检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2006年第1期27卷 8-11页

作者：穆军焦炳华孙炳达刘杏忠第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学国家重点实验室北京100080

目的：从中国东海分离筛选活性海洋微生物，进而确定所获取的活性菌株的分类地位。方法：乘坐专业考察船只在中国东海海域进行系统采样，采用抗菌模型和细胞毒模型进行活性筛选。对获取的活性菌株进行形态特征研究、盐需求测试、核糖体r... 详细信息

目的：从中国东海分离筛选活性海洋微生物，进而确定所获取的活性菌株的分类地位。方法：乘坐专业考察船只在中国东海海域进行系统采样，采用抗菌模型和细胞毒模型进行活性筛选。对获取的活性菌株进行形态特征研究、盐需求测试、核糖体rDNA ITS区序列分析，并将所测得序列在NCBI数据库中进行相似性搜索，选取其中相似性较高的序列以邻接法构建系统进化树，将该菌株分类鉴定到种。结果：从我国东海海域C01站位（122°26′30″，30°43′48″）30m水深处分离获得一活性菌株XD20，是一嗜盐菌株，能耐受高达10．0％的盐浓度，合适的生长盐浓度范围为2．5％～7．5％；它对白念珠菌具有抑菌活性，对SMMC7721细胞株和HeLa细胞株具有细胞毒活性。以菌丝断裂方式产生节孢子，孢子大小及形态与Wallemia sebi相符；rDNAITS区测序发现，该菌株序列与Wallemia sebi的多条序列相似程度较高，且差异均在ITS1和ITS2区，属于可变区。结论：活性菌株XD20首次从海洋中分离获得，为一嗜盐海洋菌株，鉴定为Wallemia sebi（Fr．）Arx。

关键词：海洋嗜盐菌抗真菌活性细胞毒活性 XD20 海洋微生物

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表皮生长因子受体与Dok1 PTB结构域结合关键位点的确定

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郑州大学学报（医学版） 2006年第6期41卷 1107-1109页

作者：阎志勇蔡太生张勇汤善均路长林何成郑州大学基础医学院人体解剖学教研室郑州450052 鹤壁职业技术学院医学院鹤壁458000 第二军医大学神经生物学教研室上海200433

目的确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点。方法合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽。结果pY1086或... 详细信息

目的确定表皮生长因子受体(EGFR)与Dok1PTB结构域结合的关键氨基酸残基位点。方法合成包含磷酸化的酪氨酸残基的EGFR胞内域的5个小肽片段,利用谷胱苷肽S转移酶共沉淀技术确定能够抑制Dok1PTB结构域与激活的EGFR结合的小肽。结果pY1086或pY1148小肽能抑制激活的EGFR与Dok1PTB结构域的结合。结论pY1086和pY1148是激活的EGFR与Dok1PTB结构域结合的关键位点。

关键词： EGFR Dok1 谷胱苷肽-S转移酶共沉淀

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吲哚胺2,3双加氧酶基因修饰的DCs对同种异基因T细胞增殖反应的抑制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2006年第5期13卷 371-375页

作者：张文颖楼国良史平周俊平王梁华焦炳华解俊第二军医大学附属长海医院特需诊疗科上海200433 第二军医大学基础医学部生化与分子生物学教研室上海200433 达拉特旗人民医院心电图室内蒙古鄂尔多斯014300

目的探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3dioxygenase,IDO)基因修饰的树突状细胞(dendriticcells,DCs)在体外对造血干细胞移植物中异基因T细胞增殖反应的抑制作用。方法用携带IDO基因的重组腺病毒转染BALB/c小鼠(受体)骨髓来源的DCs,... 详细信息

