检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2001年第4期41卷 408-414页

作者：任浩董辉朱分禄缪晓辉王文戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院感染科

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA... 详细信息

利用PCR方法从输血传播性病毒(transfusion transmitted virus,TTV)阳性标本中获得不同长度且重叠覆盖TTV基因组的DNA片段.将PCR扩增片段克隆到pT-Adv载体中,筛选获得阳性克隆.DNA序列测定结果表明所克隆的片段为TTV基因组序列.利用DNA片段中特有的限制性内切酶位点将TTV的DNA片段首尾相连,得到近全长的基因组克隆,命名为TTV021.对TTV021的核酸序列进行分析,TFV021长3 472 nt,存在2个阅读框架ORF1和ORF2,分别编码785和146个氨基酸.将TTV021与其它已知的TTV基因组全序列进行了同源性比较,并进行进化分析.结果表明,TTV021序列与TTV分离株CHN2、BDH1的遗传距离较近,而与其它分离株相对较远.

关键词：输血传播性病毒克隆同源性进化分析

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组蛋白脱乙酰化酶HDAC1 cDNA的克隆及其酵母表达质粒的构建

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第二军医大学学报 1999年第4期20卷 205-208页

作者：陈坚张晓琴傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：获得ＨＤＡＣ１的ｃＤＮＡ及构建酵母双杂合系统中的靶基因。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出一约１．４５ｋｂ的ＤＮＡ片段，作全自动测序，重组入ｐＬｅｘＡ载体，构建成ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１，并... 详细信息

目的：获得ＨＤＡＣ１的ｃＤＮＡ及构建酵母双杂合系统中的靶基因。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出一约１．４５ｋｂ的ＤＮＡ片段，作全自动测序，重组入ｐＬｅｘＡ载体，构建成ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１，并用醋酸锂法转化酵母菌ＥＧＹ４８，在选择性培养基上观察ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１在ＥＧＹ４８中的表达情况。结果：获得的１．４５ｋｂ的ＤＮＡ编码的氨基酸序列与文献报道的ＨＤＡＣ１一致，转化的酵母菌在选择性培养基ＳＤ／Ｇａｌ／Ｒａｆ／－Ｕｒａ／－Ｈｉｓ／上培养３ｄ后，长出约１ｍｍ大小的白色菌落。结论：获得了ＨＤＡＣ１的ｃＤＮＡ，ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ１对ＥＧＹ４８没有毒性作用，也没有自身激活ＬａｃＺ功能，可作为酵母双杂合系统中的靶基因。

关键词：组蛋白脱乙酰化酶酵母双杂合系统质粒克隆

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心理性应激引起的大鼠行为,血浆皮质酮及脑区氨基酸水平的变化

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第二军医大学学报 1997年第4期18卷 330-333页

作者：严进王春安陈宜张徐仁宝第二军医大学基础医学部生理学教研室第二军医大学基础医学部病理生理学教研室第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的：观察心理应激模型动物血浆皮质酮及视皮质、海马和下丘脑氨基酸和整体行为的变化。方法：以光－电击条件反射法建立心理应激动物模型，采用放射性配体蛋白竞争结合法、氨基酸自动分析法及旷场试验（Ｏｐｅｎ－ｆｉｅｌｄｔｅｓｔ... 详细信息

目的：观察心理应激模型动物血浆皮质酮及视皮质、海马和下丘脑氨基酸和整体行为的变化。方法：以光－电击条件反射法建立心理应激动物模型，采用放射性配体蛋白竞争结合法、氨基酸自动分析法及旷场试验（Ｏｐｅｎ－ｆｉｅｌｄｔｅｓｔ）分别测定大鼠心理应激时血浆皮质酮、脑区氨基酸水平和行为的变化。结果：在血浆皮质酮能够分化心理应激的实验参数条件下，电击刺激时，主要引起视皮质氨基酸水平的变化；而仅给予条件刺激（光）引起心理应激时，可在视皮质、海马和下丘脑３个脑区不同程度地出现谷氨酸、γ－氨基丁酸和牛磺酸水平的变化，并以海马最明显。同时动物运动行为减少，类似抑郁样表现。结论：心理应激反应时，谷氨酸、γ－氨基丁酸和牛磺酸等脑内氨基酸的变化，可能与心理应激引起的抑郁样行为有关。

