检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2004年第8期25卷 862-864页

作者：彭艳郑颖蒋平何玮侯彦强周聪郭春香倪健焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海富纯中南生物技术有限公司上海201203 第二军医大学长征医院实验诊断科上海200003

目的:建立一种利用二维液相色谱法分离肿瘤细胞全细胞裂解液的方法。方法:将肿瘤细胞裂解样品用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后先对二维色谱条件进行优化和重现性分析,再将一维收集的pH值8.5-4.0之间的组分分别进行二维反... 详细信息

目的:建立一种利用二维液相色谱法分离肿瘤细胞全细胞裂解液的方法。方法:将肿瘤细胞裂解样品用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后先对二维色谱条件进行优化和重现性分析,再将一维收集的pH值8.5-4.0之间的组分分别进行二维反相HPLC分离,利用ProteoVue软件将UV图转换成胶图。结果:一维色谱聚焦分离pH值8.5-4.0之间的组分共收集到16个,每个组分的二维UV图转换成pI／UV胶图。结论:二维液相色谱分离法是一种有效的分离肿瘤细胞裂解液的方法。

关键词：蛋白质组肿瘤细胞二维液相色谱分离

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五种植物精油熏杀致倦库蚊的效果

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1094-1096页

作者：杨频马雅军廉振民第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433 延安大学生命科学学院延安716000

目的 :考察菊科植物、芸香科植物、椒样薄荷、留兰香和香茅共 5种植物的精油对致倦库蚊的熏蒸杀虫效果。方法 :以三角瓶密闭熏蒸法测定 5种精油对致倦库蚊的熏杀效果。结果 :持续熏蒸不同时间后 ,5种精油对致倦库蚊的毒力有差异。在熏... 详细信息

目的 :考察菊科植物、芸香科植物、椒样薄荷、留兰香和香茅共 5种植物的精油对致倦库蚊的熏蒸杀虫效果。方法 :以三角瓶密闭熏蒸法测定 5种精油对致倦库蚊的熏杀效果。结果 :持续熏蒸不同时间后 ,5种精油对致倦库蚊的毒力有差异。在熏蒸 0 .5、4和 2 4 h后芸香科植物精油均毒力最大 ,其 L C50 分别为 0 .0 13、0 .0 5 5、0 .0 5 8。而菊科植物精油毒力最小 ,其 3个时间段的 L C50 分别为 0 .94 8、0 .4 2 7、1.711。用供试植物精油的 L C95剂量 (0 .5 h)熏蒸处理致倦库蚊 ,显示留兰香油的熏杀速度最快 ,其 L T50 值为 6 .0 87m in,而香茅油的最慢 ,为 2 1.14 3m in。结论 :5种植物精油对致倦库蚊均具有一定的熏杀活性 ,以芸香科植物精油和留兰香油的杀虫效果较好 ,为其现场实验提供了基础资料。

关键词：植物精油致倦库蚊熏蒸杀虫力芸香科植物油留兰香油

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重组人淋巴毒素随机点突变组合文库的构建

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生物工程学报 2004年第1期20卷 43-48页

作者：沈毅珺潘卫徐容潘欣王罗春王征曹峰谭靖伟吴劲松吴芳刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203

构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因... 详细信息

构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于pMD_18T载体建立三点组合突变体文库 ,DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性 ,原核表达该变异体库 ,体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库 ,其转化克隆数达到 1 5× 10 5,是多样性理论值的 4 5倍。 5 0个样品的序列分析显示各个位点的核苷酸和氨基酸序列的突变都呈随机性分布。对原核表达的 30个样品进行生物学活性测定 ,结果 70 % (2 1个 )的样品无活性、2 3 3% (7个 )的样品活性低于rhLT、6 7% (2个 )的样品活性高于rhLT。成功构建了rhLT随机点突变组合文库 ,该库不仅在一级结构上具有良好的随机性和多样性 ,而且具有生物学活性的多样性 ,为应用噬菌体展示等高通量筛选策略对淋巴毒素进行体外分子进化和结构与功能的深入研究打下了基础。

关键词：淋巴毒素随机突变分子进化点突变组合文库

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试行主讲教员负责制培养复合型军事医学人才

试行主讲教员负责制培养复合型军事医学人才

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中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议

作者：江键王小平宋茂海第二军医大学基础医学部数理教研室第二军医大学基础医学部数理教研室第二军医大学基础医学部数理教研室

现代高新科技的飞速发展所引发的新世界军事革命,归根结底表现为科技和人才的竞争。江泽民同志指出:迎接新的军事发展的挑战,关键在人才。军队院校是培养高素质军事人才的摇篮,是科技兴国的战略基地,长期以来它担负着为国防现代化建设... 详细信息

