检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第1期23卷 64-66页

作者：周雍金慧英冯伟华胡惠民郑尊印木泉第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝... 详细信息

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝、睾丸两器官均发生严重的氧化损伤 ,细胞的抗氧化能力明显降低。但两者的变化规律不同 :肝脏在 6 h组 MT大量表达 (达正常值的 6 .7倍 )后 ,上述损伤逐渐减轻 ;而睾丸 MT表达的氧化损伤尽管在前 3h并不严重 ,但此后不断加剧。结论 :急性镉中毒时睾丸与肝氧化损伤规律明显不同 ,MT在睾丸中不能被诱导表达是睾丸对镉极其敏感的原因之一。

关键词：镉中毒氧化还原金属硫蛋白大鼠睾丸损伤

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小鼠受精卵显微操作方法的改进

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第二军医大学学报 2002年第9期23卷 1032-1033页

作者：李建秀胡卫江胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学实验动物中心

目的 :改进小鼠受精卵显微操作方法 ,提高小鼠受精卵的存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。方法 :以一定长度大小及浓度的 DNA片段为材料 ,分别进行常规及改进的显微操作后 ,统计分析受精卵存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。结果 :经改... 详细信息

目的 :改进小鼠受精卵显微操作方法 ,提高小鼠受精卵的存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。方法 :以一定长度大小及浓度的 DNA片段为材料 ,分别进行常规及改进的显微操作后 ,统计分析受精卵存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。结果 :经改进后缩短操作时间的显微操作法与常规显微操作法相比 ,小鼠受精卵的存活率由 6 0 .3%提高至 79.5 %、假孕母鼠生产率由 35 .7%提高至 5 6 .8%、得仔率由 10 .1%提高至 14.1%,均有显著差别 (P<0 .0 1)。结论 :改进的显微操作法可推广应用于常规的转基因小鼠制备。

关键词：受精卵存活率生产率得仔率显微操作法

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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a研究的综合报告

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 121-124页

作者：焦炳华娄永华王梁华朱玉平周丙荣第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物 3a(rh- TNFα- D3a)研究开发为临床新药。方法 :与野生型 TNFα比较 ,采用动物体内抑瘤试验测定其 ED50 ;急性毒性试验测定 L D50 ;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发... 详细信息

目的 :将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物 3a(rh- TNFα- D3a)研究开发为临床新药。方法 :与野生型 TNFα比较 ,采用动物体内抑瘤试验测定其 ED50 ;急性毒性试验测定 L D50 ;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发生的程度 ; 期临床试验观察人体可耐受的安全剂量 ; - 期临床试验观察其对肿瘤患者的临床疗效。结果 :rh- TNFα-D3a体内抑瘤的 ED50 为其野生型的 2 / 3;L D50 为野生型的 11倍 ;恒河猴长期毒性的安全剂量为日本同类产品 PT0 5 0的 6 4倍 ; 期临床试验表明 ,≤ 2× 10 6 IU/ (m2· d)× 7d为人体可耐受的安全剂量 ,本品与野生型药物比较 ,其毒性反应的发生率及反应程度远远降低 ; - 期临床试验表明 ,胸腔内注射对恶性胸水 ,静脉途径对多种实体瘤包括恶性淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑素瘤和肾癌等均有较好的疗效。结论 :研制新一代高效。

关键词：抗肿瘤药临床试验重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a rh-TNFα-D3a

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人肝癌SMMC-7721细胞热休克反应条件的确立

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 920-921页

作者：徐晓辉王学敏谭金兴徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

热休克反应在生物界广泛存在，热休克时细胞变化的机制是当前研究的一个重要领域。本实验在热休克反应时糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）减少机制的研究中，确立了人肝癌SMMC-7721细胞的热休克反应条件。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应细胞培养肝肿瘤糖皮质激素

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重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a的克隆与表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 125-128页

作者：娄永华焦炳华周丙荣王梁华余伟民朱玉平第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p B... 详细信息

目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- TNFα- D3a的工程菌。结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 TNFα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- TNFα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 >98%。 rh- TNFα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- TNFα相比 ,rh- TNFα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 TNFα的抗肿瘤活性。结论 :rh- TNF-αD3a是一个毒性较低。

