检索结果-内蒙古大学图书馆

人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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严重急性呼吸综合征相关冠状病毒基因组研究的新技术——RNA干扰

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 581-584页

作者：戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

最近 ,严重急性呼吸综合征 (SARS)在全世界约 30个国家和地区散发或流行 ,众多实验室由此展开了针对 SARS病原体的国际联合攻关。目前 ,已经确认其病原体是一种新型冠状病毒 (命名为 SARS- Co V) ,而且该病毒的全基因组测序已经完成。... 详细信息

最近 ,严重急性呼吸综合征 (SARS)在全世界约 30个国家和地区散发或流行 ,众多实验室由此展开了针对 SARS病原体的国际联合攻关。目前 ,已经确认其病原体是一种新型冠状病毒 (命名为 SARS- Co V) ,而且该病毒的全基因组测序已经完成。采用现代分子病毒学实验技术对 SARS病毒的功能基因组进行深入研究 ,有重要的理论和实际意义。作为一种崭新的基因沉默技术 ,RNA干扰无疑将在 SARS病毒基因组研究中发挥重要的作用。

关键词：严重急性呼吸综合征非典型肺炎冠状病毒基因组 RNA干扰测序现代分子病毒学实验技术

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幼龄和老龄大鼠液压脑损伤后NGF、Bcl-2、Bax蛋白的表达

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第二军医大学学报 2003年第5期24卷 496-498页

作者：高进喜卢亦成江基尧由振东何成第二军医大学长征医院神经外科上海200003 基础医学部神经生物学教研室

目的:研究衰老因素对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达的影响,探讨老年颅脑损伤恢复不良的分子生物学机制。方法:采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化方法和计算机显微图像分析技术,比较幼... 详细信息

目的:研究衰老因素对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达的影响,探讨老年颅脑损伤恢复不良的分子生物学机制。方法:采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化方法和计算机显微图像分析技术,比较幼龄(2～3个月)和老龄(15个月)大鼠脑损伤后12 h脑内NGF、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的差异。结果:液压打击伤后NGF、Bcl-2、Bax蛋白在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,老龄组大鼠伤侧皮质NGF蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白表达比率显著低于幼龄组(P<0.05)。结论:老龄和幼龄大鼠液压脑损伤后NGF、Bcl-2和Bax蛋白表达的差异提示老龄哺乳动物受损神经元修复和生存能力下降,为认识创伤性脑损伤后年龄相关性神经功能缺失的病理生理学机制提供了帮助。

关键词：衰老颅脑损伤神经生长因子 Bcl—2 Bax 凋亡相关基因

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Oct4调节胚胎干细胞全能性扩增的研究进展

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 963-965页

作者：刘善荣刘厚奇戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

Oct4是一种POU转录因子,属于Ⅴ类POU蛋白,在小鼠全能胚胎干细胞和生殖系干细胞表达.在早期鼠胚中,只有在ICM变成滋养层阶段,Oct4为维持其全能表型而发挥作用.Oct4表达可能是由位置效应引起的,还与特异调节Oct4活性的元件,如近端、远端... 详细信息

Oct4是一种POU转录因子,属于Ⅴ类POU蛋白,在小鼠全能胚胎干细胞和生殖系干细胞表达.在早期鼠胚中,只有在ICM变成滋养层阶段,Oct4为维持其全能表型而发挥作用.Oct4表达可能是由位置效应引起的,还与特异调节Oct4活性的元件,如近端、远端增强子元件有关.Oct4对转录的调节分为抑制转录和转录激活两种.Oct4的激活有3种模式:远端依赖性共激活,构象依赖性共激活,Oct4聚合体依赖性共激活.

关键词： Oct4 胚胎干细胞全能性扩增综述文献

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哺乳动物生殖细胞的形成、性分化和永生化

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 960-962页

作者：刘善荣胡凯猛刘厚奇戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定.体外培养时原始生殖细胞可大量增殖,现在已经建立了人类EG细胞株,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力,它可分化为某些特定的细胞类型,在临床上对... 详细信息

小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定.体外培养时原始生殖细胞可大量增殖,现在已经建立了人类EG细胞株,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力,它可分化为某些特定的细胞类型,在临床上对退行性疾病的治疗有一定的意义.

关键词：原始生殖细胞性分化永生化综述文献

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人胚胎多能干细胞研究中的几个问题

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 933-936页

作者：刘善荣戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨... 详细信息

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨其中的机制和可能的关键因子;干细胞培养时主要进行简化培养体系和抑制细胞分化的研究;对干细胞分化进行临床应用研究时,主要将多种方法联合应用来诱导和筛选目的细胞并对其形态和功能进行评价.

