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第14次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：沈毅珺潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室(上海) 上海复旦张江生物医药股份有限公司(上海) 第二军医大学基础医学部微生物学教研室(上海) 上海复旦张江生物医药股份有限公司(上海)

淋巴毒素(Lymphotoin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106~F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相比TN... 详细信息

淋巴毒素(Lymphotoin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106~F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相比TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80﹪的克隆与TNFR1受体特异性结合,25﹪的克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT.将结合力高的4个突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30﹪,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90﹪.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试为下一步的蛋白结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.

关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体展示亲和筛选抗肿瘤活性

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利用生物自显影筛选海洋微生物活性物质

利用生物自显影筛选海洋微生物活性物质

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全国首届海洋生物化学与分子生物学学术会议暨全国第五届海洋生命活性物质与天然生化药物学术研讨会

作者：宋志刚许强芝焦炳华华东师范大学生命科学院第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海 200433

海洋生物活性物质，可以为新药研究提供先导化合物。海洋生物将是本世纪人们研究开发的重要药物资源。如何建立灵敏、方便、快捷的活性物质筛选模型将对实验的成败起着决定性的作用。生物自显影技术可在筛选化合物时起到重要的作用，Hom... 详细信息

海洋生物活性物质，可以为新药研究提供先导化合物。海洋生物将是本世纪人们研究开发的重要药物资源。如何建立灵敏、方便、快捷的活性物质筛选模型将对实验的成败起着决定性的作用。生物自显影技术可在筛选化合物时起到重要的作用，Homans A.L.等人已经利用它来筛选抗真菌的天然代谢产物。本文通过改进后将该方法应用于海洋微生物抗菌活性筛选和活性跟踪分离，取得良好效果。分析指出生物自显影技术是一种简便的生物自检技术，具有高度的灵敏性，容易保存记录，更重要的是它可以指导活性跟踪分离。在实际操作中我们发现玻璃板的TLC比铝质的TLC更加合适，它可以避免在裁剪铝板的时候破坏硅胶，并且由于玻璃板的质量较大，也可以增加我们喷洒抱子和菌液时候TLC的稳定性。

关键词：海洋微生物活性物质生物活性先导化合物筛选模型抗菌活性

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分子鉴别技术在蚊虫分类中的应用

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国外医学（寄生虫病分册） 2004年第5期31卷 198-201页

作者：李石柱马雅军中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025 第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

分子鉴别技术是以生物大分子DNA为依据 ,从分子水平上阐明物种间的差别 ,具有客观、准确的特点 ,在蚊虫分类中广为应用。

关键词：蚊虫分子鉴别分子水平 DNA 生物大分子差别依据应用物种

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高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白

高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白

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全国首届海洋生物化学与分子生物学学术会议暨全国第五届海洋生命活性物质与天然生化药物学术研讨会

作者：张兴群王梁华焦炳华缪辉南袁勤生华东理工大学生物反应器国家重点实验室上海 200237 第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海 200433 第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海 200433 华东理工大学生物反应器国家重点实验室上海 200237

破骨细胞形成抑制因子(OCIF或称OPG)可通过抑制破骨细胞形成、抑制成熟破骨细胞活性并诱导其凋亡实现对骨密度的调节，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。骨质疏松症、Paget’s病、癌症骨转移等导致的骨破坏都与破骨细胞分化增殖异常活... 详细信息

破骨细胞形成抑制因子(OCIF或称OPG)可通过抑制破骨细胞形成、抑制成熟破骨细胞活性并诱导其凋亡实现对骨密度的调节，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员。骨质疏松症、Paget’s病、癌症骨转移等导致的骨破坏都与破骨细胞分化增殖异常活跃和骨吸收过量密切相关，因此，OCIF研究将为这些骨骼类疾病的预防和治疗提供帮助。本研究在获得OCIF活性结构域(OCIFAD)克隆与表达基础上，进一步考察了实现发酵罐高密度发酵表达可溶性OCIFAD融合蛋白的各种参数，实现了高表达。

关键词：高密度发酵多肽融合蛋白肿瘤坏死因子超家族成员破骨细胞

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浙江舟山群岛12种海洋动物中生命活性物质的初步筛选

浙江舟山群岛12种海洋动物中生命活性物质的初步筛选

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全国首届海洋生物化学与分子生物学学术会议暨全国第五届海洋生命活性物质与天然生化药物学术研讨会

作者：范秋领黄才国缪辉南焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海 200237 中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海 200433

海洋是一个低温、高盐、高压、缺氧、缺少光照的特殊环境，在这样的环境中生存的生物能代谢产生与陆地生物不同的新颖的生命活性物质，它们具有抗肿瘤、抗菌、抗真菌、抗病毒、抗心脑血管疾病、抗艾滋病等作用，借助于各种药物筛选、分... 详细信息

海洋是一个低温、高盐、高压、缺氧、缺少光照的特殊环境，在这样的环境中生存的生物能代谢产生与陆地生物不同的新颖的生命活性物质，它们具有抗肿瘤、抗菌、抗真菌、抗病毒、抗心脑血管疾病、抗艾滋病等作用，借助于各种药物筛选、分离手段，目前已从海洋生物中发现具有重要生理及药理活性的化合物上千种，这些化合物包括甾醇、萜类、皂甙、聚醚、大环内酯、脂肪酸、多糖、生物碱、环肽、蛋白质等类型，其中Bryostatin 1、Dolastatin 10等已进入临床试验。我国浙江舟山群岛有丰富的海洋资源，本文从舟山采集到12种海洋动物，利用多种活性筛选模型对其粗提物进行活性筛选，从中筛选出几种具有不同生物活性的物种，为进一步分离提取奠定了基础。

