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中国肿瘤生物治疗杂志 2010年第5期17卷 531-535页

作者：韩国胜刘建民岳志健胡小吾盛伟华缪竞诚汪小华杨吉成第二军医大学附属长海医院神经外科上海200433 苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的:研究腺病毒介导IL-24基因表达载体(Ad-IL-24)对人脑胶质瘤U87MG细胞的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法:将本科室构建的Ad-IL-24感染U87MG细胞,RT-PCR法检测IL-24基因的表达,MTT法和流式细胞术检测U87MG细胞的生长和凋亡,激光共... 详细信息

目的:研究腺病毒介导IL-24基因表达载体(Ad-IL-24)对人脑胶质瘤U87MG细胞的抑制作用,初步探讨其作用机制。方法:将本科室构建的Ad-IL-24感染U87MG细胞,RT-PCR法检测IL-24基因的表达,MTT法和流式细胞术检测U87MG细胞的生长和凋亡,激光共聚焦显微镜观察U87MG细胞凋亡的形态学变化,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2基因mRNA的表达,Western blotting检测caspase-3的活化。结果:Ad-IL-24感染U87MG细胞后,IL-24在U87MG细胞中有明显表达,并抑制U87MG细胞生长、诱导其凋亡、出现典型的凋亡细胞核形态学改变。Ad-IL-24可上调U87MG细胞中Bax基因、下调Bcl-2基因的表达,并诱导caspase-3蛋白的活化。结论:Ad-IL-24可诱导U87MG细胞凋亡,其机制可能与上调Bax基因、下调Bcl-2基因表达,并活化caspase-3有关。

关键词：腺病毒白介素-24 人脑胶质瘤 U87MG细胞凋亡

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低氧和糖皮质激素上调stomatin的表达及其可能的生物学意义

低氧和糖皮质激素上调stomatin的表达及其可能的生物学意义

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中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议

作者：陈继承蔡浩昱马媛媛王燕卢建第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

目的:已知糖皮质激素(GC)对低氧导致的肺损伤和肺水肿有明显的治疗作用。Stomatin是一种膜上的脂筏蛋白,该蛋白具有脚手架功能,推测能与多种膜蛋白,如离子通道、转运子、骨架蛋白和信号转导蛋白等结合,并影响其功能。本研究的目的是观... 详细信息

目的:已知糖皮质激素(GC)对低氧导致的肺损伤和肺水肿有明显的治疗作用。Stomatin是一种膜上的脂筏蛋白,该蛋白具有脚手架功能,推测能与多种膜蛋白,如离子通道、转运子、骨架蛋白和信号转导蛋白等结合,并影响其功能。本研究的目的是观察低氧以及低氧联合糖皮质激素对Stomatin表达的影响,进而探讨Stomatin是否参与了GC对低氧的保护作用。方法:正常清洁级雄性SD大鼠,体重250～300g,随机分组,低氧组放入含有8%氧气的混合气的低氧舱中,出舱后即麻醉大鼠取材,肺腺癌细胞A549去激素低糖培养液处理后放入含1%氧气的混合气的低氧舱中处理不同的时间,实时定量PCR和Western Blot分别检测大鼠肺组织中stomatin mRNA和蛋白的表达。结果:本研究表明糖皮质激素(GC)能剂量和浓度依赖性地上调人肺癌细胞A549细胞stomatin的表达,该作用通过糖皮质激素受体介导。低氧也能明显上调A549细胞和大鼠肺组织中stomatin的表达,低氧上调stomatin的作用在去除肾上腺大鼠的肺组织中仍然存在,表明该作用不依赖于GC。进一步实验发现GC和低氧联合作用时,上调stomatin的作用明显强于二者的单独作用,表明二者具有协同或叠加效应。实验还显示大鼠低氧暴露后stomatin的表达水平与肺水肿的严重程度呈负相关,推测stomatin有可能通过稳定肺上皮细胞骨架和提高肺上皮屏障功能防止低氧肺损伤和肺水肿的发生和发展,进一步研究正在进行之中。

关键词：低氧糖皮质激素 stomatin

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低氧和糖皮质激素上调GILZ的表达及可能的意义

低氧和糖皮质激素上调GILZ的表达及可能的意义

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中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议