现代高新科技的飞速发展所引发的新世界军事革命,归根结底表现为科技和人才的竞争。江泽民同志指出:迎接新的军事发展的挑战,关键在人才。军队院校是培养高素质军事人才的摇篮,是科技兴国的战略基地,长期以来它担负着为国防现代化建设培养合格人才的艰巨任务。面对现代医学技术的日新月异,军医大学如何培养合格的创新型、复合型军事医学人才的重大课题摆在了每位

关键词：医用物理学主讲教员创新教育

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修饰后日本血吸虫Sjc-97基因的真核表达及其免疫原性

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 29-33页

作者：钱磊张冬梅庄英萍邢金花周爱国潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433 华东理工大学生物工程学院上海200237

目的 :研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因第 3区域片段 (Sjc- 97f3)毕氏酵母表达产物的免疫原性。方法 :根据毕氏酵母密码子使用频率重新设计 Sjc- 97核苷酸序列 ,依据不对称 PCR原理人工合成 Sjc- 97f3,并在毕氏酵母中表达。表达产... 详细信息

目的 :研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因第 3区域片段 (Sjc- 97f3)毕氏酵母表达产物的免疫原性。方法 :根据毕氏酵母密码子使用频率重新设计 Sjc- 97核苷酸序列 ,依据不对称 PCR原理人工合成 Sjc- 97f3,并在毕氏酵母中表达。表达产物通过 Ni- NTA亲和层析和凝胶过滤层析方法纯化 ,再分别与 ISA72 0和 Al(OH) 3佐剂乳化后 ,免疫 C5 7BL/ 6和昆明小鼠 ,通过尾蚴膜反应和 EL ISA反应检测特异性抗体。结果 :Sjc- 97f3基因在毕氏酵母中获得了高水平分泌表达 ,其表达产物能与日本血吸虫免疫血清进行特异性免疫反应。经与佐剂乳化后 ,该蛋白具有良好的免疫原性。EL ISA结果显示重组蛋白在小鼠体内可激发明显的抗体反应 ,但 2种佐剂所诱导的抗体水平以 ISA72 0佐剂为高 ;该抗原在不同品系小鼠中的抗体水平存在显著差异 (P<0 .0 1 ) ,昆明鼠的抗血清滴度远高于 C5 7BL/ 6小鼠。小鼠免疫血清能识别日本血吸虫表面抗原 ,产生特异的尾蚴膜反应。结论 :密码子优化的 Sjc- 97f 3在毕氏酵母中获得高效表达。

关键词：基因修饰日本血吸虫 Sjc-97基因基因表达免疫原性毕氏酵母副肌球蛋白

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单核苷酸多态性与复杂性状疾病

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 117-119页

作者：孙树汉杨胜利第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 中国科学院上海生物工程研究中心上海200233

单核苷酸多态性 (SNPs)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异而引起的 DNA序列多态性 ,频率大于 1 %。SNPs在人类基因组中广泛存在 ,并通常以二等位基因的形式出现 ,便于进行大规模和高通量分析 ,因此是继限制性酶切长度多态性 (RFL P... 详细信息

单核苷酸多态性 (SNPs)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异而引起的 DNA序列多态性 ,频率大于 1 %。SNPs在人类基因组中广泛存在 ,并通常以二等位基因的形式出现 ,便于进行大规模和高通量分析 ,因此是继限制性酶切长度多态性 (RFL P)和微卫星之后的第三代遗传标记。SNPs在生物学诸多领域具有广阔的应用前景。本文简要叙述了 SNPs与复杂性状疾病 (如肿瘤、高血压、糖尿病等 )的关系 ,以及 SNPs在复杂性状疾病的致病基因定位、发病机制的阐明。

关键词：单核苷酸多态性复杂性状疾病基因遗传学个体化用药药物设计

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不同条件下人乳白蛋白YAC的高效定点打靶修饰

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第二军医大学学报 2004年第6期25卷 633-637页

作者：张绪峰吴国祥朱克军焦炳华成国祥第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海转基因研究中心上海201203 上海转基因研究中心

目的?对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到 his3缺陷的YPH925菌株... 详细信息

目的?对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到 his3缺陷的YPH925菌株。分别以HIS3(对YPH925菌株)和G418R(对YPH925和AB1380两种菌株)为选择标记,用含 HLA-YAC的酵母基因组为模板,PCR克隆人乳白蛋白(HLA)基因的5′和3′端非翻译区各684bp和940bp为同源臂,构建打靶载体,线性化的打靶载体经电转化或醋酸锂转化转入酵母内,以菌落PCR为鉴定方法,辅以测序验证。结果:HLA-YA 在目的位置完成了定点打靶修饰,G418R的筛选效率高于HIS3,醋酸锂转化方法的打靶效率稍高于电转化。结论:对YA 的成功修饰为在动物体内的表达及调控研究打下了基础。

