检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2005年第3期26卷 257-262页

作者：陶欣荣李文林苏娟王新民李建秀 Joseph T Lau 胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室 The Department of Molecular and Cellular Biology Roswell Park Cancer InstituteElm and Carlton StreetsBuffaloNY 14263USA

目的:分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),建立克隆化扩增的细胞系并初步鉴定其分化特性和细胞的分子标记.方法:利用间充质干细胞贴壁生长的特性,显微镜下挑取原代单个成纤维样生长单位中的细胞,逐步扩大培养,最终得到克隆化扩增的hMSCs.选... 详细信息

目的:分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),建立克隆化扩增的细胞系并初步鉴定其分化特性和细胞的分子标记.方法:利用间充质干细胞贴壁生长的特性,显微镜下挑取原代单个成纤维样生长单位中的细胞,逐步扩大培养,最终得到克隆化扩增的hMSCs.选择有利于其生长的血清,低密度培养,传70%～80%生长汇合时传代保种.RT-PCR检测其Oct-4、SDF1、CD49a、CK19、c-met基因的表达;流式细胞术检测细胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD44、CD29、CD90、HLA-1和HLADR;体外向骨、软骨、脂肪细胞方向诱导分化鉴定其分化潜能.结果:建立了人骨髓间充质干细胞系并在体外实现了克隆化扩增,该细胞系在体外连续培养达60个细胞倍增时间仍保持多向分化的潜能.细胞不表达CD34、CD45、CD14、HLA-DR,但表达Oct-4、SDF-1、CD49a、CK19、c-met、CD44、CD29、CD90、HLA-1.体外能诱导出骨、软骨、脂肪细胞.结论:得到了一个可稳定传代的克隆化扩增的人骨髓间充质干细胞系,该细胞系在体外可以分化为骨、软骨、脂肪细胞,并表达Oct-4、CK19和c-met.

关键词：间充质干细胞骨髓细胞系克隆细胞分化

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鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2005年第5期31卷 598-601,634页

作者：范秋领黄才国金艳缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

以400 m g/kg 2次腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1 h以80 m g/kg 2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸(A... 详细信息

以400 m g/kg 2次腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1 h以80 m g/kg 2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸(ADP)诱导的氧消耗、呼吸控制率(RCR)、磷/氧比(P/O)、氧化磷酸化率均低于对照组,而预防组线粒体ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率、P/O和氧化磷酸化效率均高于模型组;TAA降低了线粒体中谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶的水平,而鲨鱼肝蛋白粗提物则使线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的水平明显升高,说明鲨鱼肝蛋白粗提物能部分修复线粒体受损的呼吸功能,增强线粒体抗氧化能力。

关键词：鲨鱼肝蛋白粗提物硫代乙酰胺急性肝损伤线粒体呼吸功能抗氧化

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HBV病毒蛋白在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠中的表达

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 275-278页

作者：訾晓渊巴月熊俊张树忠姚玉成张南李建秀王新民马凤云叶煦亭丛文铭胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 郑州大学公共卫生学院环境卫生学教研室郑州450052 第二军医大学东方肝胆外科医院病理科上海200438

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6～F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分... 详细信息

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6～F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分析病毒蛋白在转基因小鼠中的表达.结果:转基因小鼠血清中HBsAg和HBeAg的阳性率分别为55.18%和25.00%,血清中HBsAg的出现时间多在3个月龄之前(占93.33%),且持续时间在9个月以上(占95.56%),个体之间具有一定差异.转基因小鼠肝组织中至少可检测到一种病毒蛋白,HBsAg、HBcAg和X蛋白的检出率分别为85.82%、58.24%和49.61%.HBsAg分布于肝细胞质中,HBcAg和X蛋白既可分布于肝细胞核中,也可分布干肝细胞质中.HBsAg的表达具有细胞特异性(门管区周围的肝细胞)和组织特异性(肝和肾),X蛋白除在肝脏和肾脏中表达外,还可在脑组织中表达.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝肾等组织中有病毒蛋白的表达,病毒蛋白的分布具有组织细胞特异性和个体差异.