作者：王燕马媛媛蔡浩昱卢建第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

目的:低氧导致的组织损伤与炎症反应密切相关。已证实机体对低氧损伤的习服与适应受糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的影响。在低氧条件下分泌增多的GC能通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的介导,调节基因表达,但是至今对... 详细信息

目的:低氧导致的组织损伤与炎症反应密切相关。已证实机体对低氧损伤的习服与适应受糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的影响。在低氧条件下分泌增多的GC能通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的介导,调节基因表达,但是至今对于参与了低氧适应的糖皮质激素/受体(GC/GR)的靶基因还知之不多。糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(Glucocorticoid inducedleucine zipper,GILZ)是近年来发现的GC/GR靶蛋白,因其具有与GC类似的免疫抑制、抗炎、抑制细胞增殖等功能,被认为是GC作用的重要介导子,本研究的目的是观察低氧以及低氧联合糖皮质激素对GILZ表达的影响,进而探讨GILZ是否参与了GC对低氧的保护作用。方法:正常清洁级雄性SD大鼠,体重250～300g,随机分组,低氧组放入含有8%氧气的混合气的低氧舱中,出舱后即麻醉大鼠取材,小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7去激素低糖培养液处理后放入含1%氧气的混合气的低氧舱中处理不同的时间,实时定量PCR和Western Blot分别检测大鼠脾脏组织和RAW264.7细胞中GILZ mRNA和蛋白的表达。结果:1、大鼠低氧处理8h GILZ mRNA表达水平就明显增高,为对照大鼠的2.2倍(p<0.05),之后逐渐降低,但是24h组的表达水平仍高于对照,为对照的1.6倍(p<0.05)。用Western blot方法检测低氧处理不同时间组大鼠脾组织GILZ蛋白表达得到了相似的结果。2、单纯去腺组大鼠GILZ mRNA的水平降低至假手术组大鼠的44%(p<0.01),给去腺大鼠肌注Dex处理后,其脾脏GILZ的mRNA明显增高,约为去腺大鼠的13倍(p<0.01);去腺低氧组与单纯去腺组相比GILZ的mRNA变化不明显,但去腺后Dex联合低氧处理组大鼠脾组织中GILZ的mRNA表达显著高于去腺低氧组,约为去腺低氧组的10倍(p<0.01),也明显高于去腺Dex组,约为去腺Dex组的1.4倍(p<0.05)。蛋白水平的检测得到相似的结果。3、低氧能浓度依赖性的上调RAW264.7细胞中GILZ的表达,12h达高峰为对照的2.5倍,低氧和Dex联合能协同上调GILZ的表达,约5.8倍左右.结论:低氧能单独上调GILZ的表达,也能协同GC上调GILZ的表达,体内实验中,低氧上调GILZ的表达需要GC存在。可能的生物学意义在进一步探讨中。

关键词：低氧糖皮质激素 GILZ

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医学细胞生物学实验教学改革的探索与实践

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2010年第1期12卷 49-52页

作者：何志颖朱海英陈元晓訾晓渊谢东甫胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 昆明医学院细胞生物学及遗传学教研室

突出细胞生物学实验课教学的主体地位,实验课课程设置以验证性实验、综合性实验及创新性实验相结合,激发学生的积极性和主观能动性,培养学生的创新思维和分析问题解决问题的综合实践能力,取得了良好的教学效果。

关键词：细胞生物学实验课教学改革

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迷走神经背核微量注射生长抑素对大鼠胰腺内神经元活性的影响

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温州医学院学报 2010年第2期40卷 145-148页

作者：陈小燕蔡振寨满晓华王伟忠李兆申温州医学院附属第二医院消化内科浙江温州325027 第二军医大学附属长海医院消化内科上海200433 第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的:观察迷走神经背核(dorsal motor nucleus,DMN)微量注射生长抑素(somatostatin,SS)对大鼠胰腺内神经元c-fos表达的影响。方法:取体质量250～300g健康雄性SD大鼠12只,随机分为两组:实验组(n=6)DMN微量注射100nL浓度为0.4μg/mL的SS,... 详细信息

