检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2004年第10期31卷 887-894页

作者：汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入... 详细信息

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入细胞后 ,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似 ,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化 .由于线粒体的正常功能为修复机制所必需 ,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力 ,发现 9mmol/L四氧嘧啶培养细胞 1h后 ,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后 0 ,2 ,8和 2 4h时间点均无明显变化 .提取各组细胞的mtDNA ,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸 ,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA ,进行DNA印迹实验 ,地高辛抗体碱性磷酸酶系统显色 ,检测完整与断裂的mtDNA量 ,利用Poisson公式 (s=-lnP0 /P ,P0 为未断裂链光密度值 ,P为所有链光密度值总和 )计算一个mtDNA分子的平均损伤频率 ,结果显示 ,9mmol/L四氧嘧啶处理细胞 1h ,链平均损伤频率由对照的 0 11个 /分子增加至 5 6 0个 /分子 ,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤 ,除去药物后 8h ,绝大部分损伤可被修复 ,损伤频率减至

关键词：线粒体DNA tRNA^Leu(UUR) 突变人线粒体亮氨酰tRNA合成酶 A3243G 体外转录基因表达

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镉暴露大鼠睾丸支持细胞金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 965-968页

作者：任绪义周雍张建鹏仲燕冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸... 详细信息

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸支持细胞和肝脏组织的分离 .采用RT PCR技术分析mRNA ,并用光密度扫描作半定量分析 ,蛋白质定量用ELISA方法 ,原子分光光度吸收法测定镉浓度 .结果显示 :镉暴露 1h后肝脏MTmRNA即有明显的诱导表达 ,3h达高峰 ;支持细胞也有明显的诱导表达 ,6h达高峰 .镉暴露后肝脏MT有明显的诱导表达 ,但睾丸支持细胞不但未见MT增加而且还稍有下降 .提示 :a 镉对MTmRNA的诱导表达具有时间依赖性和组织特异性 .b 镉虽然能诱导睾丸MT的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸组织镉损伤

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镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 811-815页

作者：任绪义周雍张建鹏冯伟华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2m... 详细信息

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2mRNA明显升高 ,但MT没有相应增加 ;肝脏镉中毒后MTmRNA与MT均明显升高 .结果提示 :镉虽然能诱导睾丸MTmRNA的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：镉中毒大鼠睾丸肝脏金属硫蛋白表达时相研究

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Northern印迹法的改进

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第二军医大学学报 1999年第3期20卷 195-196页

作者：郭兴中第二军医大学基础医学部生物化学教研室

Ａｌｗｉｎｅ发明的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法被广泛用于检测ｍＲＮＡ的大小和丰度，但由于其降解酶ＲＮａｓｅ广泛存在，且理化性质稳定，故在实际操作中，尤其是从组织中提取总ＲＮＡ进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹，对那些设备不是很完善的... 详细信息

Ａｌｗｉｎｅ发明的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法被广泛用于检测ｍＲＮＡ的大小和丰度，但由于其降解酶ＲＮａｓｅ广泛存在，且理化性质稳定，故在实际操作中，尤其是从组织中提取总ＲＮＡ进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹，对那些设备不是很完善的实验室来说，得到一个比较理想的杂交...

关键词：核糖核酸 RNA 印迹法 Northern

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重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 287-289页

作者：王官将毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰第二军医大学基础医学部生物化学教研室

重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化王官将毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰人降钙素（Ｈｕｍａｎｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ，ｈＣＴ）是甲状腺滤泡旁细胞分泌的多肽激素，在体内参与钙、磷代谢的调节。临床上降钙素用于治疗各种疾病，如高血钙症、... 详细信息

重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化王官将毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰人降钙素（Ｈｕｍａｎｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ，ｈＣＴ）是甲状腺滤泡旁细胞分泌的多肽激素，在体内参与钙、磷代谢的调节。临床上降钙素用于治疗各种疾病，如高血钙症、骨质疏松症和骨瘤病等，具有副作用小...

关键词：重组人降钙素大肠杆菌基因表达纯化

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大鼠烫伤早期肝线粒体ATP合成酶和腺苷酸激酶活性的改变

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第二军医大学学报 1996年第2期17卷 163-165页

作者：杨林缪明永王学敏第二军医大学基础医学部生物化学教研室

为进一步了解大鼠烫伤早期肝线粒体氧化磷酸化偶联增强的机理，应用荧光素和荧光素酶法，以琥珀酸为底物，测定了烫伤３０ｍｉｎ大鼠肝线粒体合成酶和腺苷酸激酶的活性，发现该两种酶的活性与假处理组相比均增高。提示这两种酶活性增高... 详细信息

为进一步了解大鼠烫伤早期肝线粒体氧化磷酸化偶联增强的机理，应用荧光素和荧光素酶法，以琥珀酸为底物，测定了烫伤３０ｍｉｎ大鼠肝线粒体合成酶和腺苷酸激酶的活性，发现该两种酶的活性与假处理组相比均增高。提示这两种酶活性增高可能与烫伤早期ＡＴＰ形成率增高和氧化磷酸化偶联增强有关。

关键词：烫伤肝线粒 ATP 合成酶腺苷酸激酶

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人降钙素cDNA的化学合成与克隆

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第二军医大学学报 1996年第5期17卷 447-449页

作者：蔡在龙窦鸿毛积芳邹鲁峰伍军王官将第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：克隆人降钙素ｃＤＮＡ。方法和结果：应用ＡＢＩ３９１ＤＮＡ合成仪，将人降钙素ｃＤＮＡ分成６个片段合成。退火、磷酸化、连接，最终将人降钙素ｃＤＮＡ克隆于载体ｐＧＥＭ７ｚ（＋），经ＤＮＡ双链测序，证明克隆到的人降钙素... 详细信息

