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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1136-1139页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察黄素单核苷酸(FMN)对羟自由基(OH·)损伤线粒体酶复合物1(complexⅠ)的作用,分析FMN与complexⅠ的相互作用机制。方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体co... 详细信息

目的:观察黄素单核苷酸(FMN)对羟自由基(OH·)损伤线粒体酶复合物1(complexⅠ)的作用,分析FMN与complexⅠ的相互作用机制。方法:差速离心法分离大鼠肝线粒体,OH·体外损伤线粒体,氧电极法测定线粒体耗氧速率,比色法检测线粒体complexⅠ动力学参数及线粒体内MDA、GSH含量及SOD活性。结果:OH·损伤后,线粒体3态、4态(state3,state4)耗氧速率、complexⅠ最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但呼吸控制率(respiratorycontrolratio,RCR)、磷氧比(P/O)及complexⅠ米氏常数(Km)不变,线粒体中GSH含量下降(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),MDA含量升高。损伤线粒体补充FMN165ng/ml可部分恢复complexⅠ呼吸途径state3耗氧速率(P<0.05),补充FMN82.5～165ng/mg可显著提高OH·损伤的线粒体复合物Ⅰ的Vm(P<0.05)。损伤线粒体补充较低剂量的FMN(FMN<82.5ngFMN/ml),线粒体中GSH、SOD、MDA含量不发生变化,在补充较高剂量FMN(>165ngFMN/ml)时,SOD活性升高(P<0.05),但线粒体MDA含量升高(P<0.05)、GSH含量下降(P<0.05)。结论:FMN能够提高氧化损伤线粒体复合物Ⅰ活性,促进complexⅠ呼吸途径的state3耗氧速率。FMN不能直接清除OH·及自由基,可能通过保护complexⅠ中的酶结合/活性位点免受OH·等自由基攻击从而维持酶活性。

关键词：黄素单核苷酸羟自由基肝线粒体酶复合物Ⅰ

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丙二醛对大鼠肝线粒体呼吸功能及相关脱氢酶活性影响

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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1131-1135页

作者：龙建纲王学敏高宏翔刘昌盛刘志缪明永刘健康中国科学院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮... 详细信息

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响。方法:采用不同浓度MDA体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05)。丙酮酸脱氢酶及α酮戊二酸脱氢酶分别在50μmol/L和100μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0～3.2mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响。结论:MDA对线粒体呼吸链及α酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ。

关键词：丙二醛肝线粒体脱氢酶

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肝癌细胞中存在SP细胞

肝癌细胞中存在SP细胞

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中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

作者：张朵朱海英谢东莆胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

SP细胞是指能够将进入细胞核的荧光染料Hoechst33342排出胞外的一类细胞。它是1996年 Goodell等在研究造血干细胞时发现的。现已在多种生物的多种组织中检测到有SP细胞的存在,并且它们在表面分子标志以及功能方面与相应的组织干细胞具... 详细信息

SP细胞是指能够将进入细胞核的荧光染料Hoechst33342排出胞外的一类细胞。它是1996年 Goodell等在研究造血干细胞时发现的。现已在多种生物的多种组织中检测到有SP细胞的存在,并且它们在表面分子标志以及功能方面与相应的组织干细胞具有一致性。癌干细胞是指异体移植后能够重新形成肿瘤组织,并且具有自我更新和分化潜能的一类肿瘤细胞。目前在乳腺癌细胞系、脑瘤细胞系、肺癌细胞系以及原代分离的胶质瘤细胞中都检测到了SP细胞的存在,推测它可能是一类癌于细胞。在本研究中,不仅在药物诱导的小鼠肝癌组织中检测到了SP细胞的存在,而且在人肝癌细胞系P2-HCC和PRIM-HCC1中也检测到了SP细胞的存在。进一步的研究结果显示:P2-HCC中的 sP细胞比non-SP细胞具有更高的增殖能力,并且SP细胞可以进行不对称分裂,即SP细胞可以增殖形成SP细胞和non-SP细胞。此外还发现具有SP细胞的肝癌细胞系P2-HCC在多方面表现了癌干细胞的特性,例如具有强大的肿瘤形成能力以及分化潜能等。本课题的研究为研究肿瘤细胞中的sP 细胞与癌干细胞的关系以及肝癌干细胞的存在提供了一个很好的实验基础。