目的:观察迷走神经背核(dorsal motor nucleus,DMN)微量注射生长抑素(somatostatin,SS)对大鼠胰腺内神经元c-fos表达的影响。方法:取体质量250～300g健康雄性SD大鼠12只,随机分为两组:实验组(n=6)DMN微量注射100nL浓度为0.4μg/mL的SS,对照组(n=6)DMN微量注射100nL的人工脑脊液(aCSF)。两组均予20%脂肪乳液行十二指肠灌注1h后,取大鼠胰腺标本行c-fos的免疫组化染色。结果:DMN注射SS组大鼠胰腺内c-fos免疫阳性神经纤维阳性面积(6122.5±1410.0vs1875.8±992.0)和阳性指数(0.62±0.02vs0.26±0.07)均明显降低(P<0.01)。讨论:DMN微量注射外源性SS对大鼠胰腺内神经元有显著的抑制效应,说明DMN外源性SS通过抑制胰腺内神经元发挥对胰腺外分泌的抑制作用。

关键词：迷走神经背核生长抑素胰腺内神经元大鼠

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Ad—IL-24诱导U87-MG人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

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中华实验外科杂志 2010年第6期27卷 843-843页

作者：韩国胜刘建民盛伟华汪小华单云波杨吉成第二军医大学长海医院神经外科上海200433 苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，约占所有脑肿瘤的50％，目前多采用手术、放疗及化疗等常规疗法，但大部分患者预后不佳。我们利用已构建的腺病毒介导白细胞介素-24（IL-24）基因表达载体（Ad-IL-24），观察其对U87-MG人脑胶... 详细信息

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，约占所有脑肿瘤的50％，目前多采用手术、放疗及化疗等常规疗法，但大部分患者预后不佳。我们利用已构建的腺病毒介导白细胞介素-24（IL-24）基因表达载体（Ad-IL-24），观察其对U87-MG人脑胶质瘤细胞的生长抑制和凋亡作用，并探讨其分子机制。

关键词：人脑胶质瘤细胞瘤细胞凋亡 IL-24 Ad 中枢神经系统基因表达载体白细胞介素腺病毒介导

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红景天苷注射液遗传毒性的研究

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药学服务与研究 2009年第4期9卷 279-282页

作者：朱玉平张天宝万旭英马玺里田逸君郑怡文朱江波第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的:检测红景天苷注射液的遗传毒性。方法:应用微生物回复突变实验(Ames实验,5 000、500、50、5.0、0.5μg/皿)、体外培养CHO细胞染色体畸变实验(2 0001、000、500μg/mL)和小鼠骨髓微核实验法(1 500、750、375μg/kg)检测红景天苷注... 详细信息

目的:检测红景天苷注射液的遗传毒性。方法:应用微生物回复突变实验(Ames实验,5 000、500、50、5.0、0.5μg/皿)、体外培养CHO细胞染色体畸变实验(2 0001、000、500μg/mL)和小鼠骨髓微核实验法(1 500、750、375μg/kg)检测红景天苷注射液的遗传毒性。结果:红景天苷注射液对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对体外培养CHO细胞染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应,三个实验结果均呈阴性。结论:红景天苷注射液不具有遗传毒性。

关键词：红景天苷注射液遗传毒性试验 Ames实验染色体畸变实验微核实验

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Fah基因剔除小鼠在肝细胞移植中的应用及其病理学变化

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中国药科大学学报 2009年第6期40卷 553-558页

作者：苏宝亮刘长城李帅杨科何志颖胡以平王欣中国药科大学分析测试中心南京210009 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子细胞生物学重点实验室上海200031 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:观察外源成体肝细胞在Fah-/-小鼠肝脏中增殖的微观特性并对该小鼠模型肝脏损伤后的病理学变化进行研究。方法:野生型小鼠成体肝细胞经脾脏移植到Fah-/-小鼠后,观察移植Fah-/-小鼠的体重变化,生存状态及肝组织的Fah免疫组化和电镜... 详细信息

目的:观察外源成体肝细胞在Fah-/-小鼠肝脏中增殖的微观特性并对该小鼠模型肝脏损伤后的病理学变化进行研究。方法:野生型小鼠成体肝细胞经脾脏移植到Fah-/-小鼠后,观察移植Fah-/-小鼠的体重变化,生存状态及肝组织的Fah免疫组化和电镜观察以评价再殖效率和病理学变化。结果:Fah-/-小鼠的肝HE染色显示为亚急性损伤的病理特点。电镜观察显示,初期肝细胞坏死,凋亡现象随时间增多,随后有凋亡和坏死并存。而Fah-/-小鼠在NTBC[2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-环己烷-1,3-二酮]药物的治疗后,无明显病理学变化。肝细胞移植后的Fah-/-小鼠均健康存活,体重稳步上升。8周时可以达到90%以上再殖。肝脏生化指标恢复正常。结论:Fah-/-小鼠的肝脏损伤可以使移植的肝细胞90%以上的再殖,维持肝脏正常的组织结构,并发挥正常的肝细胞功能。Fah-/-小鼠作为肝脏再殖模型可用于干细胞肝向分化研究。

