检索结果-内蒙古大学图书馆

伯氏疟原虫RC株和N株感染小鼠IFN-γ mRNA的表达及其对致病的影响

第二军医大学学报 2005年第5期26卷 515-518页

作者：陈克强朱淮民宋关鸿第二军医大学基础医学部病原生物学教研室

目的探讨伯氏疟原虫RC株和N株感染小鼠IFNγmRNA的表达及其对疟疾致病的影响。方法应用RT PCR技术,比较伯氏疟原虫RC株和N株感染后ICR小鼠脑、肝、脾组织IFNγmRNA表达的差异,并探讨其与原虫血症、体温和体质量等病理学参数之间的关系... 详细信息

目的探讨伯氏疟原虫RC株和N株感染小鼠IFNγmRNA的表达及其对疟疾致病的影响。方法应用RT PCR技术,比较伯氏疟原虫RC株和N株感染后ICR小鼠脑、肝、脾组织IFNγmRNA表达的差异,并探讨其与原虫血症、体温和体质量等病理学参数之间的关系。结果N株感染小鼠后第10天,平均原虫血症达到(64.00±7.51)%,平均体质量降至(97.60±4.59)%,平均体温降至(27.87±2.95)℃,感染小鼠开始死亡;第12天小鼠全部死亡。RC株感染小鼠后第24天,平均原虫率达(61.10±6.56)%;第26天平均体质量和平均体温降至最低点;随后原虫率逐渐下降,第30天体质量和体温开始回升;感染后第36天,绝大多数感染鼠外周血涂片不能检出疟原虫,平均体质量和平均体温恢复正常;感染RC株小鼠的病死率仅为25%。感染N株小鼠在感染前期,肝、脾组织IFNγmRNA的转录明显增强,但持续时间较短;感染RC株小鼠在感染期间,肝和脾脏一直有IFNγmRNA转录,直到原虫被清除,小鼠完全康复。整个实验期间,正常对照小鼠肝和脾脏均未检测到IFNγmRNA。结论由N株和RC株疟原虫感染诱导小鼠肝、脾IFNγmRNA的表达可能具有不同的机制;RC株疟原虫感染可诱导小鼠肝、脾持续表达IFNγmRNA,对减轻疟原虫感染所造成的损害和感染鼠的康复有重要意义。

关键词：伯氏疟原虫 RC株 N株疟疾干扰素

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血管形成抑制因子tumstatin_(45-132)的基因克隆、表达和生物学活性

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 141-143页

作者：罗以勤王梁华球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产... 详细信息

　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化***21, 于 42℃进行热诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性。结果: RT- PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致。以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化***21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为 9 600的重组蛋白。表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的 10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖。结论: 成功克隆全长tumstatincDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性。

关键词： tumstatin45-132基因表达生物学活性

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噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 535-543页

作者：徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... 详细信息

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.

关键词：噬菌体展示分子进化结构域组合文库 protein A protein L

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新生大鼠大脑皮质神经干细胞的分离培养与胆碱能神经元的鉴定

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 139-142页

作者：毕晓莹丁素菊娄淑杰曹莉徐晓辉陶沂黎佳思第二军医大学长海医院神经内科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的:体外分离和培养新生大鼠大脑皮质神经干细胞并进行鉴定,为用于脑梗死动物模型梗死区移植细胞作准备。方法:分离新生大鼠皮质神经干细胞,进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的特性进行鉴定,并对细胞的胆碱能特征进行鉴定... 详细信息

目的:体外分离和培养新生大鼠大脑皮质神经干细胞并进行鉴定,为用于脑梗死动物模型梗死区移植细胞作准备。方法:分离新生大鼠皮质神经干细胞,进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的特性进行鉴定,并对细胞的胆碱能特征进行鉴定。结果:获得了Nestin阳性的神经干细胞,其分化后可获得MAP 2、GFAP和CNPase阳性的神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞;通过胆碱能鉴定发现大脑皮质干细胞可分化为胆碱能神经元。结论:体外分离和培养的大脑皮质神经干细胞具有增殖分化的能力,并可以分化为胆碱能神经元,有望应用于皮质损伤后认知障碍及运动障碍的细胞移植治疗。

