达到分离的目的。精品多糖CPS-1是从海洋中草药海螵蛸中得到的均一多糖组分。

关键词：海螵蛸多糖类分离提纯 CPS-1

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血管内皮生长因子基因治疗兔下肢缺血的实验研究

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第二军医大学学报 2000年第5期21卷 447-449页

作者：顾洪陈少萍张电波王官将毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院心血管内科长征医院放射科

目的 :了解血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗兔下肢缺血模型后新生血管和侧支循环形成状况。方法 :构建h VEGF1 6 5 的真核表达载体 ,通过直接肌肉注射将 h VEGF1 6 5 基因转染缺血部位肌细胞 ,经颈总动脉插管行下肢血管造影。结果 :V... 详细信息

目的 :了解血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗兔下肢缺血模型后新生血管和侧支循环形成状况。方法 :构建h VEGF1 6 5 的真核表达载体 ,通过直接肌肉注射将 h VEGF1 6 5 基因转染缺血部位肌细胞 ,经颈总动脉插管行下肢血管造影。结果 :VEGF治疗组在质粒转染后 2和 4周动脉血管造影显示 ,新生血管数目和侧枝血管形成较对照组明显增加。结论 :肌细胞能够吸收裸露的 VEGF c DNA质粒并获得局部高效表达。

关键词：侧支循环血管内皮生长因子基因治疗下肢缺血

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