关键词：海洋动物活性物质生命活性药理活性海洋资源

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鲨鱼肝刺激物的促肝细胞增殖和抗急性肝损伤作用

鲨鱼肝刺激物的促肝细胞增殖和抗急性肝损伤作用

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全国首届海洋生物化学与分子生物学学术会议暨全国第五届海洋生命活性物质与天然生化药物学术研讨会

作者：范秋领金艳黄才国魏善建焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海 200237 中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海 200433

鲨鱼是海洋生物资源中重要的物种，鲨鱼软骨中抗肿瘤活性物质在美国己进入临床试验，鲨鱼免疫球蛋白基因及其产物的结构与人类存在一定的同源性，表明鲨鱼组织提取物有可能用于提高和改善人类机体免疫状况。我们用LaBrecque等的提取方... 详细信息

鲨鱼是海洋生物资源中重要的物种，鲨鱼软骨中抗肿瘤活性物质在美国己进入临床试验，鲨鱼免疫球蛋白基因及其产物的结构与人类存在一定的同源性，表明鲨鱼组织提取物有可能用于提高和改善人类机体免疫状况。我们用LaBrecque等的提取方法从幼鲨肝脏中提取了一种活性蛋白，通过研究证明其能够促进肝癌细胞HepG 2的增值，促进其DNA的合成，我们认为这是存在于幼鲨肝脏中的肝刺激物(sHSS)。为了进一步证实其功能，本文探讨了其对小鼠急性肝损伤的保护作用。

关键词：鲨鱼肝刺激物肝细胞细胞增殖抗急性肝损伤海洋生物

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蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO,IL-1及IL-6的影响

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中国药学杂志 2003年第5期38卷 345-348页

作者：张巧艳秦路平田野苹郑汉臣黄宝康刘祖德黄矛第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部免疫学教研室上海200433 第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433

目的　以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法　原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶... 详细信息

目的　以新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型 ,观察蛇床子总香豆素对成骨细胞产生NO ,IL 1和IL 6的影响。方法　原代培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞 ,3 H 胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞的增殖 ;Griess试剂法、小鼠胸腺细胞增殖法和用B9细胞作为靶细胞的生物测定法 ,分别检测与蛇床子总香豆素共育的无刺激或受LPS及TNF等刺激的成骨细胞培养上清液中NO ,IL 1和IL 6的含量。结果　蛇床子总香豆素在 0 .0 2 5～ 2 .5mg·L-1的范围内抑制成骨细胞自发地或在LPS及细胞因子刺激下产生NO ,IL 1及IL 6。结论　蛇床子总香豆素的抗骨质疏松作用与其抑制成骨细胞产生NO ,IL 1和IL

关键词：蛇床子总香豆素成骨细胞 NO IL—1 IL—6 骨质疏松

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N-硝基-L-精氨酸抗阿片类精神依赖作用

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中国药学杂志 2003年第1期38卷 25-28页

作者：万兴旺黄矛何雅琴李万亥万莉路长林第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院国际合作生物信号转导研究中心上海200438 第二军医大学药学院药理学教研室上海200433 第二军医大学长海医院药学部上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在吗啡、二氢埃托啡精神依赖形成中的作用。方法　采用小鼠腹腔注射吗啡、二氢埃托啡的方法建立小鼠精神依赖的条件性位置偏爱模型 ;采用荧光内过滤法测定小鼠脑内NO的含量 ;小鼠脑内cAMP/cGMP含... 详细信息

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在吗啡、二氢埃托啡精神依赖形成中的作用。方法　采用小鼠腹腔注射吗啡、二氢埃托啡的方法建立小鼠精神依赖的条件性位置偏爱模型 ;采用荧光内过滤法测定小鼠脑内NO的含量 ;小鼠脑内cAMP/cGMP含量采用放射免疫法测定。结果　小鼠吗啡、二氢埃托啡精神依赖形成过程中脑内NO ,cAMP ,cGMP的含量显著上升 ;腹腔注射NO2 Arg 5mg·kg- 1 可抑制吗啡、二氢埃托啡精神依赖升高小鼠脑内NO ,cAMP ,cGMP含量的作用。结论　NO在易化阿片类药物精神依赖形成中可能有一定作用 ;NO2 Arg抑制吗啡。

关键词：吗啡二氢埃托啡精神依赖一氧化氮

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镉暴露大鼠睾丸支持细胞金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 965-968页

作者：任绪义周雍张建鹏仲燕冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸... 详细信息

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸支持细胞和肝脏组织的分离 .采用RT PCR技术分析mRNA ,并用光密度扫描作半定量分析 ,蛋白质定量用ELISA方法 ,原子分光光度吸收法测定镉浓度 .结果显示 :镉暴露 1h后肝脏MTmRNA即有明显的诱导表达 ,3h达高峰 ;支持细胞也有明显的诱导表达 ,6h达高峰 .镉暴露后肝脏MT有明显的诱导表达 ,但睾丸支持细胞不但未见MT增加而且还稍有下降 .提示 :a 镉对MTmRNA的诱导表达具有时间依赖性和组织特异性 .b 镉虽然能诱导睾丸MT的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸组织镉损伤

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硝酸银耳蜗光镜制片改做透射电镜样品的方法

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 936-936,940页

作者：张琰敏刁明芳颜永碧第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

耳蜗标本的电镜制备难度较大，很难做出理想的标本。有关显示和制作耳蜗电镜标本方面的文章虽有很多，但大疗分资料是描述如何修正耳蜗螺旋器方向的定向、定位。本文介绍了同一份耳蜗标本，光镜观察与电镜观察相结合的样品制备方法。

关键词：硝酸银耳蜗光镜制片透射电镜

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