检索结果-内蒙古大学图书馆

^(60)Co照射后SMMC7721细胞线粒体DNA部分非编码区断裂敏感位点初探

第二军医大学学报 2005年第6期26卷 615-617页

作者：王洁王学敏龙建纲汪振诚高建国第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系辐照中心上海200433

目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PC... 详细信息

目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PCR产物电泳结果显示,接受不同剂量γ射线照射后,各剂量都有相同大小的片段。通过基因扫描的方法,发现不同照射剂量下的断裂位点位置是相同的。结果说明这些断裂敏感位点不是随机分布的。并且,位点的损伤频率也是随着剂量的增加而呈现递增趋势,随着剂量的增加还出现了新的断裂位点。结论:SMMC7721细胞线粒体DNA非编码区确实存在对γ射线敏感的位点。

关键词： DNA 线粒体断裂敏感点 γ射线肝肿瘤

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晕船易感大鼠与不晕大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的鉴定与分析

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 411-414页

作者：杜鹏张建鹏苏波任绪义郭俊生第二军医大学海军医学系军队卫生学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质。方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(tw... 详细信息

目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质。方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(two dimensional electrophoresis,2 DE)技术,分离2 组大鼠脑干总蛋白,分析并用肽指纹图谱(peptide massfingerprint,PMF)鉴定差异蛋白质。结果:鉴定5个晕船易感相关蛋白质,上调酪氨酸3 单加氧酶/色氨酸5 单加氧酶激活蛋白、铁效应元件结合蛋白1,下调硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B、线粒体电压依赖型阴离子通道1。结论:成功建立分辨率和重复性高的晕船易感和不晕组大鼠2 DE图谱,研究表明差异蛋白质与神经递质合成、氧化损伤、能量代谢、细胞凋亡及铁代谢有关。

关键词：晕船蛋白质组双向电泳肽指纹图谱

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hVEGF_(165)和嵌合水蛭肽融合基因的真核表达载体的构建及其表达

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 983-987页

作者：陈少萍沈雳秦永文蔡在龙第二军医大学长海医院心内科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVE... 详细信息

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0。对重组质粒进行酶切鉴定和测序分析,将正确克隆的质粒分别作体外快速转录翻译鉴定,以及经脂质体介导转染人内皮细胞株,并对表达产物进行鉴定。结果:hVEGF165和FH成功融合,形成711 bp的目的片段,并成功构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0,重组质粒转染人内皮细胞株有hVEGF165-FH表达。结论:重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0在人内皮细胞株中得到表达,为其融合蛋白活性研究及基因治疗打下良好基础。

关键词： hVEGF165 水蛭肽基因融合基因表达载体

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聚集蛋白基因在原代培养成肌细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2005年第12期22卷 1562-1564页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学附属长征医院整形外科上海200003 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达。方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin—Y428基因cDNA片段亚克隆入 pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得... 详细信息

目的研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达。方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin—Y428基因cDNA片段亚克隆入 pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得具有抗性的克隆,增殖后以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光的方法检测基因的转录和蛋白表达,并初步测定其生物学活性。结果原代培养8周后,90％以上仍为成肌细胞,转染神经源性agrin基因后,成肌细胞可以表达相应的mRNA和有功能活性的蛋白。结论原代培养的成肌细胞可以作为agrin 基因转移的有效载体,可用于进一步肌肉功能减退的基因治疗中。

关键词：基因表达成肌细胞原代培养聚集蛋白基因

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周围神经损伤再生后肌肉nAChRε亚单位基因表达的变化

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 13-16页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学长征医院整形外科上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法... 详细信息

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性。同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。结果:用该方法检测nAChRε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6 个数量级,最低检测下限为1×102 拷贝,最高检测上限为1×107 拷贝。大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3 周降到最低后又逐渐增高,但到术后30 周仍处于低水平(P<0.01)。结论:采用Taq Man实时荧光定量RT PCR检测nAChRε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点。神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体ε亚单位荧光定量逆转录聚合酶链反应周围神经损伤基因表达和调控

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小胶质细胞蛋白质组三维分离方法的建立

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第二军医大学学报 2005年第6期26卷 687-689页

作者：蒋平彭艳倪健向正华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海富纯中南生物技术有限公司上海201203

目的:建立基于二维液相色谱法的三维分离小胶质细胞蛋白质组的方法。方法:将小胶质细胞裂解后制备全细胞蛋白,在传统的一维HPCF、二维HPRP分离后,增加了三维SDSPAGE电泳,对小胶质细胞实现了三维分离。结果:经过优化后的三维分离,小胶质... 详细信息

目的:建立基于二维液相色谱法的三维分离小胶质细胞蛋白质组的方法。方法:将小胶质细胞裂解后制备全细胞蛋白,在传统的一维HPCF、二维HPRP分离后,增加了三维SDSPAGE电泳,对小胶质细胞实现了三维分离。结果:经过优化后的三维分离,小胶质细胞全蛋白按照pH值由高到低的顺序分为34个组分,其中pH8.5～4.0的部分包含16个组分,每一个组分又包含若干种蛋白质。结论:同传统的二维液相色谱分离方法相比,改进后的三维分离方法对小胶质细胞全蛋白具有更彻底、更好的分离效果,为后续的质谱鉴定提供了分离度更好的样品。