关键词：点突变聚合酶链反应重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a 克隆 rh-TNF α-D3a

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重组人可溶性THANK在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 143-146页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PC... 详细信息

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PCR产物克隆于 p MD- 18T,经 DNA测序证实后亚克隆到 p ET- 11a中。重组质粒转化 BL 2 1,以 1m mol/ LIPTG进行诱导表达产物 ,SDS- PAGE分析表达产物 ,对重组蛋白经纯化复性后测定生物学活性。结果 :RT- PCR扩增出编码人 THANK全长编码基因及 PCR扩增出 THANK1 34 - 2 85基因的 c DNA ,经序列分析证实与文献报道完全一致。含有THANK1 34 - 2 85编码基因的表达载体 ,转化大肠杆菌后表达出相对分子质量约 180 0 0的重组蛋白。该重组蛋白经纯化后能够诱导 U937细胞凋亡。结论 :成功克隆了人 THANK基因 ,并在大肠杆菌中表达重组可溶性 THANK,该重组蛋白在实验条件下具有诱导 U937细胞凋亡的作用。

关键词： TNF超家族 RT-PCR 基因克隆基因表达肿瘤重组人可溶性THANK 大肠杆菌

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高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 254-256页

作者：张志珍毛积芳杨生生窦鸿第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶... 详细信息

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P-

关键词：高密度培养人胰高血糖素样肽-1 基因表达融合蛋白质类大肠杆菌强降血糖肽

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重组人可溶性VEGI在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 140-142页

作者：娄永华焦炳华肖扬朱玉平王梁华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DN... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DNA测序证实后亚克隆入高表达载体 p L OU- 1,转化大肠杆菌 BL 2 1,获得高表达菌株。经 IPTG诱导获得高表达 ,纯化表达产物并检测其对内皮细胞 ECV30 4增殖的抑制活性。结果 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,约占细菌总蛋白的 4 0 % ;纯化的重组蛋白经复性后具有直接抑制内皮细胞增殖的活性。结论 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,且表达的重组蛋白具有抑制内皮细胞生长作用。

关键词：血管内皮聚合酶链反应血管生长抑制因子基因表达重组人可溶性VEGI 大肠杆菌

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外周血单核细胞LIGHT的诱导表达及基因克隆

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 129-131页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因... 详细信息

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因转录表达。采用 PCR产物直接克隆法克隆人全长 L IGHT基因及其胞外区编码基因 ,并对胞外区编码基因进行大肠杆菌表达。结果 :当用 IFN-γ和 PMA刺激 PMBC后 4 8h,可诱导 L IGHT基因的明显表达 ,而 L PS、IL - 2和 TNFα则不能诱导。克隆的人 L IGHT全长基因及 L IGHT胞外区编码基因 ,经过 DNA序列测定证实基因序列与文献报道一致。 L IGHT基因胞外区在大肠杆菌获得一定程度的表达。结论 :本研究对人 L IGHT基因及其胞外区编码基因进行了克隆和表达。

关键词： LIGHT TNF超家族外周血单核细胞 RT-PCR 基因克隆基因表达

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胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 153-155,F003页

作者：鲁凯伍陈哲宇侯铁胜傅强曹莉金大地第二军医大学长海医院骨科上海200433 基础医学部神经生物学教研室第一军医大学南方医院脊柱骨病科

目的 :观察外源性胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响。方法 :利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。蛛网膜下腔置管至损伤局部 ,连续 1周给予 GDNF。应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶... 详细信息

目的 :观察外源性胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响。方法 :利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。蛛网膜下腔置管至损伤局部 ,连续 1周给予 GDNF。应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经中丝 (NF)免疫组化活性的变化来评价外源性 GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响。结果 :脊髓损伤后 4周 GDNF治疗组 GFAP表达较对照组明显减少 ,NF标记轴突数显著多于对照组 ,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端 0 .5 cm。结论 :外源性 GDNF局部给药能减少胶质细胞增生 ,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复。

关键词：脊髓损伤胶质细胞源性神经营养因子轴突神经再生皮质脊髓束再生

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