关键词： Fah基因剔除小鼠肝细胞移植再殖

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含核受体真核表达载体的构建及其转染真皮多能干细胞(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第40期13卷 7919-7924页

作者：王涛邱安春李露斯刘雁平屈纪富徐文岳解放军第三军医大学西南医院急救部重庆市400038 四川省隆昌县中医院骨二科四川省内江市642100 解放军第三军医大学西南医院神经内科重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基... 详细信息

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基因学实验,于2007-03/12在解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室完成。材料:成年SD大鼠1只,由解放军第三军医大学实验动物研究所提供;真皮多能干细胞由解放军第三军医大学全军复合伤研究所分离培养;质粒载体pEGFPN1及细菌DH5α由徐文岳教授惠赠。方法:首先以大鼠的大脑组织总RNA为模板,RT-PCR扩增出含核受体的编码cDNA序列,T/A克隆至pMDl8-T载体上,然后用BamHI、HindⅢ双酶切释放出经测序鉴定为阳性的重组质粒pMDl8-T-TLX中的含核受体片段,亚克隆到真核载体pEGFPN1中,从而构建真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,最后采用阳性脂质体将pEGFPN1-TLX转染到真皮多能干细胞中。主要观察指标:转染后24h荧光显微镜下观察绿色荧光,RT-PCR检测含核受体mRNA的表达,免疫组化染色观察向神经细胞的分化情况。结果:PCR、酶切和测序结果证明,成功地将含核受体全长cDNA克隆到pEGFPN1质粒中,并成功构建pEGFPN1-TLX重组质粒。与未转染真皮多能干细胞相比,10d后可见pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞继续生长,并于15d时形成抗性克隆,荧光显微镜下有绿色荧光蛋白表达;而未转染的真皮多能干细胞10d时已全部死亡。RT-PCR结果显示,pEGFPN1-TLX转染真皮多能干细胞表达TLXmRNA。诱导后3d与单纯真皮多能干细胞比较,pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞诱导成NF200阳性细胞数明显增加,诱导成GFAP阳性细胞数明显减少。结论:实验成功构建含核受体真核表达载体,并成功转染了真皮多能干细胞。转染后能明显提高真皮多能干细胞向神经元分化的效率,而向胶质细胞分化受到抑制。

关键词：核受体含核受体克隆真皮多能干细胞

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结核抗原特异性CD4^＋中央型记忆T细胞的检测及分布特性研究

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第三军医大学学报 2009年第16期31卷 1549-1551页

作者：牛翰婕程小星王心静曹志红董梅佟爱华第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 解放军总医院第二附属医院结核病研究室北京100091 解放军总医院第二附属医院检验科北京100091

目的比较活动期肺结核患者和纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验阳性健康人记忆T细胞的产生和分布特性。方法取乙二胺四乙酸(ethylene diaminete traacetic acid,EDTA)抗凝静脉血,Ficoll进行密度梯度离心获取PBMCs。采... 详细信息

目的比较活动期肺结核患者和纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验阳性健康人记忆T细胞的产生和分布特性。方法取乙二胺四乙酸(ethylene diaminete traacetic acid,EDTA)抗凝静脉血,Ficoll进行密度梯度离心获取PBMCs。采用卡介苗刺激后,通过CD4、CD154、CCR7、CD45RA4种抗体共染色,用流式细胞仪检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞。结果以CD4+CD154+双阳性区设门,研究结核抗原特异性CD4+记忆T细胞,结果显示,肺结核患者CD4+CD154+CD45RA-CCR7+中央型T淋巴细胞亚群分布频率显著降低(P<0.05),CD4+CD154+CD45RA+CCR7+初始T细胞亚群的比例明显增高(P<0.05)。结论肺结核患者CD4+中央型记忆T淋巴细胞亚群的产生存在异常,可能与免疫功能低下和结核病发病密切相关。

关键词：结核免疫 CD4^+T细胞记忆T细胞

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