检索结果-内蒙古大学图书馆

血管形成抑制因子tumstatin_(45-132)的基因克隆、表达和生物学活性

细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 141-143页

作者：罗以勤王梁华球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产... 详细信息

　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化***21, 于 42℃进行热诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性。结果: RT- PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致。以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化***21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为 9 600的重组蛋白。表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的 10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖。结论: 成功克隆全长tumstatincDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性。

关键词： tumstatin45-132基因表达生物学活性

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噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 535-543页

作者：徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... 详细信息

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.

关键词：噬菌体展示分子进化结构域组合文库 protein A protein L

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睫状神经营养因子对毒胡萝卜素所致大鼠海马神经元[Ca^(2+)]_i升高的抑制作用

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1057-1060页

作者：王宗文严进李萍路长林蒋春雷倪鑫第二军医大学护理系心理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系航海医学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的抑制作用。方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10~14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/A... 详细信息

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的抑制作用。方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10~14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/AM实时检测[Ca2+]i。实验分3组:A组(n=20),EGTA(3 mmol/L);B组(n=40),EGTA(3 mmol/L)+Tg(10μmol/L);C组(n=12),EGTA(3 mmol/L)+Tg(10μmol/L)+CNTF(500 U/μl)。结果:用足量EGTA螯合细胞外Ca2+后,测得[Ca2+]i≤(30.73±7.25)nmol/L;加入EGTA+Tg后,[Ca2+]i显著升高([Ca2+]i≥[91.55±12.24]nmol/L);加入EGTA+Tg+CNTF后,升高的[Ca2+]i明显降低([Ca2+]i≤[26.09±7.16]nmol/L,P<0.01)。结论:CNTF可明显减弱Tg的钙库质膜钙泵抑制作用,使胞质[Ca2+]i降低。提示CNTF通过增加胞内钙库对细胞内游离Ca2+的吸收作用来降低海马神经元的Ca2+负荷。

关键词：海马神经元睫状神经营养因子毒胡萝卜素钙离子

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基于Cre/loxP系统的糖皮质激素受体基因条件性打靶嵌合鼠的获得

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 290-293页

作者：何志颖姚玉成李建秀王新民胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:应用Cre/loxP系统建立诱导型糖皮质激素受体(GR)基因剔除小鼠模型,为在体内直接进行GR基因的研究提供条件。方法:针对GR基因第2外显子构建诱导型目标载体,将打靶载体电穿孔转染胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),经Southern杂交... 详细信息

目的:应用Cre/loxP系统建立诱导型糖皮质激素受体(GR)基因剔除小鼠模型,为在体内直接进行GR基因的研究提供条件。方法:针对GR基因第2外显子构建诱导型目标载体,将打靶载体电穿孔转染胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),经Southern杂交筛选发生正确同源重组的ES细胞,囊胚注射法制备嵌合体并进行生殖系检测及纯化建系。结果:成功构建了针对GR基因第2外显子的诱导型目标载体,转染ES细胞获得了工程化的ES细胞,经囊胚注射获得了由工程化的ES细胞和体细胞共同发育而来的嵌合体小鼠。结论:基于Cre/loxP系统的GR基因条件性打靶嵌合鼠的获得,为得到理想的诱导型GR基因剔除小鼠模型奠定了基础。

关键词：受估糖皮质激素嵌和体 Cre/loxP系统胚胎干细胞

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转基因操作后小鼠受精卵的移植数量与其胚胎发育率的关系

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 298-299页

作者：李建秀胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:研究不同受精卵移植数量与小鼠胚胎发育率的关系,以提高转基因小鼠制备效率.方法:取正常(共966枚受精卵,分6组,每组10～12例)及已进行显微操作的小鼠受精卵(共2349枚受精卵,分为5组),移入假孕的受体小鼠输卵管内,统计分析其生产率... 详细信息

目的:研究不同受精卵移植数量与小鼠胚胎发育率的关系,以提高转基因小鼠制备效率.方法:取正常(共966枚受精卵,分6组,每组10～12例)及已进行显微操作的小鼠受精卵(共2349枚受精卵,分为5组),移入假孕的受体小鼠输卵管内,统计分析其生产率及得仔率.结果:正常组移植小鼠移植1～5,6～10,11～15,16～20卵组与移植21～25,26～30组比较得仔率高(P＜0.01).转基因组小鼠单侧输卵管内移卵11～15枚或16～20枚的组,其得仔率较其他(移植1～5、6～10、21～25枚各组)高(P＜0.01).结论:受精卵移植数量与转基因小鼠胚胎发育率有关,以一次移卵11～20枚效果最好.

关键词：受精卵移植数量胚胎发育率转基因小鼠

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条件培养液改进小鼠胚胎干细胞嵌合体制备效率的观察

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 294-297页

作者：何志颖王新民李建秀李文林胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率。方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15 代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受... 详细信息

目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率。方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15 代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受体(GR)工程化ES细胞进行培养并筛选,通过囊胚注射制作嵌合体来比较2种不同培养液培养ES细胞后嵌合体制备效率的差别。结果:未工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为25.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到53.8%(P< 0.05);GR工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为15.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到52.3%(P<0.05)。结论:应用TX WES培养液改善小鼠ES细胞的培养条件可提高嵌合体的制备效率,该方法为基因剔除小鼠研究的顺利开展奠定了良好的基础。

关键词：胚胎干细胞 TX-WES培养液嵌合体

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大鼠肝再生时肝PBR、Bcl-2、Bax基因mRNA的表达

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 931-936页

作者：黄鹤任绪义缪明永周运恒王洁王学敏焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨肝细胞线粒体通透性转换(permeabilitytransition,PT)的主要调节蛋白外周型苯二氮类受体(PBR)、Bcl2家族成员Bcl2、Bax在肝再生过程中的表达情况,探讨上述基因表达与线粒体PT的关系。方法:健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组:... 详细信息