关键词：肝癌细胞 HCC

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绦虫膜联蛋白家族分子结构特点、功能与进化的分析

绦虫膜联蛋白家族分子结构特点、功能与进化的分析

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2005全国第二届核酸疫苗研讨会

作者：王凯慧李卡郭瀛军孙树汉章亚男陆一鸣颜宏利第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的:研究绦虫Annexin B家族与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。从Swiss-Prot和NCBI-Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中,根据物种的分类挑选68个,用生物信息学方法分析绦虫AnnexinB家族的结构、功能与进化。绦虫Annexin ... 详细信息

目的:研究绦虫Annexin B家族与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。从Swiss-Prot和NCBI-Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中,根据物种的分类挑选68个,用生物信息学方法分析绦虫AnnexinB家族的结构、功能与进化。绦虫Annexin B家族中3个膜联蛋白分子均包含4个序列和结构高度相似的结构域,分别含有数量不等的Ca2+结合位点,二级结构显示蛋白主要由α螺旋结构组成,每种膜联蛋白含有不同的motif结构序列,其中Annexin B2所含的motif种类最多.具有人膜联蛋白家族所有的motif。Annexin B1和Annexin B2具有寄生生物所特有的氨基酸残基和功能域。已发现的绦虫膜联蛋白家族都具有抑制血小板凝集的作用,其中Annexin B2活性最强,Annexin B3的作用最弱。Annexin B2在物种进化上,绦虫Annexin B家族和节肢动物为1支,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为一支,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为一支。另外,Annexin B家族与Annexin A1、Annexin A2和Annexin A5在进化上有较强的亲缘关系,结构和功能与Annexin A1和Annexin A5相似。结论:绦虫Annexin B家族具有膜联蛋白家族的结构特征,从已发现的膜联蛋白分子功能结构域推断,绦虫Annexin B家族蛋白数少于人和鼠(13种)等高等动物,但具有同等的生物学功能,不同的蛋白分子可具有同样的生物学功能,但其强弱不同。随着生物的进化,膜联蛋白家族的基本功能没有变,但蛋白种类越来越多,分工越来越细。膜联蛋白家族的结构可以反应物种的生活习性。

关键词： Annexin B家族绦虫结构进化

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慢病毒载体在疫苗研究中的应用

慢病毒载体在疫苗研究中的应用

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2005全国第二届核酸疫苗研讨会

作者：郭瀛军郭嘉张术王开宇高远舰何颖孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

人类免疫缺陷病毒-1(HIV—1)来源的慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体,近来在疫苗研制领域也显现出极大的应用潜力。与通常使用的病毒载体比较,具有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点,人们已成功地应用慢病毒... 详细信息

人类免疫缺陷病毒-1(HIV—1)来源的慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体,近来在疫苗研制领域也显现出极大的应用潜力。与通常使用的病毒载体比较,具有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点,人们已成功地应用慢病毒载体感染了神经细胞、肝细胞、造血干细胞、胰岛细胞、肌肉细胞、视网膜色素上皮细胞、气道上皮细胞等。此外,慢病毒载体容纳外源性目的基因的片段大,可以在体内较长期的表达,免疫反应小,安全性较好。慢病毒属于逆转录病毒科,但其基因组结构复杂,除gag、pol和env这3个结构基因外,还包括4个辅助基因,和2个调节基因。目前,多数实验室所采用载体系统的是经改建的三质粒表达系统,包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。包装质粒在CMV启动子的控制下,表达HTV-1复制所需的全部反式激活蛋白,但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu;包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G);转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列,还保留350 bp的gag和RRE。将载体系统分成三个质粒的优点在于使序列重叠的机会大大减少,减少载体重组过程中产生可复制病毒的可能性。共转染293T细胞后,经超速离心浓缩,病毒滴度能达到1091IU/ml。已有报道将慢病毒载体作为靶向树突状细胞(DCs)肿瘤疫苗载体,能诱导有效的CD8+T细胞应答。将慢病毒为载体的疫苗(编码抗原多肽)接种小鼠足垫能在引流淋巴结和脾发现被转导的DCs。同时,携带T细胞抗原的慢病毒载体疫苗能在小鼠体内诱导很强的抗原特异性的CTL应答。对照实验表明,在诱发CTL应答的强度和持续时间方面,体内接种慢病毒载体疫苗优于体外转导DCs策略或是采用肽/佐剂疫苗。慢病毒载体疫苗诱导有效T细胞应答的原因在于慢病毒能在接种部位原位靶向DCs,这些DCs进而迁移至二级淋巴器官。该疫苗系统不涉及人体已有免疫抗性的问题(如腺病毒系统),且使用方便,可作为肿瘤等疫苗研究的载体。

