检索结果-内蒙古大学图书馆

2007两岸三地博士生NBIC学术论坛

作者：杨桥张晓玲张俊祥方呈祥病毒学国家重点实验室武汉大学生命科学学院湖北武汉430072 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 污染环境修复与生态健康教育部重点实验室浙江大学环境与资源学院浙江杭州310029 病毒学国家重点实验室武汉大学生命科学学院湖北武汉430072

为研究耐辐射奇球菌△ειυοχοχχυσ ραδουραυσ所产类胡萝卜素在该细菌超强抗辐射特性中的作用机制，本研究提取了该细菌培养48小时所产类胡萝卜素，高效液相色谱分析了其主要组分。通过(「)原噬菌体紫外诱导系统和电... 详细信息

为研究耐辐射奇球菌△ειυοχοχχυσ ραδουραυσ所产类胡萝卜素在该细菌超强抗辐射特性中的作用机制，本研究提取了该细菌培养48小时所产类胡萝卜素，高效液相色谱分析了其主要组分。通过(「)原噬菌体紫外诱导系统和电子自旋共振(EΠP)及自旋捕捉技术，分别在体内和体外直接测定了其类胡萝卜素对自由基的强清除和抗氧化作用。结果表明，该菌所含主要类胡萝卜素为两种，含量分别为46％和38％。其对于(「)原噬菌体紫外诱导系统的抑制作用分别达到85％和34％，该结果和EΠP的直接测定结果相一致。本研究为揭示内源性类胡萝卜素在该细菌超强辐射抗性中的生物功能提供了直接试验证据。

关键词：耐辐射奇球菌抗辐射类胡萝卜素自由基

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利用载体介导的RNA干扰技术抑制人骨肉瘤细胞HOS-8603内维生素D_3受体的表达及功能

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1076-1080页

作者：张晔朱晓燕刘宇健卢建第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 基础医学部生理学教研室

目的:构建由载体介导的抑制人维生素D3受体(VDR)表达的RNA干扰载体,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对VDR表达及功能的影响。方法:通过在线筛选设计了两段针对人VDR的RNAi序列,并与载体pSilencer-2.1-U6连接,获得了表达载体pSilencer-2.1-... 详细信息

目的:构建由载体介导的抑制人维生素D3受体(VDR)表达的RNA干扰载体,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对VDR表达及功能的影响。方法:通过在线筛选设计了两段针对人VDR的RNAi序列,并与载体pSilencer-2.1-U6连接,获得了表达载体pSilencer-2.1-U6-VDR1与pSilencer-2.1-U6-VDR2。利用脂质体转染法分别转入人骨肉瘤细胞系HOS-8603细胞中,通过Western印迹法检测其对内源性VDR蛋白表达、对1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]激活PKC作用的影响,利用细胞计数和MTT的方法检测其对1,25(OH)2D3抑制HOS-8603细胞增殖作用的影响。结果:在分别转染pSilencer-2.1-U6-VDR1/2的HOS-8603细胞中,与对照细胞比较,内源性VDR蛋白的表达、1,25(OH)2D3对细胞的增殖抑制作用以及1,25(OH)2D3快速诱导PKC磷酸化的作用均有显著降低。结论:构建的表达载体pSilencer 2.1-U6-VDR1与pSilencer 2.1-U6-VDR2均能在细胞水平显著抑制内源性VDR基因的表达,并能有效阻断一些由VDR介导的1,25(OH)2D3生物学作用,为进一步研究VDR与维生素D3的功能提供了一个有用工具。

关键词： RNA干扰骨肉瘤受体,维生素D3

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应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

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海洋生命活性物质和海洋药物的研究与开发

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 5-7页

作者：焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

海洋是生物资源的巨大宝库,地球上约80%的物种栖息在海洋中。由于特殊的生存环境,海洋生物可合成与陆地生物结构不同的、活性不一的代谢产物,为新药的研究与开发提供了大量的先导化合物。在过去的几十年间,全球范围内已从海洋动、植物... 详细信息

海洋是生物资源的巨大宝库,地球上约80%的物种栖息在海洋中。由于特殊的生存环境,海洋生物可合成与陆地生物结构不同的、活性不一的代谢产物,为新药的研究与开发提供了大量的先导化合物。在过去的几十年间,全球范围内已从海洋动、植物及微生物中分离得到15 000多个化合物,其中头孢霉素、芋螺毒素、阿糖胞苷和阿糖腺苷等4个药物均是以海洋来源先导化合物为基础开发成功的。

关键词：海洋生物学海洋药化合物活性物质

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大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化

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第二军医大学学报 2006年第5期27卷 500-502页