关键词：小胶质细胞分离方法蛋白质组三维 SDS-PAGE电泳液相色谱法细胞蛋白分离效果质谱鉴定二维组分 pH值改进后分离度传统

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肌肉游离移植后烟碱型乙酰胆碱受体ε和γ亚单位表达的变化及意义

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中华显微外科杂志 2005年第2期28卷 156-158页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金上海市第二军医大学附属长征医院整形外科 200003 上海市第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧... 详细信息

目的在基因水平上定量的观察肌肉游离移植后冲经肌肉接头烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)ε和γ亚单位基因表达的动态变化情况,探讨移植后肌肉功能减退与nAChRγ和ε亚单位基因变化之间的可能关系。方法以正常Wistar大鼠股薄肌为对照,利用荧光定量RT-PCR的方法分别检测肌肉移植术后不同时间肌肉样本内ε和γ亚单位mRNA的表达。结果肌肉移植后ε和γ亚单位mRNA表达的拷贝数均是先增高后减少。ε亚单位mRNA表达的拷贝数存术后第3周降到最低后又逐渐增高,但到术后晚期仍低于对照组的水平,差异有统计学意义(P<0.05),而γ亚单位mRNA的拷贝数自术后第2周后开始减少,到术后30周时未完全消失,仍保持低水平的表达。结论终板区亚单位基因的表达变化可能与肌肉游离移植后nAChR的数量减少及功能降低有关系。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体移植后亚单位表达游离 Wistar大鼠 mRNA表达 nAChR 神经肌肉接头亚单位基因拷贝数变化情况基因表达基因水平基因变化功能减退不同时间移植术后荧光定量完全消失表达变化股薄肌 PCR 对照组

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体内研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1002-1005页

作者：刘玉环崔英杨培丽蔡在龙俞超琴王锡智惠宁古航石书芳第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用La... 详细信息

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用LacZ 作为报告基因,X-gal染色检测Ad-PTEN 体内转染效率.皮下荷人子宫内膜癌BALB/c裸鼠15只,随机分为对照组、Ad-CMV组及Ad-PTEN治疗组,每组5只,每只裸鼠皮下有2个移植瘤.待皮下移植瘤长至4～5 mm时,治疗组Ad-PTEN肿瘤内注射,每个移植瘤5×108 pfu/100 μl,隔日1次,共3次,观察裸鼠肿瘤体积的变化及有无不良反应,最后1次治疗后15 d处死裸鼠,取肿瘤组织及治疗组裸鼠肝脏病理检查.结果:Ad-PTEN体外转染子宫内膜癌RL 95-2细胞,子宫内膜癌细胞致瘤能力完全抑制,裸鼠成瘤率为0;而空载体转染组和PBS对照组裸鼠成瘤率均为100%.重组腺病毒在裸鼠体内具有较高的转染效率,Ad-CMV-LacZ肿瘤内注射后96 h,转染效率可达到80%. Ad-PTEN肿瘤内注射可使裸鼠皮下移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.05),Ad-PTEN基因治疗未发现明显不良反应. 结论:PTEN基因治疗有可能成为子宫内膜癌非手术治疗的一个新方法,具有潜在的应用价值.

关键词：子宫内膜癌 PTEN 基因治疗裸鼠体内研究

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黄素单核苷酸对羟自由基损伤的大鼠肝线粒体复合物Ⅰ的保护作用

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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1136-1139页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察黄素单核苷酸(FMN)对羟自由基(OH·)损伤线粒体酶复合物1(complexⅠ)的作用,分析FMN与complexⅠ的相互作用机制。方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体co... 详细信息

目的:观察黄素单核苷酸(FMN)对羟自由基(OH·)损伤线粒体酶复合物1(complexⅠ)的作用,分析FMN与complexⅠ的相互作用机制。方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体complexⅠ动力学参数及线粒体内MDA、GSH含量及SOD活性。结果:OH·损伤后,线粒体3态、4态(state3,state4)耗氧速率、complexⅠ最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但呼吸控制率(respiratorycontrolratio,RCR)、磷氧比(P/O)及complexⅠ米氏常数(Km)不变,线粒体中GSH含量下降(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),MDA含量升高。损伤线粒体补充FMN165ng/ml可部分恢复complexⅠ呼吸途径state3耗氧速率(P<0.05),补充FMN82.5～165ng/mg可显著提高OH·损伤的线粒体复合物Ⅰ的Vm(P<0.05)。损伤线粒体补充较低剂量的FMN(FMN<82.5ngFMN/ml),线粒体中GSH、SOD、MDA含量不发生变化,在补充较高剂量FMN(>165ngFMN/ml)时,SOD活性升高(P<0.05),但线粒体MDA含量升高(P<0.05)、GSH含量下降(P<0.05)。结论:FMN能够提高氧化损伤线粒体复合物Ⅰ活性,促进complexⅠ呼吸途径的state3耗氧速率。FMN不能直接清除OH·及自由基,可能通过保护complexⅠ中的酶结合/活性位点免受OH·等自由基攻击从而维持酶活性。

关键词：黄素单核苷酸羟自由基肝线粒体酶复合物Ⅰ

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丙二醛对大鼠肝线粒体呼吸功能及相关脱氢酶活性影响

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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1131-1135页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘昌盛刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮... 详细信息

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05)。丙酮酸脱氢酶及α酮戊二酸脱氢酶分别在50μmol/L和100μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0～3.2mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响。结论:MDA对线粒体呼吸链及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ。

关键词：丙二醛肝线粒体脱氢酶

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