关键词：慢病毒载体疫苗研究

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利用真菌分生孢子筛选抗真菌活性的海洋微生物

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第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1300-1301页

作者：宋志刚许强芝鲁心安刘小宇杨妤艾峰焦炳华华东师范大学生命科学学院上海200062 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:建立筛选抗真菌活性化合物的96孔板方法,筛选海洋活性菌株。方法:利用96孔板培养真菌孢子,将样品加入到真菌培养基中,在适宜条件下培养,通过显微镜来检测菌丝的生长情况,判断样品是否有抗真菌活性,筛选活性菌株。结果:通过对我国... 详细信息

目的:建立筛选抗真菌活性化合物的96孔板方法,筛选海洋活性菌株。方法:利用96孔板培养真菌孢子,将样品加入到真菌培养基中,在适宜条件下培养,通过显微镜来检测菌丝的生长情况,判断样品是否有抗真菌活性,筛选活性菌株。结果:通过对我国东海海洋微生物的筛选,从541株微生物中找到了25株具有抗黄瓜黑星病菌的活性菌株。结论:本生物检测模型方便、快速、费用低,并且可以进行高通量筛选、相关性好,是一种抗真菌天然产物的理想筛选模型。

关键词：抗真菌药黄瓜黑星病菌筛选

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表达含乙肝X亚基多个CTL表位的病毒颗粒样蛋白的减毒伤寒沙门氏菌株的构建

表达含乙肝X亚基多个CTL表位的病毒颗粒样蛋白的减毒伤寒沙门氏菌...

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2005全国第二届核酸疫苗研讨会

作者：任丁何晓文姜磊王芳章亚楠何颖李凯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

利用生物信息学预测、体外与MHC分子亲和力分析、激活乙肝病人单核细胞等多个步骤选择HBV中国流行株HBx亚基的HLA-A2 0201限制性CTL表位;将多表位、侧翼序列及间隔序列串珠状的最优化聚合插入乙肝HBc第76位氨基酸(外源基因插入区),克隆... 详细信息

利用生物信息学预测、体外与MHC分子亲和力分析、激活乙肝病人单核细胞等多个步骤选择HBV中国流行株HBx亚基的HLA-A2 0201限制性CTL表位;将多表位、侧翼序列及间隔序列串珠状的最优化聚合插入乙肝HBc第76位氨基酸(外源基因插入区),克隆至pCDNA3真核表达载体,转染至COS-7细胞系中获得表达。乙肝X亚基多个CTL表位与HBc亚基融合表达的目的蛋白具有病毒颗粒样结构,可被抗-Hbc单克隆抗体所特异识别。将重组质粒转化至减毒伤寒沙门氏菌,口服免疫HLA-A0201转基因小鼠,评价表达X亚基多个CTL表位的病毒颗粒样蛋白的减毒伤寒沙门氏菌株免疫效果及安全性,考察疫苗诱导的体液、细胞免疫对HBV复制、对HBV引起的肝细胞肝癌生长的抑制作用,为慢性乙肝、肝癌的免疫治疗探索新型高效的治疗性疫苗。