作者：周运恒缪明永李洋时多黄鹤王学敏焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化规律。方法:雄性SD大鼠70%肝切除(PH),制作肝再生模型,制备肝匀浆液,经离心后用酶标仪分别测定肝再生过程中不同时期(共8个时间点),肝细胞的凋亡酶活性。结果:Caspase-3... 详细信息

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化规律。方法:雄性SD大鼠70%肝切除(PH),制作肝再生模型,制备肝匀浆液,经离心后用酶标仪分别测定肝再生过程中不同时期(共8个时间点),肝细胞的凋亡酶活性。结果:Caspase-3活性,与对照组相比,在PH后3、6、72、120和168 h时显著性增高(P<0.001);而整个过程中Caspase-8的活性除了在PH后168 h时高于对照组外(P<0.05),其余时间点没有明显增高。结论:肝再生过程中肝细胞凋亡酶Caspase-3活性的升高可能主要是由内源性线粒体途径引起的。

关键词：肝再生肝细胞 caspase-3 caspase-8

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贻贝多糖MPs的制备、组分鉴定和免疫学活性研究

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 12-16页

作者：王俊徐红丽张建鹏刘军华冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:分离纯化厚壳贻贝(Mytilus coruscus)多糖MPs,并测定其纯度和单糖组分。方法:用组织匀浆后热水抽提,Sevage法除蛋白,乙醇沉淀,再经DEAE-cellulose 52、Sephacryl S-200柱层析和高效液相色谱(HPLC),分离纯化得到贻贝多糖MPs。分离... 详细信息

目的:分离纯化厚壳贻贝(Mytilus coruscus)多糖MPs,并测定其纯度和单糖组分。方法:用组织匀浆后热水抽提,Sevage法除蛋白,乙醇沉淀,再经DEAE-cellulose 52、Sephacryl S-200柱层析和高效液相色谱(HPLC),分离纯化得到贻贝多糖MPs。分离到多糖粗品行全波段的最大吸收波长光谱扫描、硫酸-苯酚比色法测定糖含量;经紫外光谱扫描分析、红外光谱扫描分析、染料结合比色法、HPLC鉴定其纯度,再经气相色谱(GC)进行单糖组分分析。纯化得到纯品进行免疫学活性测定。结果:经分离纯化获得贻贝多糖纯品多个组分MPs-A1/A2/B1/B2/B3/C1/C2/C3,其中MPs-B1纯度较高,相对分子质量为3 510 000,主要含有葡萄糖、半乳糖2种单糖组分,二者比例接近1∶1,1HNMR表明为α-吡喃己糖。MPs-B1增强小鼠NK细胞活性、抗体形成细胞活性、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活性。结论:经工艺改进后获得的MPs-B1与同类和前期研究所报道的贻贝多糖在理化性质、含糖量、单糖组分上均有显著区别。MPs-B1具有正向免疫调节作用。

关键词：厚壳贻贝多糖类分离提纯免疫活性

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东海微生物中6种环二肽类天然活性物质的分离和鉴定

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 22-24页

作者：艾峰许强芝杨妤刘小宇施晓琼宋志刚焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:从海洋微生物中寻找天然活性物质。方法:利用稻瘟霉作为菌株筛选模型,对筛选出来的活性菌株F8712发酵液的醋酸乙酯提取物进行化合物分离;通过1HNMR1、3CNMR和ESI-MS对化合物进行结构鉴定。结果和讨论:鉴定了6个环二肽类化合物,它... 详细信息

目的:从海洋微生物中寻找天然活性物质。方法:利用稻瘟霉作为菌株筛选模型,对筛选出来的活性菌株F8712发酵液的醋酸乙酯提取物进行化合物分离;通过1HNMR1、3CNMR和ESI-MS对化合物进行结构鉴定。结果和讨论:鉴定了6个环二肽类化合物,它们分别为环[Ala-Leu](Ⅰ),环[Ala-Ile](Ⅱ),环[Val-Pro](Ⅲ),环[Leu-Pro](Ⅳ),环[Ile-Pro](Ⅴ)和环[Leu-Val](Ⅵ)。这些环二肽都没有抗稻瘟霉活性,化合物Ⅴ对鳗弧菌(Vibrio anguillarm)具有较强的抑制能力,其MIC为0.07μg/ml。

关键词：环二肽海洋生物学稻瘟霉鳗弧苗分离鉴定东海

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人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38年轻和衰老细胞中线粒体量和mtDNA相对含量以及功能变化的比较

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第二军医大学学报 2006年第12期27卷 1290-1294页

作者：孙青菊龙建纲汪振诚缪明永王学敏第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38,比较年轻和衰老细胞中线粒体量和线粒体DNA(mtDNA)相对含量的变化,以及线粒体功能的改变,探讨线粒体与衰老的关系。方法培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38;四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;差速离心... 详细信息