关键词：神经干细胞皮质胆碱能神经元分离培养

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睫状神经营养因子对毒胡萝卜素所致大鼠海马神经元[Ca^(2+)]_i升高的抑制作用

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1057-1060页

作者：王宗文严进李萍路长林蒋春雷倪鑫第二军医大学护理系心理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系航海医学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的抑制作用。方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10~14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/A... 详细信息

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的抑制作用。方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10~14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/AM实时检测[Ca2+]i。实验分3组:A组(n=20),EGTA(3 mmol/L);B组(n=40),EGTA(3 mmol/L)+Tg(10μmol/L);C组(n=12),EGTA(3 mmol/L)+Tg(10μmol/L)+CNTF(500 U/μl)。结果:用足量EGTA螯合细胞外Ca2+后,测得[Ca2+]i≤(30.73±7.25)nmol/L;加入EGTA+Tg后,[Ca2+]i显著升高([Ca2+]i≥[91.55±12.24]nmol/L);加入EGTA+Tg+CNTF后,升高的[Ca2+]i明显降低([Ca2+]i≤[26.09±7.16]nmol/L,P<0.01)。结论:CNTF可明显减弱Tg的钙库质膜钙泵抑制作用,使胞质[Ca2+]i降低。提示CNTF通过增加胞内钙库对细胞内游离Ca2+的吸收作用来降低海马神经元的Ca2+负荷。

关键词：海马神经元睫状神经营养因子毒胡萝卜素钙离子

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腺苷对噪声暴露豚鼠耳蜗谷氨酸和复合动作电位的影响

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 164-166页

作者：章岚王小平宋诚荣宋茂海江键第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433 基础医学部数理教研室上海200433

目的:研究腺苷在急性噪声性声损伤中对耳蜗谷氨酸和复合动作电位的影响。方法:豚鼠暴露于白噪声118 dBSPL(sound pressure level,声压水平) 30 min,同时耳蜗灌流单纯或含不同浓度(0.1、1或5 mmol/L)腺苷的人工外淋巴液,高效液相色谱检... 详细信息

目的:研究腺苷在急性噪声性声损伤中对耳蜗谷氨酸和复合动作电位的影响。方法:豚鼠暴露于白噪声118 dBSPL(sound pressure level,声压水平) 30 min,同时耳蜗灌流单纯或含不同浓度(0.1、1或5 mmol/L)腺苷的人工外淋巴液,高效液相色谱检测分析噪声暴露前、后外淋巴中谷氨酸浓度,测试噪声暴露前后听神经复合动作电位的阈值。结果:噪声暴露后耳蜗外淋巴液中谷氨酸含量显著升高, 给予1 mmol/L 和5 mmol/L腺苷可以抑制谷氨酸浓度的升高。噪声暴露后复合动作电位阈值增大, 同时给予腺苷灌流组阈移减小。结论:腺苷可使噪声暴露后耳蜗外淋巴中谷氨酸浓度明显降低, 复合动作电位阈移值减小,提示腺苷对急性声损伤耳蜗有保护作用。

关键词：腺苷谷氨酸噪声外淋巴灌流

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条件培养液改进小鼠胚胎干细胞嵌合体制备效率的观察

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 294-297页

作者：何志颖王新民李建秀李文林胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率。方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15 代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受... 详细信息

目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率。方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15 代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受体(GR)工程化ES细胞进行培养并筛选,通过囊胚注射制作嵌合体来比较2种不同培养液培养ES细胞后嵌合体制备效率的差别。结果:未工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为25.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到53.8%(P< 0.05);GR工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为15.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到52.3%(P<0.05)。结论:应用TX WES培养液改善小鼠ES细胞的培养条件可提高嵌合体的制备效率,该方法为基因剔除小鼠研究的顺利开展奠定了良好的基础。

关键词：胚胎干细胞 TX-WES培养液嵌合体

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转基因操作后小鼠受精卵的移植数量与其胚胎发育率的关系

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 298-299页

作者：李建秀胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:研究不同受精卵移植数量与小鼠胚胎发育率的关系,以提高转基因小鼠制备效率.方法:取正常(共966枚受精卵,分6组,每组10～12例)及已进行显微操作的小鼠受精卵(共2349枚受精卵,分为5组),移入假孕的受体小鼠输卵管内,统计分析其生产率... 详细信息

