检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第3期23卷 254-256页

作者：张志珍毛积芳杨生生窦鸿第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶... 详细信息

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P-

关键词：高密度培养人胰高血糖素样肽-1 基因表达融合蛋白质类大肠杆菌强降血糖肽

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重组人可溶性VEGI在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 140-142页

作者：娄永华焦炳华肖扬朱玉平王梁华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DN... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DNA测序证实后亚克隆入高表达载体 p L OU- 1,转化大肠杆菌 BL 2 1,获得高表达菌株。经 IPTG诱导获得高表达 ,纯化表达产物并检测其对内皮细胞 ECV30 4增殖的抑制活性。结果 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,约占细菌总蛋白的 4 0 % ;纯化的重组蛋白经复性后具有直接抑制内皮细胞增殖的活性。结论 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,且表达的重组蛋白具有抑制内皮细胞生长作用。

关键词：血管内皮聚合酶链反应血管生长抑制因子基因表达重组人可溶性VEGI 大肠杆菌

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外周血单核细胞LIGHT的诱导表达及基因克隆

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 129-131页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因... 详细信息

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因转录表达。采用 PCR产物直接克隆法克隆人全长 L IGHT基因及其胞外区编码基因 ,并对胞外区编码基因进行大肠杆菌表达。结果 :当用 IFN-γ和 PMA刺激 PMBC后 4 8h,可诱导 L IGHT基因的明显表达 ,而 L PS、IL - 2和 TNFα则不能诱导。克隆的人 L IGHT全长基因及 L IGHT胞外区编码基因 ,经过 DNA序列测定证实基因序列与文献报道一致。 L IGHT基因胞外区在大肠杆菌获得一定程度的表达。结论 :本研究对人 L IGHT基因及其胞外区编码基因进行了克隆和表达。

关键词： LIGHT TNF超家族外周血单核细胞 RT-PCR 基因克隆基因表达

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重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外活性作用的研究

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 261-263页

作者：倪之嘉潘卫王元和戚中田傅宏傅志仁王强第二军医大学长征医院普通外科上海200003 第二军医大学长征医院基础医学部微生物学教研室

目的 :研究表达人内皮细胞抑制素 ( endostatin)的腺病毒载体的体外活性作用。方法 :用重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外转染人结肠癌 SW62 0细胞 ,观察肿瘤细胞生长情况 ,并观察其上清对大鼠肺毛细血管内皮细胞、新生牛主动脉内皮... 详细信息

目的 :研究表达人内皮细胞抑制素 ( endostatin)的腺病毒载体的体外活性作用。方法 :用重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外转染人结肠癌 SW62 0细胞 ,观察肿瘤细胞生长情况 ,并观察其上清对大鼠肺毛细血管内皮细胞、新生牛主动脉内皮细胞及人脐静脉内皮细胞生长的影响。结果 :MTT法检查证实重组腺病毒对结肠癌细胞生长无抑制 ,锥虫蓝染色证实转染的人结肠癌 SW62 0细胞上清对各种血管内皮细胞的生长均有较强的抑制作用。结论 :重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外对各种血管内皮细胞生长均有较强的抑制作用。

关键词：重组人内皮细胞抑制素腺病毒科血管内皮体外活性

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乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1184-1187页

作者：熊俊訾晓渊姚玉成金艳花李建秀朱海英王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后,... 详细信息

目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后,琼脂糖电泳回收目的片段,用原核显微注射法将其注射入雄原核,制备转基因小鼠。复合PCR法在基因组水平筛选HBx基因转基因小鼠founder;免疫组织化学法在蛋白水平检测X蛋白在这些小鼠中的表达情况。结果:成功构建了HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后,出生并存活了11只新生鼠,经PCR检测后获得5只founder转基因小鼠,命名为C57-TgN(HBx)SMMU。免疫组织化学检测发现5只PCR阳性小鼠的肝细胞质中均有X蛋白的表达。将这5只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配,进行传代培育,复合PCR法筛选阳性转基因小鼠,目前已传至F4代。结论:本研究成功地产生了稳定遗传HBx基因并表达X蛋白的转基因小鼠C57-TgN(HBx)SMMU,它将有利于体内研究HBx基因在肝细胞癌发生中的作用。

关键词：乙型肝炎病毒 X蛋白转基因小鼠 HBx基因

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带腓浅神经营养血管的远端蒂筋膜皮下组织瓣修复足背缺损

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 321-323页

作者：张世民侯春林廖进民第二军医大学长征医院骨科上海200003 第一军医大学基础医学部解剖学教研室

目的 :报告带腓浅神经营养血管的远端蒂筋膜皮下组织瓣的血管解剖和临床应用研究。方法 :通过对 3 2侧固定的下肢标本和 4侧新鲜下肢标本的解剖学研究 ,观察腓浅神经的血供来源及其与小腿筋膜皮肤血供的相互关系。临床上设计带腓浅神... 详细信息

