检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 1996年第5期17卷 444-446页

作者：石汉平徐仁宝高瀚龚肖琦缪明永第二军医大学基础医学部病理生理学教研室第一军医大学南方医院外科第二军医大学长征医院普通外科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：观察大鼠失血性休克后血浆白细胞介素１（ＩＬ－１）活性及巨噬细胞分泌ＩＬ－１能力的动态变化。方法：ＳＤ大鼠失血后（３０％，按体重折算）１ｈ回输失血，不同时间采血或收集腹腔巨噬细胞，用改良ＬＡＦ法检测ＩＬ－１活性。... 详细信息

目的：观察大鼠失血性休克后血浆白细胞介素１（ＩＬ－１）活性及巨噬细胞分泌ＩＬ－１能力的动态变化。方法：ＳＤ大鼠失血后（３０％，按体重折算）１ｈ回输失血，不同时间采血或收集腹腔巨噬细胞，用改良ＬＡＦ法检测ＩＬ－１活性。结果：失血性休克后２～３ｈ及２４～７２ｈ血浆ＩＬ－１活性显著升高，１～２ｈ及２４～７２ｈ腹腔巨噬细胞分泌ＩＬ－１的能力也明显增强，与第１峰相比，第２峰峰值更高，持续时间更长。结论：大鼠失血性休克后ＩＬ－１活性呈双峰型升高，推测第１峰为应激峰，β－内啡肽、糖皮质激素起重要调控作用；第２峰为炎症峰，肠道内毒素入血及细菌移位起主要作用。

关键词：失血性休克白细胞介素1 血循环巨噬细胞

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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a研究的综合报告

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 121-124页

作者：焦炳华娄永华王梁华朱玉平周丙荣第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物 3a(rh- TNFα- D3a)研究开发为临床新药。方法 :与野生型 TNFα比较 ,采用动物体内抑瘤试验测定其 ED50 ;急性毒性试验测定 L D50 ;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发... 详细信息

目的 :将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物 3a(rh- TNFα- D3a)研究开发为临床新药。方法 :与野生型 TNFα比较 ,采用动物体内抑瘤试验测定其 ED50 ;急性毒性试验测定 L D50 ;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发生的程度 ; 期临床试验观察人体可耐受的安全剂量 ; - 期临床试验观察其对肿瘤患者的临床疗效。结果 :rh- TNFα-D3a体内抑瘤的 ED50 为其野生型的 2 / 3;L D50 为野生型的 11倍 ;恒河猴长期毒性的安全剂量为日本同类产品 PT0 5 0的 6 4倍 ; 期临床试验表明 ,≤ 2× 10 6 IU/ (m2· d)× 7d为人体可耐受的安全剂量 ,本品与野生型药物比较 ,其毒性反应的发生率及反应程度远远降低 ; - 期临床试验表明 ,胸腔内注射对恶性胸水 ,静脉途径对多种实体瘤包括恶性淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑素瘤和肾癌等均有较好的疗效。结论 :研制新一代高效。

关键词：抗肿瘤药临床试验重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a rh-TNFα-D3a

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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a的克隆与表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 125-128页

作者：娄永华焦炳华周丙荣王梁华余伟民朱玉平第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p B... 详细信息

目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- TNFα- D3a的工程菌。结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 TNFα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- TNFα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 >98%。 rh- TNFα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- TNFα相比 ,rh- TNFα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 TNFα的抗肿瘤活性。结论 :rh- TNF-αD3a是一个毒性较低。

关键词：点突变聚合酶链反应重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a 克隆 rh-TNF α-D3a

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编码耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的pheB基因在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

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第二军医大学学报 1997年第2期18卷 101-104页

作者：蔡在龙季朝能王学敏张洁董海沈仁权毛裕民复旦大学遗传学研究所第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然... 详细信息

目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占细菌总蛋白的３４．６％。并与ｘｙｌＥ基因编码的邻苯二酚２，３双加氧酶作了耐热性比较。结论：ｐｈｅＢ基因在大肠杆菌中获得了高表达，高表达后重组酶的耐热性未发生改变。

关键词： pheB基因耐热邻苯二酚双加氧酶大肠杆菌表达

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全反式维甲酸对大鼠棕色脂肪线粒体上解偶联蛋白活性和含量的影响

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 683-684页

作者：苗振春邹大进王学敏第二军医大学长海医院内分泌科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的 :探讨全反式维甲酸 (t RA )对大鼠棕色脂肪组织线粒体上解偶联蛋白 (UCP)活性和含量的影响。方法 :将大鼠分为 t RA组和对照组 ,用 3H标记的鸟嘌呤核苷酸 (3H- GTP)与线粒体上解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经 ... 详细信息