目的探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3dioxygenase,IDO)基因修饰的树突状细胞(dendriticcells,DCs)在体外对造血干细胞移植物中异基因T细胞增殖反应的抑制作用。方法用携带IDO基因的重组腺病毒转染BALB/c小鼠(受体)骨髓来源的DCs,用RT-PCR法检测DCs表面IDO的表达,用流式细胞术分析IDO基因修饰前后DC表型的变化,并把IDO-DC与C57BL/6小鼠(供体)脾脏来源的T淋巴细胞共培养,通过混合淋巴细胞培养等方法检测异基因T细胞的特异性反应性和诱导T细胞凋亡的情况。结果用腺病毒载体携带的IDO基因转染DCs后,DCs可有效表达IDO,且没有影响DC的表型;IDO基因修饰的DCs可抑制异基因T细胞的增殖反应,同时可诱导异基因反应性T淋巴细胞的凋亡。结论在体外,IDO基因修饰的DCs可抑制移植物中异基因T淋巴细胞的增值反应。移植用该种方法处理过的骨髓,可能会预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生。

关键词：吲哚胺2,3双加氧酶树突状细胞移植物抗宿主病

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中国南海海绵提取物-renierol抗痛风作用的实验研究

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中国海洋药物 2006年第5期25卷 25-27页

作者：尚雁君郭跃伟黄才国贾睿许强智魏善建焦炳华上海第二军医大学基础医学部生物化学及分子生物学教研室上海200433 中科院上海药物所上海201203

目的探讨中国南海海绵提取物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及对小鼠高尿酸血症的影响和可能的作用机理。方法从海绵中分离提取renierol成分,采用尿酸生成法和超氧离子致NBT显色法测定黄嘌呤氧化酶活性,并进一步研究其作用机理。结... 详细信息

目的探讨中国南海海绵提取物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及对小鼠高尿酸血症的影响和可能的作用机理。方法从海绵中分离提取renierol成分,采用尿酸生成法和超氧离子致NBT显色法测定黄嘌呤氧化酶活性,并进一步研究其作用机理。结果两种实验显示其对黄嘌呤氧化酶有明显的抑制作用,IC50分别为1.85和1.36μ***-1。结论该海绵中renierol成分能有效抑制黄嘌呤氧化酶。

关键词： Haliclona sp 海绵黄嘌呤氧化酶超氧离子痛风

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新生大鼠海马神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定

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国际脑血管病杂志 2006年第2期14卷 107-109页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴重庆医科大学附属第二医院神经内科 400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果... 详细信息

目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果:从新生大鼠海马分离的细胞呈巢蛋白免疫阳性并能在体外传代培养和连续形成克隆;血清诱导分化后的细胞可分别表达神经元和星形胶质细胞的特异性抗原β-微管蛋白Ⅲ和神经胶质原纤维酸性蛋白。结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,说明新生大鼠海马存在神经干细胞,并可用于进一步的实验研究。

关键词：神经干细胞分离培养分化鉴定大鼠

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低剂量镉处理后大鼠睾丸差异表达基因的cDNA微阵列分析

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癌变．畸变．突变 2006年第2期18卷 84-87页

作者：张建鹏任绪义郭婷婷冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海水产大学生命科学与技术学院上海200090

背景与目的深入探讨睾丸镉毒性机制。材料与方法应用cDNA微阵列分析和实时定量PCR技术对低剂量镉处理后大鼠睾丸组织基因表达情况进行分析。结果UDP-葡萄糖醛酸转移酶、血红素加氧酶、错配修复蛋白、T-激肽原和cal megin等基因与镉毒性... 详细信息

背景与目的深入探讨睾丸镉毒性机制。材料与方法应用cDNA微阵列分析和实时定量PCR技术对低剂量镉处理后大鼠睾丸组织基因表达情况进行分析。结果UDP-葡萄糖醛酸转移酶、血红素加氧酶、错配修复蛋白、T-激肽原和cal megin等基因与镉毒性相关,但作为产能的细胞器,线粒体呼吸链并未受到低剂量镉影响。另显示维生素C对镉毒性有明显的缓解作用。结论镉诱导毒性和致癌作用的影响可能涉及能量代谢、防御保护、DNA修复多个方面;维生素C能够明显降低镉对大鼠睾丸的毒性作用。

关键词：大鼠毒理学芯片定量RT-PCR 线粒体维生素C

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噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选

噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选

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第15次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：沈毅珺刘彦君郑海音潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203 上海市中医医院上海200032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化T... 详细信息

淋巴毒素(lymphotoxin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80％的克隆与TNFR1受体特异性结合,25％的克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT.将结合力高的4个突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNTR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30％,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90％.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.