目的:探讨肝细胞线粒体通透性转换(permeabilitytransition,PT)的主要调节蛋白外周型苯二氮类受体(PBR)、Bcl2家族成员Bcl2、Bax在肝再生过程中的表达情况,探讨上述基因表达与线粒体PT的关系。方法:健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组:肝切除组,切除肝左叶和中叶部分约全肝的70%;假处理组,同样麻醉和开腹,但不切肝;正常组。手术后3、6、12、24、48、72、120和168h分别以半定量RTPCR法检测PBR、Bcl2、Bax在肝再生过程中mRNA表达的动态变化。结果:肝再生过程中PBR基因表达降低,但与假处理组无显著差异;Bcl2在肝切除后3h和120h表达显著高于对应的假处理组和正常组(P<0.05);BaxmRNA表达低于正常组和假处理组,其中在肝切除后12h和72h时显著低于相应的假处理组(P<0.05)。结论:PBR、Bax、Bcl2在肝再生过程中表达变化可能与线粒体PT时相变化有关。

关键词：肝再生线粒体通透性转换外周型苯二氮Zhuo类受体 Bcl-2 Bax 基因表达

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厚壳贻贝多糖的提取和免疫学活性研究

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 896-899页

作者：姚滢魏江洲王俊张建鹏刘军华冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:深入研究海洋生物多糖的药用价值,对厚壳贻贝多糖进行提取分离和免疫学活性的研究。方法:通过热碱法提取厚壳贻贝多糖粗品,用双蒸水配成三种浓度的厚壳贻贝多糖溶液,然后对其进行正常小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、NK... 详细信息

目的:深入研究海洋生物多糖的药用价值,对厚壳贻贝多糖进行提取分离和免疫学活性的研究。方法:通过热碱法提取厚壳贻贝多糖粗品,用双蒸水配成三种浓度的厚壳贻贝多糖溶液,然后对其进行正常小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、NK细胞活性测定、抗体生成细胞的检测、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞等实验,并用MTT法对荷瘤小鼠进行了脾淋巴细胞增殖活力测定。结果:成功获得厚壳贻贝多糖粗品,呈白色粉末状;各项免疫学活性测定结果表明厚壳贻贝多糖粗品溶液能有效地增加正常小鼠的脾淋巴细胞转化率,增强小鼠迟发型变态反应、NK细胞活性、抗体形成细胞活性、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率(P<0.01),且随多糖溶液浓度增高而增强(各浓度组间相比P<0.01);厚壳贻贝粗品溶液还能非常显著地提高荷瘤小鼠的脾脏细胞的增殖能力(P<0.01)。结论:厚壳贻贝多糖能从细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能及NK细胞活性方面促进正常小鼠的免疫活性作用,并具有明显的抗肿瘤作用。

关键词：厚壳贻贝多糖分离和提纯免疫活性

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基因芯片技术研究神经损伤的进展

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解剖学杂志 2005年第1期28卷 105-107页

作者：蒋平向正华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

1神经损伤研究的现状1.1神经损伤机制及其随后的保护与修复一直是神经科学研究的重点.相当多的基因参与了神经损伤后复杂的基因调控,是分子水平上导致损伤发生及发展的重要因素.因此,研究这些基因参与神经损伤的机理,探寻其在神经损伤... 详细信息

1神经损伤研究的现状1.1神经损伤机制及其随后的保护与修复一直是神经科学研究的重点.相当多的基因参与了神经损伤后复杂的基因调控,是分子水平上导致损伤发生及发展的重要因素.因此,研究这些基因参与神经损伤的机理,探寻其在神经损伤中的相互关系,对于我们了解神经损伤的机制,寻找潜在的基因治疗和药物治疗靶位,有着重要的意义。

关键词：神经损伤基因芯片技术靶位基因治疗药物治疗基因调控修复参与神经科学研究重要因素

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人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38经^(60)Co照射后线粒体量与功能的改变

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 885-887页

作者：孙青菊王学敏朱克军龙建刚缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:检测人胚肺二倍体成纤维细胞WI38受到60Coγ射线照射后线粒体DNA(mtDNA)的相对含量和线粒体功能的改变;探讨γ射线照射后细胞线粒体的变化规律。方法:四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;采用竞争PCR法测定mtDNA的相对含量;荧光染料R12... 详细信息

目的:检测人胚肺二倍体成纤维细胞WI38受到60Coγ射线照射后线粒体DNA(mtDNA)的相对含量和线粒体功能的改变;探讨γ射线照射后细胞线粒体的变化规律。方法:四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;采用竞争PCR法测定mtDNA的相对含量;荧光染料R123和TMRM分别标记,流式细胞仪测定线粒体膜电位的变化;酶标分光仪测定线粒体呼吸链氧化酶NADH氧化酶反应2min内活性变化。结果:与正常细胞相比,60Coγ射线照射后,照射组细胞明显肿胀,变短,边缘不整齐,排列紊乱,数量减少;细胞活力(0.359±0.02)明显低于正常组(0.598±0.03,P<0.05);线粒体膜电位约下降为原来的50%;NADH氧化酶活性也降低,最大反应速度由48.93μmol/(mg·min)降为27.80μmol/(mg·min);以核18SrDNA为内参照,照射组mtDNA相对含量为(1.680±0.082),明显高于正常组的(1.296±0.077)。结论:γ射线照射后,WI38细胞mtDNA相对含量的增高可能是线粒体功能下降的一种代偿性反应。

关键词： WI-38细胞 γ射线 DNA,线粒体膜电位

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