关键词：胚胎多能干细胞

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Ir-MEK/ir-LEK在N-硝基-L-精氨酸抑制吗啡耐受形成中的作用

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中国药理学通报 2003年第1期19卷 119-120页

作者：万兴旺黄矛何雅琴万丽李万亥由振东路长林第二军医大学东方肝胆外科医院国际合作生物信号转导研究中心上海200438 第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 第二军医大学长海医院药学部上海200433 第二军医大学药学院药理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

长期应用阿片类镇痛药将导致药物耐受。由于患者对阿片类药物耐受进而造成臧瘾所带来的公共卫生和社会问题日益突出~[1]。N-硝基-L-精氨酸（NO_[2]Arg）是一种经典的一氧化氮合成酶抑制剂~[2]。有研究表明NO_[2]Arg可抑制吗啡镇痛耐受... 详细信息

长期应用阿片类镇痛药将导致药物耐受。由于患者对阿片类药物耐受进而造成臧瘾所带来的公共卫生和社会问题日益突出~[1]。N-硝基-L-精氨酸（NO_[2]Arg）是一种经典的一氧化氮合成酶抑制剂~[2]。有研究表明NO_[2]Arg可抑制吗啡镇痛耐受的形成~[3]，然而关于其作用机制目前还未见文献报道。本文采用剂量递增法模拟临床阿片类药物耐受形成，利用放射免疫法测定大鼠积压脑分区、脊髓和血浆中甲硫脑啡肽（ir-MEK）、亮脑啡肽（ir-LEK）含量，以探讨内源性脑啡肽系统在NO_[2]Arg抑制吗啡镇痛耐受形成中的作用。

关键词： Ir-MEK/ir-LEK N-硝基-L-精氨酸吗啡耐受吗啡一氧化氮脑啡肽

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内源性阿片肽在正常妊娠和分娩中的变化

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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 311-313页

作者：胡电古航洪新如刘彦金志军王成海曹立萍第二军医大学长征医院妇产科上海200003 长海医院妇产科第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :观察内源性阿片肽在正常妊娠及分娩各阶段含量的变化规律。方法 :采用神经肽放射免疫测定方法 ,测定5 0例正常未孕妇女 (对照组 )、4 5例正常妊娠妇女 (早孕、中孕及晚孕 3个时间段 )、4 5例正常平产妇女 (潜伏期、活跃期及分娩... 详细信息

目的 :观察内源性阿片肽在正常妊娠及分娩各阶段含量的变化规律。方法 :采用神经肽放射免疫测定方法 ,测定5 0例正常未孕妇女 (对照组 )、4 5例正常妊娠妇女 (早孕、中孕及晚孕 3个时间段 )、4 5例正常平产妇女 (潜伏期、活跃期及分娩即刻 3个时间段 )和 4 5例产后妇女 (2h、2 4h 2个时间点 )血浆中 3种内源性阿片肽 (β 内啡肽、强啡肽A1 13 及亮啡肽 )含量的变化。结果 :妊娠、分娩不同阶段 ,血浆中 3种内源性阿片肽含量均有不同程度的变化 ;β 内啡肽含量在妊娠期略有上升 ,分娩期开始显著增高 ,至分娩即刻升到最高 ,升高程度是 3种肽中最高的且产后 2 4h降至正常 ;强啡肽A1 13 含量从晚期妊娠开始显著升高 ,并上升至分娩即刻 ,分娩后渐下降 ,整个变化趋势平稳 ;亮啡肽含量在早孕时显著升高 ,而中、晚期降至正常 ,直至分娩即刻时再次显著升高 ,产后 2 4h继续上升至最高。结论 :内源性阿片肽在正常妊娠及分娩各时期有着重要的调节功能。

关键词： β-内啡肽强啡肽A1-13 亮啡肽内源性阿片肽妊娠分娩

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镉诱导大鼠睾丸三种类型细胞和肝脏金属硫蛋白基因表达的研究

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 184-187页

作者：张建鹏仲燕任绪义周雍冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半... 详细信息

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半定量 RT- PCR、EL ISA、原子分光光度吸收法 ,观察镉处理后不同时相大鼠睾丸三种类型细胞与肝脏 MT基因表达的变化。结果 :睾丸组织中存在 MT。同时还发现 0 h对照组大鼠镉处理后肝脏 MT m RNA增加并保持较高的基础水平 ,3h达峰值后下降 ;而睾丸支持细胞和间质细胞则在 6 h达高峰。镉中毒大鼠睾丸支持细胞和肝脏 MT1m RNA的变化幅度要低于MT2 m RNA,而在间质细胞中则相反。此外 ,生精细胞 MT1m RNA在镉处理后 0～ 3h减少 ,然后增加 ,而 MT2 m RNA的变化则相反 ,而且它们的诱导变化幅度较其他细胞低。镉暴露后肝脏 MT m RNA和 MT均升高 ,但在睾丸三种类型细胞中 MT的表达并没有增加。结论 :镉诱导后 MT m RNA的表达具有细胞和时间依赖性 ;镉虽然能诱导睾丸 MT m RNA的转录但没有促进其 MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸间质细胞生精细胞肝脏

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细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1095-1098页

作者：张弛王梁华罗以勤张兴群高云史薇包晨颖球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合... 详细信息

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal114组共转化后呈阴性。结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。

关键词：细菌双杂交系统细胞外蛋白质相互作用临床应用可行性 TNF相关凋亡诱导配体质粒构建

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