关键词：肝炎病毒乙型小鼠转基因病毒蛋白质类

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新现和再现虫媒病及其媒介

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国外医学（寄生虫病分册） 2005年第3期32卷 125-128页

作者：朱淮民第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

大规模的经济建设,造成生态环境破坏,人类与动物密切接触机会的增加及科学技术的进步,使得人们对病原体的认知水平不断提高,出现了一些新现虫媒传染病;另一方面,已经认知的并通过大规模防治得到明显或有效控制的虫媒病的流行出现了一些... 详细信息

大规模的经济建设,造成生态环境破坏,人类与动物密切接触机会的增加及科学技术的进步,使得人们对病原体的认知水平不断提高,出现了一些新现虫媒传染病;另一方面,已经认知的并通过大规模防治得到明显或有效控制的虫媒病的流行出现了一些新的问题。这些问题给公共卫生体系提出严峻的挑战。

关键词：虫媒病媒介生态环境破坏公共卫生体系虫媒传染病经济建设科学技术密切接触认知水平有效控制病原体规模出现

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周围神经损伤再生后肌肉nAChRε亚单位基因表达的变化

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 13-16页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学长征医院整形外科上海200003 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法... 详细信息

目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性。同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。结果:用该方法检测nAChRε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6 个数量级,最低检测下限为1×102 拷贝,最高检测上限为1×107 拷贝。大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3 周降到最低后又逐渐增高,但到术后30 周仍处于低水平(P<0.01)。结论:采用Taq Man实时荧光定量RT PCR检测nAChRε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点。神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低。

关键词：烟碱型乙酰胆碱受体ε亚单位荧光定量逆转录聚合酶链反应周围神经损伤基因表达和调控

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hVEGF_(165)和嵌合水蛭肽融合基因的真核表达载体的构建及其表达

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 983-987页

作者：陈少萍沈雳秦永文蔡在龙第二军医大学长海医院心内科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVE... 详细信息

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0。对重组质粒进行酶切鉴定和测序分析,将正确克隆的质粒分别作体外快速转录翻译鉴定,以及经脂质体介导转染人内皮细胞株,并对表达产物进行鉴定。结果:hVEGF165和FH成功融合,形成711 bp的目的片段,并成功构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0,重组质粒转染人内皮细胞株有hVEGF165-FH表达。结论:重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0在人内皮细胞株中得到表达,为其融合蛋白活性研究及基因治疗打下良好基础。

关键词： hVEGF165 水蛭肽基因融合基因表达载体

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人肝癌细胞系P2-HCC的建立及体外诱导分化特性的初步研究

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 247-250页

作者：朱海英张朵谢东甫王新民周旭宇 Joseph T Lau 胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科 The Department of Molecular and Cellular Biology Roswell Park Cancer InstituteElm and Carlton StreetsBuffaloNY 14263USA

目的:从人肝细胞癌中分离肝癌细胞并对其体外诱导分化特性进行分析,试图得到有关导致肝癌发生的“癌干细胞”的相关资料。方法:首先将人原发性肝癌组织小块在裸鼠皮下过继接种,然后将生成的肿瘤进行原代培养并得到单层生长的肿瘤细胞系... 详细信息

目的:从人肝细胞癌中分离肝癌细胞并对其体外诱导分化特性进行分析,试图得到有关导致肝癌发生的“癌干细胞”的相关资料。方法:首先将人原发性肝癌组织小块在裸鼠皮下过继接种,然后将生成的肿瘤进行原代培养并得到单层生长的肿瘤细胞系,利用体外诱导实验对其形态及分子表型的变化情况进行观察和分析。结果:所分离获得的细胞系具有肝肿瘤细胞的特征,但也表达某些干细胞的分子标志如c met。体外诱导分化实验提示胰岛素/氢化可的松、二甲亚砜可能具有诱导该细胞向成熟肝细胞方向分化的作用,诱导后的细胞又重新表达葡萄糖6 磷酸酶,白蛋白表达明显升高。结论:人P2 HCC细胞具有强大的增殖能力,体外实验提示其具有一定的向成熟肝细胞分化的潜能。这些细胞的发生与肝癌干细胞及肝细胞的关系尚待进一步研究。

关键词：癌肝细胞肿瘤细胞,培养的细胞分化

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人胎肝干细胞在重症联合免疫缺陷小鼠损伤肝脏中的植入

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 243-246页

作者：苏娟李文林陶欣荣朱海英王新民李建秀田棣余宏宇 Joseph T Lau 胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学长征医院病理科 The Department of Molecular and Cellular Biology Roswell Park Cancer InstituteElm and Carlton StreetsBuffaloNY 14263USA