目的:研究不同受精卵移植数量与小鼠胚胎发育率的关系,以提高转基因小鼠制备效率.方法:取正常(共966枚受精卵,分6组,每组10～12例)及已进行显微操作的小鼠受精卵(共2349枚受精卵,分为5组),移入假孕的受体小鼠输卵管内,统计分析其生产率及得仔率.结果:正常组移植小鼠移植1～5,6～10,11～15,16～20卵组与移植21～25,26～30组比较得仔率高(P＜0.01).转基因组小鼠单侧输卵管内移卵11～15枚或16～20枚的组,其得仔率较其他(移植1～5、6～10、21～25枚各组)高(P＜0.01).结论:受精卵移植数量与转基因小鼠胚胎发育率有关,以一次移卵11～20枚效果最好.

关键词：受精卵移植数量胚胎发育率转基因小鼠

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基于Cre/loxP系统的糖皮质激素受体基因条件性打靶嵌合鼠的获得

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 290-293页

作者：何志颖姚玉成李建秀王新民胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:应用Cre/loxP系统建立诱导型糖皮质激素受体(GR)基因剔除小鼠模型,为在体内直接进行GR基因的研究提供条件。方法:针对GR基因第2外显子构建诱导型目标载体,将打靶载体电穿孔转染胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),经Southern杂交... 详细信息

目的:应用Cre/loxP系统建立诱导型糖皮质激素受体(GR)基因剔除小鼠模型,为在体内直接进行GR基因的研究提供条件。方法:针对GR基因第2外显子构建诱导型目标载体,将打靶载体电穿孔转染胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),经Southern杂交筛选发生正确同源重组的ES细胞,囊胚注射法制备嵌合体并进行生殖系检测及纯化建系。结果:成功构建了针对GR基因第2外显子的诱导型目标载体,转染ES细胞获得了工程化的ES细胞,经囊胚注射获得了由工程化的ES细胞和体细胞共同发育而来的嵌合体小鼠。结论:基于Cre/loxP系统的GR基因条件性打靶嵌合鼠的获得,为得到理想的诱导型GR基因剔除小鼠模型奠定了基础。

关键词：受估糖皮质激素嵌和体 Cre/loxP系统胚胎干细胞

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大鼠肝再生时肝PBR、Bcl-2、Bax基因mRNA的表达

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 931-936页

作者：黄鹤任绪义缪明永周运恒王洁王学敏焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨肝细胞线粒体通透性转换(permeabilitytransition,PT)的主要调节蛋白外周型苯二氮类受体(PBR)、Bcl2家族成员Bcl2、Bax在肝再生过程中的表达情况,探讨上述基因表达与线粒体PT的关系。方法:健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组:... 详细信息

目的:探讨肝细胞线粒体通透性转换(permeabilitytransition,PT)的主要调节蛋白外周型苯二氮类受体(PBR)、Bcl2家族成员Bcl2、Bax在肝再生过程中的表达情况,探讨上述基因表达与线粒体PT的关系。方法:健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组:肝切除组,切除肝左叶和中叶部分约全肝的70%;假处理组,同样麻醉和开腹,但不切肝;正常组。手术后3、6、12、24、48、72、120和168h分别以半定量RTPCR法检测PBR、Bcl2、Bax在肝再生过程中mRNA表达的动态变化。结果:肝再生过程中PBR基因表达降低,但与假处理组无显著差异;Bcl2在肝切除后3h和120h表达显著高于对应的假处理组和正常组(P<0.05);BaxmRNA表达低于正常组和假处理组,其中在肝切除后12h和72h时显著低于相应的假处理组(P<0.05)。结论:PBR、Bax、Bcl2在肝再生过程中表达变化可能与线粒体PT时相变化有关。

关键词：肝再生线粒体通透性转换外周型苯二氮Zhuo类受体 Bcl-2 Bax 基因表达

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