目的 :探讨全反式维甲酸 (t RA )对大鼠棕色脂肪组织线粒体上解偶联蛋白 (UCP)活性和含量的影响。方法 :将大鼠分为 t RA组和对照组 ,用 3H标记的鸟嘌呤核苷酸 (3H- GTP)与线粒体上解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经 Scatchard Plot测定出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。结果 :t RA组 Bmax比对照组增加 1.48倍 ,Kd 值两组无明显差别 ,t RA组大鼠体重下降 ,棕色脂肪体积变小 ,白色脂肪变成淡红色。结论 :t RA能使棕色脂肪组织线粒体中U CP含量增加 ,但不改变其活性 ;能增加棕色脂肪组织中脂肪消耗 ,可能在白色脂肪组织中诱导产生 UCP。

关键词：维甲酸棕色脂肪代谢解偶联蛋白嘌呤核苷酸类 tRA UCP BAT

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应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

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基因xylE编码的邻苯二酚2，3－双加氧酶在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 306-312页

作者：蔡在龙王学敏毛积芳季朝能张洁董海沈仁权毛裕民上海第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海复旦大学遗传学研究所

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并... 详细信息

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后进一步克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占全菌总蛋白的３４．２％。结论：ｘｙｌＥ基因在大肠杆菌中获得了高表达。

关键词： xylE基因邻苯二酚双加氧酶大肠杆菌亚克隆

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神经元特异性烯醇化酶

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生命的化学 2008年第4期28卷 439-442页

作者：邱全曜缪明永第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)是烯醇化酶的一种同工酶,该酶不仅参加糖酵解反应,而且还具有神经营养因子作用,对神经系统疾病和肿瘤的诊断、治疗和预后等也有重要作用。本文将从NSE的理化特性、生物学功能和临床... 详细信息

神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)是烯醇化酶的一种同工酶,该酶不仅参加糖酵解反应,而且还具有神经营养因子作用,对神经系统疾病和肿瘤的诊断、治疗和预后等也有重要作用。本文将从NSE的理化特性、生物学功能和临床应用等方面对其进行阐述。

关键词：神经元特异性烯醇化酶同工酶神经保护作用神经营养作用标志物

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心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的变化及左卡尼汀的干预作用

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药学服务与研究 2005年第3期5卷 259-262页

作者：张雷林兆奋缪明永杨兴易马宇洁第二军医大学长征医院急救科上海200003 第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海200433

目的:研究心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的改变及左卡尼汀对其脑细胞线粒体呼吸功能的干预作用。方法:采用窒息合并0.5 mol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,SD大鼠88只,随机分为11组:对照组(假手术... 详细信息

目的:研究心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能的改变及左卡尼汀对其脑细胞线粒体呼吸功能的干预作用。方法:采用窒息合并0.5 mol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停5 min后开始心肺复苏的动物模型,SD大鼠88只,随机分为11组:对照组(假手术组),心肺复苏后3、12、24、48、72 h组,心肺复苏后左卡尼汀干预3、12、24、487、2 h组。每组均为8只大鼠。1 g/支的左卡尼汀溶于100 mL 0.9%NaCl注射液,按100 mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射。取脑组织测定线粒体呼吸Ⅲ、Ⅳ态及呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体RCR和P/O明显下降;随着复苏成功后时间的延长,线粒体RCR和P/O维持在低水平;使用左卡尼汀干预后,RCR和P/O能接近正常。结论:心肺复苏后大鼠脑细胞线粒体呼吸功能明显下降,左卡尼汀对脑细胞呼吸功能有保护作用。

关键词：左卡尼汀心肺复苏线粒体呼吸功能

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急性镉中毒大鼠睾丸氧化损伤机制的研究

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第二军医大学学报 2002年第1期23卷 64-66页

作者：周雍金慧英冯伟华胡惠民郑尊印木泉第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝... 详细信息

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝、睾丸两器官均发生严重的氧化损伤 ,细胞的抗氧化能力明显降低。但两者的变化规律不同 :肝脏在 6 h组 MT大量表达 (达正常值的 6 .7倍 )后 ,上述损伤逐渐减轻 ;而睾丸 MT表达的氧化损伤尽管在前 3h并不严重 ,但此后不断加剧。结论 :急性镉中毒时睾丸与肝氧化损伤规律明显不同 ,MT在睾丸中不能被诱导表达是睾丸对镉极其敏感的原因之一。

关键词：镉中毒氧化还原金属硫蛋白大鼠睾丸损伤

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