目的 :报告带腓浅神经营养血管的远端蒂筋膜皮下组织瓣的血管解剖和临床应用研究。方法 :通过对 3 2侧固定的下肢标本和 4侧新鲜下肢标本的解剖学研究 ,观察腓浅神经的血供来源及其与小腿筋膜皮肤血供的相互关系。临床上设计带腓浅神经营养血管的小腿前方筋膜皮下组织瓣 ,翻转修复 5例足背创伤缺损。结果 :腓浅神经由腓浅动脉伴行。在小腿的下1/3段 ,腓浅动脉变细成交织的血管丛 ,并得到胫前动脉肌间隙穿支、腓动脉外踝上穿支和足背动脉回返支的加强 ,在小腿深筋膜表面和皮下组织中 ,形成丰富的深筋膜和皮神经链式吻合纵向血管丛。据此设计带腓浅神经营养血管的远端蒂筋膜皮下组织瓣 ,翻转 180°修复足背创面 5例 ,组织瓣面积 ( 10～ 14 ) cm× ( 4～ 5 ) cm ,蒂宽 3～ 4 cm ,均完全成活。结论 :带腓浅神经营养血管的远端蒂筋膜皮下组织瓣 ,血供丰富 ,方法简单。

关键词：外科皮瓣皮神经营养血管腓浅神经足背小腿

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成体小鼠肝干细胞的长期体外培养和体内分化研究

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1166-1168页

作者：苏娟朱海英李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长... 详细信息

目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长,不仅可稳定传代,而且移植至经致死剂量照射的小鼠体内能够形成脾结节,结节中含有肝细胞和胆管上皮细胞特异性标志的细胞。结论:成体小鼠肝脏中存在具有多潜能性的肝干细胞,该细胞的体外成功培养为肝干细胞生物学特性的研究及肝干细胞的应用奠定了基础。

关键词：肝干细胞体外培养体内分化

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骨髓细胞多向分化潜能的初步研究

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1172-1174页

作者：朱海英苏娟李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-... 详细信息

目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-cre基因的分布及表达情况。结果:PCR和免疫组化分析结果均显示,供体细胞的两个标志sry及Mx-cre在受体鼠的肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等多个器官中都有表达。结论:骨髓细胞不仅可以重建受致死剂量照射受体鼠的造血系统,而且具有分化为肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等组织细胞类型的多向潜能性。

关键词：骨髓细胞造血干细胞细胞分化

来源：评论

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干细胞样肝原始细胞的体外分化

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1169-1171页

作者：熊俊姚玉成訾晓渊李文林朱海英王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中... 详细信息

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中的形态学变化并用显微摄影记录结果,最后利用免疫细胞化学分析鉴定分化后细胞的性质。结果:干细胞样肝原始细胞集落在体外培养时可形成类似肝小叶的形状,集落中央大部分细胞分化成双核细胞,集落周边细胞仍为单核细胞,但体积明显增大,整个集落中的细胞呈放射状排布。分化后,细胞群中的部分细胞表达成熟肝细胞标志白蛋白(albumin),少部分细胞表达胆管上皮细胞标志细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19),但所有细胞均不表达低分化肝细胞标志α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)。结论:干细胞样肝原始细胞在体外具有多向分化能力,可分化为表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞标志的细胞。

关键词：干细胞样肝原始细胞肝干细胞细胞培养体外分化

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白细胞介素6与早产诊断

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第二军医大学学报 2002年第7期23卷 796-797页

作者：朱萍沙金燕孙刚第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部生理学教研室上海200433

宫内感染是引起早产的重要因素之一。近年的研究发现白细胞介素 6 (IL - 6 )与早产关系密切。羊水中 IL - 6作为一项敏感的生物指标可预测亚临床感染性早产 ,高水平羊水 IL - 6预示保胎失败 ;宫颈分泌物 IL - 6浓度的测定 ,可以非侵袭... 详细信息

宫内感染是引起早产的重要因素之一。近年的研究发现白细胞介素 6 (IL - 6 )与早产关系密切。羊水中 IL - 6作为一项敏感的生物指标可预测亚临床感染性早产 ,高水平羊水 IL - 6预示保胎失败 ;宫颈分泌物 IL - 6浓度的测定 ,可以非侵袭性预测内膜感染性早产 ,从而及时给予治疗。血清 IL - 6浓度升高 ,是预测早产和感染的一个可靠标志 ,并具有非侵入性和可重复性等优点。

关键词：白细胞介素6 早产诊断子宫内膜炎

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