检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第4期24卷 434-436页

作者：尚永一曹志中周中华沙继宏武警内蒙古总队医院口腔科呼和浩特010031 第二军医大学长海医院口腔科基础医学部细胞生物学教研室

目的:评价4种根管充填材料的根管密封性能,分析其影响因素。方法:收集新鲜拔除的人完整前牙40颗,随机分成4组,每组10颗牙,分别用氧化锌丁香油糊剂、Vitapex糊剂、Cortisomol糊剂、AH—Plus糊剂加牙胶尖以侧压法进行根管充填。每组随机选... 详细信息

目的:评价4种根管充填材料的根管密封性能,分析其影响因素。方法:收集新鲜拔除的人完整前牙40颗,随机分成4组,每组10颗牙,分别用氧化锌丁香油糊剂、Vitapex糊剂、Cortisomol糊剂、AH—Plus糊剂加牙胶尖以侧压法进行根管充填。每组随机选5颗牙经染色后行微渗漏长度测量;男5颗牙行扫描电镜测量根管壁与根管糊剂间微缝隙宽度。结果:氧化锌丁香油糊剂组、Vitapex糊剂组、Cortisomol糊剂组及AH—Plus糊剂组微渗漏均值分别为(3.04±1.30)、(0.74±0.49)、(0.87±0.44)、(0.60±0.26)mm,微缝隙均值分别为(11.70±5.95)、(3.05±2.75)、(1.55±1.75)、(1.95±1.00)μm,氧化锌丁香油糊剂组微渗漏和微缝隙两项均值显著高于其他各组(P<0.05),其余各组间均值比较无统计学意义。结论:氧化锌丁香油糊剂作为根管糊剂逐渐被淘汰,急需我国自行研制新型根管充填材料。

关键词：根管充填材料密封性比较微渗漏微缝隙氧化锌丁香油糊剂 Vitapex糊剂Cortisomol糊剂 AH—P1us糊剂

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新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建

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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 298-302页

作者：沈毅珺潘卫易进华徐容陈秋莉潘欣冯春芝邓松华戚中田刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 上海复旦张江生物医药股份有限公司安徽医科大学病理生理学教研室

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 详细信息

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。

关键词：噬菌体展示噬菌粒载体多克隆位点多肽接头

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细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会

目的:探索应用细菌双杂交体系统在细胞外蛋白质之间相互作用分析的可行性。方法:应用StratageneBacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达表达质粒;以pBT构建编码DR4,DR5,OPG等的细胞外区域序... 详细信息

目的:探索应用细菌双杂交体系统在细胞外蛋白质之间相互作用分析的可行性。方法:应用StratageneBacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达表达质粒;以pBT构建编码DR4,DR5,OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-BlueMRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500(g/ml以上)筛选下宿主菌

关键词：细菌双杂交系统半乳糖苷酶共转化羧苄青霉素激活状态外区域宿主菌

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大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

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第二军医大学学报 2003年第5期24卷 521-523页

作者：张旭静钱国正范柳王春安王桂清上海市脑血管病防治研究所上海200433 第二军医大学长海医院生物医学工程研究室上海200433 基础医学部生理学教研室

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14 d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养,采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary... 详细信息

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14 d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养,采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)的表达,同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力,并表达神经巢蛋白,分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原,为中枢神经系统的干细胞。

关键词：大鼠胚胎神经干细胞细胞培养细胞鉴定细胞分离

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因A3243G点突变对其亮氨酰化活性的影响

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遗传 2003年第4期25卷 383-387页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永韩伟国焦炳华中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

化学法合成人线粒体野生型与A3243G点突变型tRNA^(Leu(UUR))基因,体外转录生成相应的tRNA^(Leu(UUR)),表达并纯化人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS),用mtLeuRS催化野生型与突变型tRNA^(Leu(UUR))与亮氨酸结合,分别检测两种类型tRNA^(Leu(UUR))的氨酰化动力学常数。结果表明,野生型tRNA^(Leu(UUR))的K_m/K_(cat)仅为突变型tRNA^(Leu(UUR))的63.9％,A3243G点突变使tRNA^(Leu(UUR))接受亮氨酸的能力明显下降,提示此为A3243G点突变致病机制之一。

关键词：人线粒体tRNA^Leu(UUR) 基因点突变氨酰化

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人线粒体亮氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及其动力学研究(英文)

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1081-1085页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融... 详细信息

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力。作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成。结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白。通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍。经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR)。反应的亲和常数(Km)为16.67μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17s-1。结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化。

关键词：线粒体亮氨酰tRNA合成酶基因表达动力学纯化酶促动力学参数

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脊髓火器伤后GDNFmRNA表达的实验研究

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实用医药杂志 2003年第11期20卷 838-840页

作者：宋海涛贾连顺陈哲宇陈坚刘传云何成 107医院济南军区创伤骨科中心山东烟台264002 第二军医大学长征医院骨科第二军医大学基础医学部神经生物学教研室第二军医大学海医系军队卫生教研室上海200003

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤... 详细信息

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤后表达逐渐减少,伤后1、4、7、10d分别减少25%、71%、82%、86%。结论脊髓GDNFmRNA表达减少,是由于失去靶组织转运GDNFmRNA所造成,这为外源性GDNF治疗脊髓火器伤提供了理论依据。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子射钉枪脊髓火器伤基因表达

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用细胞化学显示神经运动终板的电镜标本制备

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 4-4页

作者：颜永碧陆月良王英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

显示和制作神经的方法有很多，大部分是光镜资料，而最镜制作方法很少~[1，2]。本文介绍用同一束有神经运动终板的肌肉标本，即做光镜水平的乙酰胆碱脂检测，又能做最镜细胞化学和超微结构观察的方法

关键词：电镜标本制备神经运动终板肌纤维细胞化学电子显微镜

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人生长激素基因组DNA在家蚕BmN细胞中的瞬时表达

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 765-768页

作者：张昕泂胡惠民董良陆长德第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海200031

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印... 详细信息

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印迹分析鉴定表达产物 ;将全长基因序列、缺失第 1内含子基因序列和 c DNA序列的表达载体 ,分别转染细胞后检测各片段表达产物之间的差异。结果 :测序结果表明人生长激素基因组 DNA在细胞内正确转录、剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌蛋白质。 EL ISA检测发现 3种基因片段中 ,全长的基因序列在表达效果上要高于后两者 (P<0 .0 5 ) ,其中缺失第 1内含子的序列表达效率较 c DNA序列明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :在家蚕细胞中能够正确表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因 ;

关键词：人生长激素基因组 DNA 家蚕 BmN细胞瞬时表达基因表达

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YFP-CD18融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

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生物技术 2003年第4期13卷 4-6页

作者：严鸣毛积芳钟纪根何健朱秋峰徐仁宝基础医学部病理生理学教研室基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院急救科长征医院麻醉科第二军医大学上海200433

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载... 详细信息

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载体 ,并将其转染至U937细胞株中进行表达。通过荧光显微镜观察转染成功后的U937细胞黄色荧光是否存在 ,以及流式细胞术检测确定PMA刺激后YFP -CD18活化后可否由胞浆内转位至膜上和测定PMA活化前后转染的U937细胞与其配基ICAM - 1粘附活性的变化等方面来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,pYFP -CD18构建正确 ,转染U937细胞株后 ,可见YFP -CD18融合蛋白发出的黄色荧光。结论 :构建完成YFP -CD18融合基因并可以在U937细胞株中进行表达。

关键词： YFP CD18 融合蛋白 U937细胞株表达黄色荧光蛋白

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