目的:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离培养肝干细胞,并观察其在重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠损伤肝脏中的植入.方法:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离干细胞并进行体外长期培养,用RT PCR方法检测肝干细胞相关分子标志以及八聚物结合蛋白4(... 详细信息

目的:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离培养肝干细胞,并观察其在重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠损伤肝脏中的植入.方法:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离干细胞并进行体外长期培养,用RT PCR方法检测肝干细胞相关分子标志以及八聚物结合蛋白4(Oct-4)的表达,然后植入经四氯化碳(CCl4)造成急性肝损伤的SCID小鼠体内,在移植后2、l0、17d分别对受体鼠肝脏冰冻切片进行荧光观察和H-E染色.结果:所建立的胎肝细胞系不仅表达二肽水解酶Ⅳ(DPPⅣ)、白蛋白(Alb)、细胞角蛋白(CK)19、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、CK18、肝细胞生长因子受体(c-met)、干细胞因子受体(c-kit)等肝干细胞相关标志,还表达干细胞转录因子Oct-4.在细胞移植后2 d,肝脏冰冻切片未见绿色荧光;移植后10 d和17d肝脏冰冻切片见散在的绿色荧光.对同一切片做H-E染色,发现绿色荧光部位为肝板内的多个成熟肝细胞.结论:从人胚胎肝脏中分离的干细胞能够植入SCID小鼠的损伤肝脏.

关键词：肝干细胞胚胎重症联合免疫缺陷细胞移植

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表达红色荧光蛋白DsRed报告基因的逆转录病毒载体的构建和在肝干细胞体内示踪中的应用

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 240-242页

作者：李文林苏娟陶欣荣 Joseph T Lau 胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室 The Department of Molecular and Cellular Biology Roswell Park Cancer InstituteElm and Carlton StreetsBuffaloNY 14263USA

目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓... 详细信息

目的:建立表达红色荧光蛋白DsRed的逆转录病毒载体,并对肝原始细胞进行体外标记和体内示踪研究。方法:将pDsRed1 1载体中的DsRed片段克隆到逆转录病毒载体pLNCG C1中构建了pLNCG DsRed载体。将该载体导入Phoenix包装细胞,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67 细胞系。结果:利用PT67 细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝原始细胞系。将这些DsRed标记的肝原始细胞移植到小鼠损伤肝脏中,4周后可以在再生肝脏中清晰地观察到具有红色荧光的外源细胞。结论:由于肝脏组织没有红色自发荧光,用DsRed标记肝原始细胞进行肝内示踪时背景干扰小。

关键词：红色荧光蛋白基因.报告逆转录病毒载体肝干细胞

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白蛋白/细胞角蛋白19启动子调控的红绿双色荧光蛋白报告载体的构建及其在肝干细胞分化研究中的应用

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 237-239页

目的:利用报告基因监测肝干细胞的分化走向。方法:通过PCR从小鼠基因组中克隆了细胞角蛋白19 启动子片段,构建了细胞角蛋白19启动子调控的绿色荧光蛋白(pCK19 EGFP)和白蛋白启动子调控的红色荧光蛋白报告载体(pAlbD sRed),并利用报告载... 详细信息

目的:利用报告基因监测肝干细胞的分化走向。方法:通过PCR从小鼠基因组中克隆了细胞角蛋白19 启动子片段,构建了细胞角蛋白19启动子调控的绿色荧光蛋白(pCK19 EGFP)和白蛋白启动子调控的红色荧光蛋白报告载体(pAlbD sRed),并利用报告载体标记的肝干细胞(liver epithelial progenitor cells,LEPCs)观察了悬浮培养时LEPCs的分化去向。结果:白蛋白/细胞角蛋白19启动子调控的红绿双色荧光蛋白报告载体可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向。结论:双色荧光蛋白报告载体的成功构建为研究LEPCs的分化、筛选可诱导LEPCs定向分化的分子提供了便捷的工具。

关键词：肝干细胞细胞分化白蛋白细胞角蛋白19 启动子红色荧光蛋白绿色荧光蛋白基因.报告

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