目的培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38,比较年轻和衰老细胞中线粒体量和线粒体DNA(mtDNA)相对含量的变化,以及线粒体功能的改变,探讨线粒体与衰老的关系。方法培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38;四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;差速离心分离线粒体,BCA-100Pr定量试剂盒测定线粒体蛋白的含量;竞争PCR法分析mtDNA的相对含量;流式细胞仪测定线粒体膜电位的变化;分光光度法测定线粒体呼吸链氧化酶-NADH氧化酶活性。结果衰老细胞较年轻细胞形成单层时间明显延长,细胞圆缩蜕变,细胞活力明显低于年轻细胞;线粒体膜电位约下降为原来的50%;NADH氧化酶活性也降低,最大反应速度由66.73nmol/(mgprotein·min)降为36.01nmol/(mgprotein·min);衰老细胞线粒体蛋白含量(0.78±0.02mg/ml)高于年轻细胞(0.56±0.03mg/ml);以核18SrDNA为内参,衰老细胞mtDNA相对含量(1.557±0.072)明显高于年轻细胞(1.292±0.068)。结论衰老细胞中,线粒体量和mtDNA相对含量的增高可能是功能下降的一种代偿性反应,为探讨线粒体与衰老的关系提供一定参考。

关键词： WI-38细胞线粒体 DNA 线粒体衰老

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人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体基因表达的研究

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第二军医大学学报 2006年第1期27卷 46-50页

作者：王洁王学敏龙建纲于军汪振诚焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体DNA(mtDNA)基因表达的情况。方法:根据人线粒体DNA(mtDNA)基因序列,利用primer premier 5.0生物软件设计了4对PCR引物,分别是扩增D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6、16sRNA基因,采用RT-PCR方法对SMMC-7721细胞线粒体DNA上D-loop区及其他3个基因的表达进行了检测,并与其在正常人肝细胞株(L02)线粒体中的表达作了比较。结果:我们发现,与正常人肝细胞株(L02)相比,在SMMC-7721细胞中,D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6基因表达总体是增高的,16sRNA基因表达基本不变,同时在同一基因两条链(重链和轻链)之间的表达也存在差异。结论:我们认为,由于线粒体DNA编码的多肽均是氧化磷酸化酶复合物的亚单位,这些基因表达的异常可能造成细胞对氧利用障碍,细胞能量产生减少,成为造成SMMC-7721细胞主要以糖酵解的方式提供能量的重要原因之一。

关键词： DNA 线粒体基因表达肝肿瘤细胞株

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CNTF非经典信号传导途径的神经保护功能

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科学通报 2006年第2期51卷 161-165页

作者：李萍王宗文严进李兆申蒋春雷倪鑫杨勇冀刘芳路长林第二军医大学心理学教研室上海200433 第二军医大学长海医院上海200433 第二军医大学应激医学实验室上海200433 第二军医大学基础医学部上海200433

先前我们曾提出,在已知的CNTF信号传导通路上游可能存在新途径介导其神经保护作用.运用原代培养大鼠海马神经元、活细胞连续照相、活细胞计数、活细胞内游离[Ca2+]测定及gp130免疫组化等方法,以Glu离子型受体激动剂L-NMDA诱发海马神经... 详细信息

先前我们曾提出,在已知的CNTF信号传导通路上游可能存在新途径介导其神经保护作用.运用原代培养大鼠海马神经元、活细胞连续照相、活细胞计数、活细胞内游离[Ca2+]测定及gp130免疫组化等方法,以Glu离子型受体激动剂L-NMDA诱发海马神经元损伤为细胞损伤模型,用JAK/STATs阻断剂PTPi-2阻断CNTF已知的经典信号传导途径,观察CNTF非经典信号传导途径的神经保护功能,并探讨其可能机制.结果表明,L-NMDA可引起海马神经元的损伤反应,CNTF可有效抑制L-NMDA对神经元的毒性作用;使用PTPi-2阻断已知的CNTF经典信号传导途径中JAK/STATs后,CNTF保护海马神经元抵抗L-NMDA的损伤作用仍然存在.L-NMDA可引起海马神经细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)迅速升高,CNTF可显著减弱L-NMDA引起的[Ca2+]i升高,阻断CNTF的经典信号传导途径中JAK/STATs并不影响L-NMDA引起的[Ca2+]i升高,表明除了已知的经典信号传导通路,CNTF发挥保护海马神经元作用还有其他信号传导途径,这一途径与胞内[Ca2+]有关.

关键词： CNTF L-NMDA 海马神经元 JAK/STATs PTPi-2 NMDA受体 [Ca^2+]

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