目的：克隆人降钙素ｃＤＮＡ。方法和结果：应用ＡＢＩ３９１ＤＮＡ合成仪，将人降钙素ｃＤＮＡ分成６个片段合成。退火、磷酸化、连接，最终将人降钙素ｃＤＮＡ克隆于载体ｐＧＥＭ７ｚ（＋），经ＤＮＡ双链测序，证明克隆到的人降钙素ｃＤＮＡ序列与设计的完全一致。结论：本研究为寡肽ｃＤＮＡ（或基因）的化学合成与克隆提供了简捷、可靠的方法；为人的降钙素ｃＤＮＡ的高效表达奠定了基础。

关键词：降钙素 cDNA 化学合成克隆

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烫伤早期大鼠肾皮质细胞氧自由基、Ca^（2＋）细胞化学和Ca^（2＋）－Mg^（2＋）－ATP酶活性的变化

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第二军医大学学报 1996年第2期17卷 141-144页

作者：窦鸿沙继红赵麟冯伟华黄海魏尧梅第二军医大学基础医学部生物化学教研室

研究重度烫伤大鼠肾皮质细胞膜（质膜、内质网及线粒体膜）Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性、细胞内Ｃａ２＋定位和半定量及肾皮质内Ｈ２Ｏ２（氧自由基）定位，以探讨烫伤早期肾损伤的机制。方法：化学法和细胞化学法。结果：发现肾... 详细信息

研究重度烫伤大鼠肾皮质细胞膜（质膜、内质网及线粒体膜）Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性、细胞内Ｃａ２＋定位和半定量及肾皮质内Ｈ２Ｏ２（氧自由基）定位，以探讨烫伤早期肾损伤的机制。方法：化学法和细胞化学法。结果：发现肾小管细胞内Ｃａ２＋浓度升高在烫伤后６０ｍｉｎ达到高峰，Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性在６０或１２０ｍｉｎ为最低，并与亚细胞结构的损伤程度显著相关。烫伤后３０ｍｉｎ肾皮质间质毛细血管及肾小球毛细血管壁出现Ｈ２Ｏ２细胞化学阳性沉积物，６０ｍｉｎ时消失。以上变化在观察时间内（５ｈ）具有可恢复性。结论：严重烫伤时肾缺血，皮质毛细血管内皮细胞受氧自由基损伤，改变了血管通透性，引起组织水肿，继而Ｃａ２＋泵活性下降，Ｃａ２＋过载，进一步影响细胞结构和功能。

关键词：烫伤肾皮质细胞膜氧自由基钙离子 ATP

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大鼠肝乳酸脱氢酶与磷脂脂质体的相互作用

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第二军医大学学报 1994年第1期15卷 15-19页

作者：孙建新陈志杨雨善第二军医大学基础医学部生物化学教研室

以荧光光度法研究了大鼠肝ＬＤＨ－Ｍ４与磷脂脂质体的相互作用。磷脂脂质体对ＬＤＨ－Ｍ４具有抑制作用。磷脂酰肌醇（ＰＩ）脂质体的作用比磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）大。当磷脂／蛋白（Ｗ／Ｗ）比为６时，ＰＩ能完全抑制ＬＤＨ的活性，抑... 详细信息

以荧光光度法研究了大鼠肝ＬＤＨ－Ｍ４与磷脂脂质体的相互作用。磷脂脂质体对ＬＤＨ－Ｍ４具有抑制作用。磷脂酰肌醇（ＰＩ）脂质体的作用比磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）大。当磷脂／蛋白（Ｗ／Ｗ）比为６时，ＰＩ能完全抑制ＬＤＨ的活性，抑制作用呈剂量效应。而磷脂酰乙醇胺，当其磷脂／蛋白（Ｗ／Ｗ）比超过２时，抑制作用不明显，抑制作用呈非剂量效应。当以２８０ｎｍ为激发波长时，ＬＤＨ－Ｍ４的发射峰为３４５ｎｍ，主要为色氨酸的吸收。磷脂脂质体对ＬＤＨ－Ｍ４的内源性荧光具有猝灭作用，并使发射峰红移，ＰＩ的作用比ＰＥ的作用大，ＮａＣｌ能减轻磷脂脂质体对酶的内源性荧光的影响，该结果提示静电作用在磷脂与酶相互作用过程中是主要的。Ｓｔｅｒｎ－Ｖｅｌｍｅｒ图提示，荧光猝灭机制主要为静态猝灭，即酶吸附于磷脂脂质体表面形成了酶脂质体复合物。这种吸附改变了酶的构象，从而影响了酶的活性。

关键词：磷脂脂质体荧光猝灭乳酸脱氢酶

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一种新型克隆载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 387-389页

作者：邹鲁峰毛积芳窦鸿蔡在龙伍军王官将第二军医大学基础医学部生物化学教研室

一种新型克隆载体的构建邹鲁峰，毛积芳，窦鸿，蔡在龙，伍军，王官将基因工程中寡肽基因的表达通常具有重组产物难以纯化和易受工程菌自身消化等障碍，为了克服这些困难，人们采用寡肽基因为单体的多聚基因或融合基因表达的方式，以期... 详细信息

一种新型克隆载体的构建邹鲁峰，毛积芳，窦鸿，蔡在龙，伍军，王官将基因工程中寡肽基因的表达通常具有重组产物难以纯化和易受工程菌自身消化等障碍，为了克服这些困难，人们采用寡肽基因为单体的多聚基因或融合基因表达的方式，以期获得重组寡肽产物［１．２］．近来，...

关键词：基因表达克隆载体 pMJ96

来源：评论

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