检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 1998年第2期19卷 116-119页

作者：周凯娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：寻找具有更强抗肿瘤活性及增强或抑制ＴＮＦα生物学活性的ＴＮＦα突变蛋白。方法和结果：应用ＰＣＲ技术对ｒｈＴＮＦα进行大片段缺失突变，构建了ｒｈＴＮＦα分子Ｎ端缺失５９个氨基酸的突变体ＴＮＦ６０的编码基因，插入ｐ... 详细信息

目的：寻找具有更强抗肿瘤活性及增强或抑制ＴＮＦα生物学活性的ＴＮＦα突变蛋白。方法和结果：应用ＰＣＲ技术对ｒｈＴＮＦα进行大片段缺失突变，构建了ｒｈＴＮＦα分子Ｎ端缺失５９个氨基酸的突变体ＴＮＦ６０的编码基因，插入ｐＢＶ２２０载体并在蛋白酶缺陷的大肠杆菌ＳＧ１１１７中获得较高表达，表达量为２０．４％。重组蛋白经变性、复性和纯化，纯度＞９７％。ＴＮＦ６０对Ｌ９２９，Ｈｅｐ－２，Ｕ９３７三株细胞均丧失了细胞毒性，但都表现出增强ｒｈＴＮＦα细胞毒性的作用。

关键词：肿瘤坏死因子基因缺失聚合酶链反应基因突变

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天然内毒素制剂中S－和R－类脂A的理化特性

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 119-122页

作者：焦炳华徐道荣王梁华朱玉平娄永华周炳荣第二军医大学基础医学部微生物学教研室

天然马流产杆菌内毒素（脂多糖）经有机溶剂萃取后分离为光滑型（Ｓ）－和粗糙型（Ｒ）－亚组分，并制备了相应的类脂Ａ。由Ｓ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｓ－ＬｉＰＡ）表现出极高的水溶性，而由Ｒ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｒ－ＬｉｐＡ）的... 详细信息

天然马流产杆菌内毒素（脂多糖）经有机溶剂萃取后分离为光滑型（Ｓ）－和粗糙型（Ｒ）－亚组分，并制备了相应的类脂Ａ。由Ｓ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｓ－ＬｉＰＡ）表现出极高的水溶性，而由Ｒ－亚组分衍生的类脂Ａ（Ｒ－ＬｉｐＡ）的溶解度较差。化学分析表明Ｒ－ＬｉｐＡ属于完全脂酰化的分子，其结构与天然Ｒ－突变株产生的类脂Ａ完全相同，而Ｓ－ＬｉｐＡ属低度脂酰化（６０％）的分子，并在其分子上发现有游离氨基存在。本研究对从分子水平上了解类脂Ａ结构与功能的关系具有重要的意义。

关键词：内毒素类脂A 理化特性

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用Fura-2测定单个巨噬细胞内游离钙的条件的优化

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 341-343页

作者：朱晓燕韩建中娄淑杰严进徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部基础医学部神经生物学教研室

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fur... 详细信息

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)应用已十分广泛，娄淑杰等用此方法检测了PC12细胞内的[Ca~(2+)]i，我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞（PEM），发现不尽理想，因此我们实验过程中对Fura-2的浓度进行了调整，另外PEM作为参与炎症的非兴奋细胞，其活化对[Ca~(2+)]i有很大的影响，而细胞贴壁很可能导致活化，但测定方法又要求只能在贴壁细胞进行。因此，我们使用鼠尾胶缩短贴壁时间，并把检测用的PEM的贴壁时间控制在一定范围之内。取得了比较理想的结果。

关键词： Fura-2 巨噬细胞钙测定优化 PEM

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重组人白细胞介素2的抗原特性鉴定和部分氨基酸序列分析

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第二军医大学学报 1994年第6期15卷 525-527页

作者：郑杭民杜平戚中田曹广文杨文国第二军医大学基础医学部微生物学教研室

以包含体形式由大肠杆菌表达的基因重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２），经纯化后其纯度已达９５％以上［１］。我们采用免疫印迹法和部分氨基酸序列分析等较特异、敏感和准确的检测手段，对纯化ｒｈＩＬ－２的抗原特性和Ｎ末端１５个... 详细信息

以包含体形式由大肠杆菌表达的基因重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２），经纯化后其纯度已达９５％以上［１］。我们采用免疫印迹法和部分氨基酸序列分析等较特异、敏感和准确的检测手段，对纯化ｒｈＩＬ－２的抗原特性和Ｎ末端１５个氨基酸序列进行检测分析，获得了满意的结果。

关键词：白细胞介素2 免疫印迹法氨基酸序列分析

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RT－PCR检测HCV　RNA假阳性结果分析

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 391-392页

作者：宋燕斌崔晓红潘卫王锦红戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测... 详细信息

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ是诊断ＨＣＶ感染的最敏...