关键词：人乳白蛋白 YAC 高效定点打靶修饰酵母人工染色体酵母人工染色庠转移

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GST融合蛋白制备表皮生长因子受体抗体

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郑州大学学报（医学版） 2004年第2期39卷 252-254页

作者：阎志勇吴爱群由振东路长林何成第二军医大学神经生物学教研室上海200433 郑州大学基础医学院人体解剖学教研室郑州450052

目的:探讨制备大量表皮生长因子受体(EGFR)特异性抗体的方法。方法:将编码EGFR的N端肽段的cDNA克隆入表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,经亲和层析柱纯化,用该GST融合蛋白免疫BALB/C小鼠,获得免疫血清,以ELISA和... 详细信息

目的:探讨制备大量表皮生长因子受体(EGFR)特异性抗体的方法。方法:将编码EGFR的N端肽段的cDNA克隆入表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,经亲和层析柱纯化,用该GST融合蛋白免疫BALB/C小鼠,获得免疫血清,以ELISA和Western Blot检测抗体滴度。结果:获得GST-PTB融合蛋白纯度大于95％;经免疫小鼠抗血清滴度1∶38 827-1∶190 602,得到大量高滴度的EGFR特异性抗体。结论:用原核系统表达GST融合蛋白直接免疫小鼠可以快速、大量地制备EGFR特异性抗体。

关键词： GST融合蛋白表皮生长因子受体抗体 EGFR 癌细胞

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神经营养因子对成年大鼠脊髓损伤后皮质脊髓束再生的影响(英文)

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中国临床康复 2004年第14期8卷 2768-2770,F013页

作者：鲁凯伍陈哲宇侯铁胜金大地解放军第一军医大学南方医院脊柱骨病科广东省广州市510515 解放军第二军医大学基础医学部神经生物教研室上海市200433 解放军第二军医大学长海医院骨科上海市200433

背景:胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对脊髓运动神经元的存活有明显的保护作用,但GDNF对成年大鼠脊髓损伤后皮质脊髓束再生是否有促进作用仍不清楚。目的:研究胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用。设计:随... 详细信息

背景:胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对脊髓运动神经元的存活有明显的保护作用,但GDNF对成年大鼠脊髓损伤后皮质脊髓束再生是否有促进作用仍不清楚。目的:研究胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用。设计:随机对照实验。地点和材料:本实验在第二军医大学神经生物实验室完成。实验动物采用雄性成年SD大鼠64只,体质量250～300g。干预:采用Nystrm法制备大鼠胸髓后路压迫损伤模型,压迫质量为50g,时间为5min,造成大鼠胸段脊髓急性重度损伤。脊髓损伤后24h,对照组注射6μL阳离子脂质体DC-Chol和2μgpCDNA3的混合物,实验组将6μLDC-Chol和2μg重组质粒pEGFP-GDNFcDNA混合后注入大鼠损伤脊髓。主要观察指标:应用RT-PCR技术和荧光显微镜检测GDNF体内转基因后在局部的表达,通过辣根过氧化物酶(HRP)顺行追踪技术和神经微丝(NF)免疫组化活性的变化来评价GDNF基因体内转染对大鼠皮质脊髓束再生的影响。结果:GDNF基因体内转染1周后发现在基因注射局部有转录和蛋白水平表达,4周后在脊髓损伤周围仍检测到GDNF蛋白表达。脊髓损伤后4周,实验组脊髓损伤区皮质脊髓束HRP标记明显多于对照组,仅在实验组可见部分神经纤维穿过损伤区至远端5～9mm。损伤区NF阳性轴突数(524.33±80.55/低倍视野)较对照?

关键词：脊髓损伤 NTF 脂质体基因治疗神经再生

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乙肝DNA疫苗联合基因工程蛋白疫苗提高免疫效果的研究

乙肝DNA疫苗联合基因工程蛋白疫苗提高免疫效果的研究

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首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛

作者：何晓文章亚男何颖李凯姜磊孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

DNA疫苗能够作为治疗性乙肝疫苗,打破慢性乙肝患者的免疫耐受,但DNA 疫苗对大动物的免疫效果远不如小动物明显,免疫效果的个体差异较大。大量研究表明DNA 疫苗与蛋白疫苗联用能明显提高免疫效果。本研究将乙肝DNA 疫苗与蛋白疫苗联用的... 详细信息

DNA疫苗能够作为治疗性乙肝疫苗,打破慢性乙肝患者的免疫耐受,但DNA 疫苗对大动物的免疫效果远不如小动物明显,免疫效果的个体差异较大。大量研究表明DNA 疫苗与蛋白疫苗联用能明显提高免疫效果。本研究将乙肝DNA 疫苗与蛋白疫苗联用的策略以不同组合、不同次序、不同次数的多个免疫方案联合免疫正常小鼠,按诱导的体液和细胞免疫的效

关键词：免疫效果联合基因 DNA

来源：评论

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