关键词：心理应激皮质酮氨基酸

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庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆

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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 301-306页

作者：朱分禄戚中田任浩宋燕斌邵力第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料... 详细信息

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的核苷酸及推测的氨基酸序列与原ＨＧＶ－Ｉｗ序列一致。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的克隆已经构建成功。该克隆的构建，为深入研究ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的致病性及致病机制、复制及转录和翻译机制。

关键词：全长cDNA 拼接克隆庚型肝炎病毒基因组

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新型血管内皮细胞抑制因子VEGI151的基因克隆表达及其活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 485-489页

作者：王路潘卫朱分禄焦炳华娄永华肖扬戚中田卫生毒理学教研室!上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室!上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI) 基因克隆表达内皮细胞生物学活性

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精氨酸升压素对烫伤休克大鼠心功能的抑制作用及其机制

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第二军医大学学报 1995年第6期16卷 515-519页

作者：孙刚王成海路长林宋朝佑林葆城朱鹤年第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

采用放射免疫测定、心功能记录与离体心肌实验等方法，研究了精氨酸升压素（ＡＶＰ）对烫伤休克大鼠心功能的影响。结果表明：烫伤休克时，垂体向血液释放ＡＶＰ增多，血浆ＡＶＰ水平升高非常显著；ＡＶＰＶ１和Ｖ２受体特异性拮抗剂均... 详细信息

采用放射免疫测定、心功能记录与离体心肌实验等方法，研究了精氨酸升压素（ＡＶＰ）对烫伤休克大鼠心功能的影响。结果表明：烫伤休克时，垂体向血液释放ＡＶＰ增多，血浆ＡＶＰ水平升高非常显著；ＡＶＰＶ１和Ｖ２受体特异性拮抗剂均可不同程度地改善烫伤休克大鼠的心功能，但后者作用较强；Ｖ１和Ｖ２受体拮抗剂亦能拮抗ＡＶＰ对离体心肌收缩的抑制作用；ＡＶＰ可升高心肌ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量，但后者高于前者，使ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ比值增高。提示ＡＶＰ除有缩血管作用外，对心肌还有直接的负性变力作用，参与了烫伤休克大鼠心功能抑制的病理过程，此作用是由心肌上的ＡＶＰ受体介导的，其第二信使可能与ｃＧＭＰ有关。

关键词：精氨酸升压烫伤心功能控制

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强啡肽A_（1－13）与大鼠急性脑创伤后脑水肿的关系

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第二军医大学学报 1996年第2期17卷 129-132页

作者：孙学军孙刚王成海路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

观察强啡肽Ａ１－１３（ＤｙｎＡ１－１３）与脑创伤后脑水肿的关系。方法：采用放免方法与密度梯度脑水肿测定方法。结果：ＤｙｎＡ１－１３含量，伤侧皮质除伤后４ｈ显著高于对照组外，伤后２，１０与２４ｈ都显著低于对照组，伤侧海... 详细信息

观察强啡肽Ａ１－１３（ＤｙｎＡ１－１３）与脑创伤后脑水肿的关系。方法：采用放免方法与密度梯度脑水肿测定方法。结果：ＤｙｎＡ１－１３含量，伤侧皮质除伤后４ｈ显著高于对照组外，伤后２，１０与２４ｈ都显著低于对照组，伤侧海马伤后４个时间点均显著低于对照组，下丘脑伤后１０，２４ｈ明显低于对照组；组织密度伤后４ｈ伤侧海马与皮质明显低于对照组，伤后２４ｈ降低最为明显；海马的ＤｙｎＡ１－１３含量与组织密度呈正相关；侧脑室注射ＤｙｎＡ１－１３可减轻脑水肿，而注射ｋ受体拮抗剂ｎｏｒ－ＢＮＩ则可加重脑水肿。结论：强啡肽Ａ１－１３的减损可能是脑创伤后脑水肿形成的显著因素，它对脑创伤后脑水肿具有潜在的治疗价值。