关键词：乙型肝炎病毒 HBx亚基 HBc亚基减毒伤寒沙门氏菌株 HLA-A0201 转基因小鼠慢性乙肝肝癌

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PTEN基因突变与遗传性癌症综合征及其相关疾病的研究进展

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第二军医大学学报 2005年第1期26卷 90-92页

作者：刘玉环王锡智蔡在龙俞超芹崔英沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 长海医院泌尿外科基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院中医科

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌... 详细信息

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌等。近年来的研究发现,PTEN基因种系突变与人类多种遗传性癌症综合征有关。本文概括介绍了PTEN基因种系突变与人类遗传性癌症综合征及其相关疾病的关系,重点介绍了考登综合征(Cowden syndrome, CS)、Bannayan Ri ley Ruvalcaba syndrome(BRRS)、Proteus syndrome (PS)、Proteus like syndromes(PS like)等疾病。随着对这些综合征认识的加深,应用基因突变分析作为分子诊断工具,将有可能对这些患者极其家庭成员进行疾病的早期诊断及必要的癌症监测。

关键词： PTEN基因基因突变遗传性癌症综合征

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卡介菌基因组DNA制备工艺研究

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中国生物制品学杂志 2005年第1期18卷 36-38页

作者：王静胡振林周凤娟凌亦凌孙树汉河北医科大学病理生理教研室石家庄050017 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的　摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法　采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子... 详细信息

目的　摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法　采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子交换和凝胶过滤层析 ,去除残余菌体蛋白和多糖 ,精制DNA ,并进行质量检测。结果　所制备的BCG -DNA片段大小介于 2 0 0～ 2 5 0bp之间 ,纯度大于 95 % ,蛋白含量占 0 . 1% ,多糖残留占 3 .5 %。结论此方法制备的BCG- DNA纯度较高 ,且无有机溶剂残留 ,适用于BCG DNA制备。

关键词： BCG 卡介菌多糖结核杆菌超声 DNA 酶消化制备工艺高纯度去除

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绦虫膜联蛋白家族分子结构特点、功能与进化的分析

绦虫膜联蛋白家族分子结构特点、功能与进化的分析

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中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会

作者：王凯慧李卡郭瀛军孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的研究绦虫Annexin B家族与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法从Swiss-Prot和NCBI-Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中,根据物种的分类挑选68个,用生物信息学方法分析绦虫Annexin B家族的结构、功能与进化。结果绦虫A... 详细信息

目的研究绦虫Annexin B家族与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法从Swiss-Prot和NCBI-Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中,根据物种的分类挑选68个,用生物信息学方法分析绦虫Annexin B家族的结构、功能与进化。结果绦虫AnnexinB家族中3个膜联蛋白分子均包含4个序列和结构高度相似的结构域,分别含有数量不等的Ca2+结合位点,二级结构显示蛋白主要由α螺旋结构组成,每种膜联蛋白含有不同的motif结构序列,其中Annexin B2所含的motif种类最多,具有人膜联蛋白家族所有的motif。AnnexinB1和Annexin B2具有寄生生物所特有的氨基酸残基和功能域。已发现的绦虫膜联蛋白家族都具有抑制血小板凝集的作用,其中Annexin B2活性最强,Annexin B3的作用最弱。Annexin B2在物种进化上,绦虫Annexin B家族和节肢动物为1支,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为一支,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为一支。另外,Annexin B家族与Annexin A1、Annexin A2和Annexin A5在进化上有较强的亲缘关系,结构和功能与Annexin A1和AnnexinA5相似。结论绦虫.Annexin B家族具有膜联蛋白家族的结构特征,从已发现的膜联蛋白分子功能结构域推断,绦虫Annexin B家族蛋白数少于人和鼠(13种)等高等动物,但具有同等的生物学功能,不同的蛋白分子可具有同样的生物学功能,但其强弱不同。随着生物的进化,膜联蛋白家族的基本功能没有变,但蛋白种类越来越多,分工越来越细。膜联蛋白家族的结构可以反应物种的生活习性。

关键词：联蛋白分子结构

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