关键词：丙型肝炎病毒聚合酶链反应假阳性

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重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a突变区的氨基酸序列分析

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第二军医大学学报 1997年第4期18卷 309-312页

作者：缪为民陈建鹤王梁华周丙荣娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：对重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）突变区进行氨基酸序列分析。方法：通过ＰＣＲ扩增，获得５＇端含ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ突变区的半分子。用融合蛋白表达系统对该半分子进行大肠杆菌表达。表达产物经亲... 详细信息

目的：对重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）突变区进行氨基酸序列分析。方法：通过ＰＣＲ扩增，获得５＇端含ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ突变区的半分子。用融合蛋白表达系统对该半分子进行大肠杆菌表达。表达产物经亲和层析法纯化，用Ⅹａ因子酶切，去除载体多肽，然后进行Ｎ末端２０个氨基酸顺序分析。结果和结论：氨基酸序列符合预想突变序列，即发生下列氨基酸替换：８０位Ｉｌｅ→Ｓｅｒ，９０位Ｌｙｓ→Ｈｉｓ，９２位Ａｓｎ→Ｖａｌ。

关键词：肿瘤坏死因子衍生物突变氨基酸顺序

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基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 537-540页

作者：卢洋黎怀星李建秀傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 详细信息

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

关键词：转基因小鼠基因突变 PMTR1质粒

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噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 535-543页

作者：徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... 详细信息

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.

关键词：噬菌体展示分子进化结构域组合文库 protein A protein L

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庚型肝炎病毒全基因转基因小鼠的制备与遗传

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1175-1178页

作者：胡卫江王宏卫戚中田李建秀胡以平第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 基础医学部细胞生物学教研室

目的:利用显微注射方法产生整合庚型肝炎病毒(HGV)全基因的转基因小鼠,并研究HGV基因的遗传特性。方法:将含有HGV全长基因的载体线性化后,将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液,依常规方法进行显微注射,得到仔鼠后用PCR及基因组DNA South... 详细信息

目的:利用显微注射方法产生整合庚型肝炎病毒(HGV)全基因的转基因小鼠,并研究HGV基因的遗传特性。方法:将含有HGV全长基因的载体线性化后,将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液,依常规方法进行显微注射,得到仔鼠后用PCR及基因组DNA Southern印迹法鉴定。阳性小鼠即为建立者(founder)小鼠,将founder小鼠与正常小鼠交配得到F代小鼠,随后将F1代阳性鼠与正常小鼠交配得到F2代小鼠。结果:共得到5只founder小鼠,其中4只与正常小鼠交配,得到F1代小鼠共41只,其中29只为阳性,阳性率为71％。F2代小鼠共21只,其中16只为阳性,阳性率为76％。结论:得到了整合有HGV全长基因的转基因小鼠,并证明HGV基因可以在转基因小鼠体内稳定传递。

关键词：制备庚型肝炎病毒转基因小鼠遗传学动物模型

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原发性肝癌CD44v　mRNA表达与肝癌复发的关系

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第二军医大学学报 1996年第6期17卷 561-563页

作者：刘鹏飞吴孟超陈汉钱光相傅继梁第二军医大学东方肝胆外科医院第二军医大学基础医学部生物学教研室

目的：研究原发性肝癌ＣＤ４４ｖ的表达与其侵袭转移的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法及术后随访分析５４例原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况及其与侵袭转移的关系。结果：９２．５９％的病例肝癌组织ｃＤ４４ｖｍＲＮＡ阳性表... 详细信息

目的：研究原发性肝癌ＣＤ４４ｖ的表达与其侵袭转移的关系。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法及术后随访分析５４例原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达情况及其与侵袭转移的关系。结果：９２．５９％的病例肝癌组织ｃＤ４４ｖｍＲＮＡ阳性表达，其中中－高度表达者占７７．７８％。在中－高度表达的病例中，肿瘤包膜的缺如、穿破，门静脉癌栓及瘤周卫星结节形成等侵袭转移相关指标明显高于阴性－微弱表达的病例（Ｐ＜０．００１）。随访回报４６例，ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ中－高度表达者复发率（７７．１５％）明显高于阴性－微弱表达的病例（３６．３６％，Ｐ＜０．０２５），而前者生存率（２５．７１％）则明显较后者（７７．７８％）为低（Ｐ＜０．００５）。结论：原发性肝癌ＣＤ４４ｖｍＲＮＡ的表达能够反映肝癌的侵袭转移潜能。

关键词： CD44 肝肿瘤复发 mRNA 表达癌

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