关键词：脑创伤脑水肿强啡肽A

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人及大鼠胶质细胞源性神经营养因子cDNA的克隆与表达

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第二军医大学学报 1998年第1期19卷 17-19页

作者：陈哲宇何成王成海路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的：克隆与表达人及大鼠胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）ｃＤＮＡ。方法和结果：用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了人及大鼠ＧＤＮＦ成熟序列的ｃＤＮＡ片段，并将人及大鼠ＧＤＮＦｃＤＮＡ重组到表达质粒ｐＢＰＬ... 详细信息

目的：克隆与表达人及大鼠胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）ｃＤＮＡ。方法和结果：用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了人及大鼠ＧＤＮＦ成熟序列的ｃＤＮＡ片段，并将人及大鼠ＧＤＮＦｃＤＮＡ重组到表达质粒ｐＢＰＬ中，分别在大肠杆菌中获得了较高表达。结论：人及大鼠ＧＤＮＦｃＤＮＡ的克隆与表达获得成功，为研究ＧＤＮＦ在神经损伤修复中的作用奠定了基础。

关键词： cDNA 克隆神经损伤修复 GDNF 基因表达

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逆转录病毒介导的脑源性神经营养因子在大鼠成肌细胞中表达及分泌

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 219-221页

作者：曲伸何晓龙王成海路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的：研究经逆转录病毒载体的介导将脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）ｃＤＮＡ导入大鼠成肌细胞，为体内移植治疗打下基础。方法：采用电穿孔法将重组大鼠ＢＤＮＦｃＤＮＡ导入ＰＡ３１７包装细胞，获取高滴度的病毒上清转染成肌细胞。... 详细信息

目的：研究经逆转录病毒载体的介导将脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）ｃＤＮＡ导入大鼠成肌细胞，为体内移植治疗打下基础。方法：采用电穿孔法将重组大鼠ＢＤＮＦｃＤＮＡ导入ＰＡ３１７包装细胞，获取高滴度的病毒上清转染成肌细胞。Ｇ４１８筛选转染的成肌细胞，采用Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交和ＰＣ１２细胞存活检测。结果：证实转染细胞内有ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达并具有促进细胞存活的生物学活性。结论：ＢＤＮＦｃＤＮＡ可在真核细胞内表达并具有生物学效应，可用于神经系统基因治疗的研究。

关键词：逆转录病毒神经营养因子脑源性成肌细胞

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丙肝病毒非结构蛋白基因3的克隆及其体外诱导表达

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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 307-310页

作者：张树忠梁嘉靖戚中田胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的：研究丙肝病毒非结构蛋白基因３（ｎｓ３基因）在体外真核细胞中的诱导表达。方法：以ＰＣＲ方法从含ＨＣＶｎｓ３基因的重组载体ｐＢｎｓ３中扩增出ｎｓ３基因，并将其插入到克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，再与表达载体ｐＭＳＧ重组，... 详细信息

目的：研究丙肝病毒非结构蛋白基因３（ｎｓ３基因）在体外真核细胞中的诱导表达。方法：以ＰＣＲ方法从含ＨＣＶｎｓ３基因的重组载体ｐＢｎｓ３中扩增出ｎｓ３基因，并将其插入到克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，再与表达载体ｐＭＳＧ重组，以得到重组表达载体ｐＭＳＧ－ｎｓ３。然后采用磷酸钙沉淀法将其转染哺乳动物ＣＨＯ细胞，经地塞米松（ＤＭ）诱导，采用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术检测ＮＳ３蛋白的表达水平。结果：用所构建的诱导型表达载体ｐＭＳＧ－ｎｓ３转染ＣＨＯ细胞，经ＤＭ（３×１０－８ｍｏｌ／Ｌ）诱导后可表达ＮＳ３蛋白，其浓度与时间呈正相关。结论：所得到的表达载体在培养细胞中能够有效地表达。

关键词：丙型肝炎病毒基因3 非结构蛋白基因表达

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