关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体亲和筛选

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玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响

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解放军药学学报 2006年第1期22卷 30-32页

作者：尚雁君李医明蒋山好朱大元魏善建焦炳华黄才国中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中科院上海药物研究所上海201203 不详

目的探讨玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响及可能的作用机理。方法从玄参根中分离提取苯丙素苷成分Acteoside,采用次黄嘌呤造成小鼠高尿酸血症,观察Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响,并进一步从体外观察Acteoside对黄嘌... 详细信息

目的探讨玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响及可能的作用机理。方法从玄参根中分离提取苯丙素苷成分Acteoside,采用次黄嘌呤造成小鼠高尿酸血症,观察Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响,并进一步从体外观察Acteoside对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。结果Acteoside能显著降低高尿酸血症小鼠体内的尿酸水平,体外实验显示其对黄嘌呤氧化酶有明显的抑制作用,IC50为12.25μgml-1。结论玄参中Acteoside在小鼠高尿酸血症中的降尿酸作用可能与其抑制黄嘌呤氧化酶作用有关。

关键词：玄参 Acteoside 黄嘌呤氧化酶高尿酸血症

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小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型研究(英文)

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 355-360页

作者：熊俊胡凯猛冀凯宏汤淑萍王英刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞间充质细胞转型的形态学变化。方法:利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,常规组织学分析小鼠肾脏病理变化,免疫组化检测α- SMA的表达,肾基底膜六胺银染色和透射电... 详细信息

目的:探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞间充质细胞转型的形态学变化。方法:利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,常规组织学分析小鼠肾脏病理变化,免疫组化检测α- SMA的表达,肾基底膜六胺银染色和透射电镜观察肾小管基底膜的变化情况,明胶酶谱分析观察肾脏中MMP2和MMP9的表达情况。结果:成功地建立了小鼠肾间质纤维化模型,并被组织学分析证实。免疫组化分析显示肾脏中出现了大量表达α-SMA的细胞,肾基底膜六胺银染色和透射电镜分析显示小鼠肾间质纤维化早期肾脏出现了肾小管基底膜局部断裂和肾小管上皮细胞迁出的改变,明胶酶谱分析显示小鼠肾脏中MMP2和MMP9于肾间质纤维化早期有一过性增高变化。结论:肾小管基底膜局部断裂,肾小管上皮细胞迁出以及MMP2和MMP9的表达变化参与了小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞间充质细胞转型的过程。

关键词：肾间质纤维化肌成纤维细胞肾基底膜基质金属蛋白酶

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PC12-Mint2基因工程细胞株的构建

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 214-216页

作者：张骐张勇曹莉刘翾矫力何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,... 详细信息

目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,有血清培养并传代具有G418抗性的细胞,数代培养后获得工程细胞株;分别提取野生型PC12细胞和PC12-Mint2工程细胞的mRNA及细胞裂解液,RT-PCR方法检测Mint2基因是否整合入PC12细胞基因组,并用West-ern印迹法检测外源基因Mint2在PC12-Mint2工程细胞中是否正常表达。结果:扩增出的基因片段大小为2 253 bp;pcDNA3.1A-Mint2重组质粒酶切结果表明Mint2基因正确地插入到pcDNA3.1A载体中,测序结果正确;将peDNA3.1A-Mint2转染PC12细胞,经G418筛选获得PC12-Mint2工程细胞株;RT-PCR结果表明Mint2基因已整合入PC12细胞,Western印迹结果显示在120 000处有特异条带,大小与Mint2蛋白理论计算值一致,表明在PC12-Mint2基因工程细胞中确实有Mint2蛋白表达。结论:本试验成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Mint2,并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株,为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。

关键词：基因亚克隆 Mint2 PC12细胞转染 Western印迹法

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